復方香芪顆粒對白癜風模型豚鼠的藥效學研究Δ

周瑞瑞，毛士龍（上海市徐匯區中心醫院藥劑科，上海 200031）

白癜風是一種后天性色素減退性皮膚病，表現為局部性或泛發性色素脫失。該病發病率高、病程長且治愈率低。由于該病的發病機制尚不十分清楚[1]，且目前尚無滿意的治療方法，因此臨床迫切需要療效確切、不良反應小的新藥出現。

復方香芪顆粒原處方名為祛白方，是我院結合傳統醫學與現代醫學在對白癜風認識的基礎上創立的協定方，具有充分的理論依據，同時已在我院臨床應用20 多年，療效確切，故還具有充分的臨床實踐依據[2-3]。本研究擬探討復方香芪顆粒對白癜風模型豚鼠的藥效學作用，以為其臨床應用提供實驗依據。

1 材料

1.1 儀器

XD811 半自動生化分析儀（上海迅達醫療儀器有限公司）。

1.2 藥材、藥品與試劑

丹參、降香、白薇、紫草、蒼術、紅花、龍膽草、女貞子、白蒺藜、海螵蛸、甘草、龜板購于上海萬仕誠國藥制品有限公司，批號：20120506，符合2010版《中國藥典》的相關質量標準。

復方香芪顆粒（自制，規格：0.45 g/粒）、白癜風膠囊（天津宏仁堂藥業有限公司，批號：20110302，規格：0.45 g/粒），臨用前均用蒸餾水制備成相應質量濃度的溶液；丙二醛（MDA）測定試劑盒（批號：20120403）、膽堿酯酶（ChE）測定試劑盒（批號：20120305）均由南京建成生物工程研究所提供；過氧化氫溶液（上海桃浦化工廠，批號：20120402）。

1.3 動物

2 方法

2.1 復方香芪顆粒處方及提取、制粒方法

2.1.1 處方 丹參10 g、降香3 g、白薇10 g、紫草10 g、蒼術10 g、紅花6 g、龍膽草10 g、女貞子12 g、白蒺藜10 g、海螵蛸10 g、甘草6 g、龜板5 g。

2.1.2 提取、制粒 各中藥按處方比例用水提取，濃縮，用70%乙醇沉淀，上清液濃縮成浸膏，出膏率為23%。取提取物100 g，加入包合劑（環糊精）10 g、矯味劑（甜菊糖苷）3 g、成型劑（聚乳糖）5 g，攪拌，濾過，噴霧干燥，加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）2 g，干式制粒，整粒，即得產品。噴霧干燥的進風溫度為170 ℃、出風溫度為80 ℃，制得的粉粒含水分5%，直接干式制粒，制粒時物料溫度在60 ℃以下。

2.2 分組及模型制備[4]

2.3 給藥[5]

空白對照組和模型對照組從建模第11 天起用蒸餾水灌胃，每只2 ml，每天1次。白癜風膠囊組按人用推薦劑量（按照人體質量60 kg 計）換算成豚鼠的給藥劑量即50 mg/（kg·d）。復方香芪顆粒低、中、高劑量組分別為25、100、400 mg/（kg·d），其中劑量按人用推薦劑量而得。各藥物組溶于蒸餾水中給藥，體積均為2 ml。從建模第11天起灌胃給藥，每天1次，連續40 d。

2.4 病理學觀察

給藥結束后，取用藥部位中心1 cm×1 cm皮膚，用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片，用多巴氧化酶法[6]進行黑色素染色，隨意觀察50 個毛囊，計算其中黑色素毛囊數及皮膚黑色素的分布情況。表皮黑色素分布的等級：“+++”示表皮基底細胞及棘層均有黑色素；“++”示表皮基底細胞及棘層1/2 以上有黑色素；“+”示表皮基底細胞及棘層1/2～1/3 有黑色素；“±”示表皮基底細胞及棘層偶見黑色素；“-”示表皮基底細胞及棘層未見黑色素[7]。

2.5 ChE活性、MDA含量及血液流變學指標測定

末次給藥2 h后，各組豚鼠用3.5%水合氯醛（10 ml/kg）麻醉后腹主動脈取血，加入肝素抗凝管中離心得血漿，按照試劑盒操作測定血漿中ChE 活性、MDA 含量；另取血于生化分析儀中測定血液流變學指標。

2.6 統計學方法

3 結果

3.1 各組豚鼠皮膚黑色素分布及黑色素毛囊數觀察結果

與空白對照組比較，模型對照組豚鼠皮膚黑色素分布較少，黑色素毛囊數顯著減少，差異有統計學意義（P＜0.01），符合造模要求。與模型組比較，白癜風膠囊組及復方香芪顆粒低、中、高劑量組豚鼠黑色素的分布以及黑色素毛囊數均顯著增加（P＜0.05或P＜0.01），詳見表1。

表1 各組豚鼠黑色素分布及黑色素毛囊數觀察結果Tab 1 Distribution of melanin distribution of skin melanin and the number of black hair follicle in guinea pigs of each group

3.2 各組豚鼠血漿ChE、MDA檢測結果

與空白對照組比較，模型對照組豚鼠血漿ChE 活性顯著降低，MDA含量顯著升高，差異有統計學意義（P＜0.01），符合該模型的要求。與模型對照組比較，白癜風膠囊組及復方香芪顆粒低、中、高劑量組豚鼠血漿ChE活性升高、MDA含量降低，差異有統計學意義（P＜0.01），詳見表2。

表2 各組豚鼠血漿ChE、MDA檢測結果Tab 2 Determination results of plasma ChE and MDA in guinea pigs of each group

3.3 各組豚鼠血液流變學指標檢測結果

與空白對照組比較，模型對照組豚鼠血漿黏度、全血黏度及血細胞比容顯著升高，紅細胞沉降率顯著降低，差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01），符合白癜風臨床特征，表明造模成功。白癜風膠囊組及復方香芪顆粒中、高劑量組豚鼠血液黏度、全血黏度及血細胞比容顯著降低，紅細胞沉降率顯著升高，差異均有統計學意義（P＜0.05或P＜0.01），低劑量組豚鼠血漿黏度和全血黏度差異有統計學意義（P＜0.05），詳見表3。

4 討論

白癜風主要因先天稟賦不足、驚恐傷腎、郁怒傷肝、日久耗傷陰血、阻滯經脈，使局部氣血淤滯、致肌膚不得濡養所致，經過多年的發展，中醫對其已積累了豐富的臨床治療經驗[8-9]。白癜風膠囊含有補骨脂、蒺藜、川芎、當歸、紅花、香附等成分，在臨床已應用多年，為治療白癜風經典藥物[10-11]，故本研究將其作為陽性對照藥。現代醫學對白癜風的發病機制仍不十分清楚，但研究表明其與遺傳因素、自身免疫、神經化學因子、氧化應激、酪氨酸缺乏等有關[12]。筆者采用5%過氧化氫化學脫色法制備白癜風的豚鼠模型，模型對照組肉眼觀察及切片鏡下結果均符合白癜風患者皮膚臨床病理特征；血漿中ChE 活性降低、MDA 含量升高也符合現代醫學的神經化學因子、氧化應激學說[13]；全血及血漿黏度升高也符合中醫氣血淤滯之說，表明模型建立成功。

表3 各組豚鼠血液流變學指標檢測結果Tab 3 Determination results of hemorheology indexes in guinea pigs of each group

白癜風的發生與氧化應激有著密切的聯系[14]，表皮內活性氧族過度聚集使黑素細胞膜脂質不穩定，黑素細胞膜脂質合成及循環紊亂導致黑色素細胞被破壞。MDA 是脂質發生過氧化反應的終產物，為氧化應激發生的指標。Yildirim M等[15]發現白癜風患者活體組織中MDA水平較正常人顯著增加，也有學者提出白癜風患者體內氧化應激的失衡很有可能源于表皮細胞中心磷脂的組成與功能異常，其能導致線粒體電子傳遞鏈活性下降，繼而誘導活性氧族過度產生，介導脂質過氧化，誘導黑色素細胞的死亡。皮膚黑色素的合成涉及一系列的過程，在神經化學因子學說中，神經末梢分泌的化學物質如乙酰膽堿能夠在體外損傷黑色素細胞、抑制其合成[16]。ChE活力下降的時候，乙酰膽堿消除減少，在突觸間隙的含量增加，黑色素細胞的損傷增加[17-18]。

復方香芪顆粒原方中當歸、黃芪柔肝養血，健脾益氣，補后天之本以充氣血生化之源；補骨脂益腎填髓，其含有呋喃香豆素類物質，可提高皮膚對紫外線的敏感性，刺激黑色素細胞的形成，對酪氨酸酶的活性也有較強的激活作用；川芎、紅花、丹參行氣活血；白蒺藜、香附疏風祛邪以通絡，共奏調和氣血、活血化瘀之效。本研究結果顯示，復方香芪顆粒能顯著增加白癜風模型豚鼠皮膚黑色素的分布以及黑色素毛囊數，提高血漿中ChE的活性、降低MDA含量，同時改善血液循環，表明其對白癜風模型豚鼠相關指標具有良好的改善作用，并呈較好的量效關系。因此，本研究結果為該藥的臨床應用提供了較好的藥效學實驗依據。

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