羅格列酮對(duì)糖尿病模型兔體質(zhì)量、FPG及FFA等指標(biāo)的影響Δ

占日新，董 芳，來(lái)樂祥，張義林，華 銘（杭州市蕭山區(qū)第四人民醫(yī)院，杭州 311225）

羅格列酮（RH）是通過激活過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）來(lái)改善胰島素抵抗（IR）癥狀的，主要用于治療2 型糖尿病。PPARγ 改善機(jī)體胰島素敏感性的機(jī)制研究，近期也是醫(yī)藥界關(guān)注的熱點(diǎn)。美國(guó)有研究表明，敲除實(shí)驗(yàn)鼠脂肪細(xì)胞內(nèi)核受體共抑制因子（NCOR）可改善胰島素敏感性。NCOR 是轉(zhuǎn)錄因子輔助調(diào)節(jié)蛋白，是PPARγ的主要共抑制因子。敲除實(shí)驗(yàn)鼠脂肪細(xì)胞內(nèi)NCOR 后，PPARγ 磷酸化（p-PPARγ）受阻，最后導(dǎo)致肝臟、肌肉和脂肪胰島素敏感性增加[1]。PPARγ激動(dòng)藥RH 能降低2 型糖尿病患者空腹和餐后血糖而不引起低血糖[2]，因此臨床應(yīng)用廣泛。但隨著其廣泛應(yīng)用，其不良反應(yīng)也備受關(guān)注。RH 不良反應(yīng)主要表現(xiàn)為水腫、心力衰竭、體質(zhì)量增加、肝毒性。本研究以RH 的基本藥理作用為依據(jù)，進(jìn)一步探索其體質(zhì)量增加等不良反應(yīng)的機(jī)制。

1 材料

1.1 儀器

TDZ5-WS 型多管架自動(dòng)平衡離心機(jī)（湘儀離心機(jī)儀器有限公司）；680型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；HX2001T型電子天平（慈溪市天東衡器廠）；安穩(wěn)型三諾血糖儀（三諾生物傳感股份有限公司）。

1.2 藥品與試劑

RH鈉片（太極集團(tuán)涪陵制藥廠，批號(hào)：14010007，規(guī)格：每片4 mg）；四氧嘧啶（美國(guó)Sigma 公司，批號(hào)：BCBK4716V）；一氧化氮（NO）試劑盒（南京建成生物工程公司，批號(hào)：20140810）；血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（上海拜沃生物公司，批號(hào)：14122603）；右旋糖酐40 葡萄糖注射液（四川科倫藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：L20141003，規(guī)格：每500 ml含25 g葡萄糖、30 g右旋糖酐40）。

1.3 動(dòng)物

2 方法

2.1 分組與給藥

取18只兔適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，隨機(jī)均分為對(duì)照組、模型組、右旋糖酐組（n＝6），后2組兔iv四氧嘧啶70 mg/kg復(fù)制糖尿病模型，以空腹血糖（FPG）＞11.1 mmol/L為造模成功[3]。然后3組兔均ig RH 0.5 mg/kg[4]，其中右旋糖酐組同時(shí)尾iv右旋糖酐40葡萄糖注射液5 ml/kg[5]，每日1次，連續(xù)給藥3周。

2.2 指標(biāo)檢測(cè)

給藥期間觀察兔體質(zhì)量和生命體征狀況。末次給藥后禁食不禁水12 h，剪尾采血檢測(cè)FPG 水平；腹主動(dòng)脈采血，以離心半徑19 cm、4 000 r/min 離心10 min，分離血清，－20 ℃保存，備用。按試劑盒說明書操作，檢測(cè)各組兔血清中游離脂肪酸（FFA）、NO、AngⅡ水平。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 兔血清中FPG、FFA水平變化

與給藥前比較，對(duì)照組兔給藥后血清中FFA水平降低，模型組兔給藥后血清中FPG、FFA 水平降低，右旋糖酐組兔給藥后血清中FFA 水平增加。與對(duì)照組比較，模型組和右旋糖酐組兔給藥前、后血清中FPG、FFA 水平增加；與模型組比較，右旋糖酐組兔給藥后血清中FPG、FFA水平增加。以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。各組兔血清中FPG、FFA水平測(cè)定結(jié)果見表1。

表1 各組兔血清中FPG、FFA水平測(cè)定結(jié)果（，n＝6）Tab 1 The determination results of levels of FPG and FFA in all groups（，n＝6）

表1 各組兔血清中FPG、FFA水平測(cè)定結(jié)果（，n＝6）Tab 1 The determination results of levels of FPG and FFA in all groups（，n＝6）

注：與給藥前比較，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；與對(duì)照組比較，#P＜0.01；與模型組比較，ΔP＜0.01Note：vs.before medication，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；vs.control group，#P＜0.01；vs.model group，ΔP＜0.01

由表1可知，給藥前模型組和右旋糖酐組兔的FFA水平均高于對(duì)照組，提示糖尿病模型兔已出現(xiàn)脂類代謝紊亂，可能是糖尿病模型兔出現(xiàn)氧化供能不足時(shí)，代償性引起脂肪分解導(dǎo)致FFA水平升高，以保證機(jī)體供能需求；也可能與糖尿病模型兔高血糖狀態(tài)有關(guān)，有研究發(fā)現(xiàn)高血糖癥能夠下調(diào)載脂蛋白M（Apom）的表達(dá)，而羅格列酮能夠增加Apom的表達(dá)[6]。這提示高血糖癥會(huì)通過下調(diào)Apom的表達(dá)引起脂類代謝紊亂，羅格列酮能夠通過增加Apom 的表達(dá)部分逆轉(zhuǎn)高血糖癥引起的脂類代謝紊亂。以上實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)羅格列酮能夠顯著降低糖尿病模型兔FPG、FFA水平，但經(jīng)過3周治療后，糖尿病兔FPG、FFA水平并不能降低到正常水平；右旋糖酐聯(lián)合羅格列酮治療后，其FPG水平無(wú)變化，而FFA水平升高，提示右旋糖酐能夠抵抗羅格列酮作用。

3.2 兔體質(zhì)量變化

對(duì)照組、模型組和右旋糖酐組兔給藥前的體質(zhì)量分別為（2.07±0.05）、（2.12±0.04）、（2.05±0.05）kg，給藥后體質(zhì)量分別為（3.03±0.16）、（1.98±0.29）、（1.78±0.12）kg。與給藥前比較，對(duì)照組兔體質(zhì)量增加，右旋糖酐組兔體質(zhì)量降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；模型組兔給藥前后體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。給藥前，3 組兔體質(zhì)量比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；給藥后，與對(duì)照組比較，模型組與右旋糖酐組兔體質(zhì)量降低（P＜0.01），表明羅格列酮可增加正常兔的體質(zhì)量。Vieira EM等[5]研究表明，四氧嘧啶復(fù)制的糖尿病模型兔體質(zhì)量會(huì)降低，但是本研究模型組兔體質(zhì)量沒有明顯降低，可能是由于羅格列酮導(dǎo)致的體質(zhì)量增加抵消了糖尿病導(dǎo)致的體質(zhì)量降低。

3.3 兔血清中AngⅡ、NO水平變化

與給藥前比較，對(duì)照組兔給藥后血清中AngⅡ水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），NO 水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；模型組與右旋糖酐組兔給藥后血清中AngⅡ、NO水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。與對(duì)照組給藥前比較，模型組與右旋糖酐組兔給藥前血清中AngⅡ水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），NO水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；其余差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各組兔血清中AngⅡ、NO水平測(cè)定結(jié)果見表2。

由表2可知，給藥前糖尿病模型兔AngⅡ水平低于給藥前正常兔，可能原因是糖尿病模型兔血液中高FPG 水平和FFA等血脂水平引起血漿滲透壓升高、血容量增加，機(jī)體通過反饋調(diào)節(jié)引起AngⅡ水平下降、血管舒張。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，羅格列酮還能降低正常兔的AngⅡ水平，但不能降低糖尿病模型兔的AngⅡ水平，也可能是羅格列酮降低糖尿病兔FPG水平和FFA等血脂水平后，血漿滲透壓下降反饋調(diào)節(jié)引起AngⅡ水平升高，從而抵消了羅格列酮降低AngⅡ水平的作用。

表2 各組兔血清中AngⅡ、NO水平測(cè)定結(jié)果（，n＝6）Tab 2 The determination results of levels of AngⅡand NO in all groups（，n＝6）

表2 各組兔血清中AngⅡ、NO水平測(cè)定結(jié)果（，n＝6）Tab 2 The determination results of levels of AngⅡand NO in all groups（，n＝6）

注：與給藥前比較，＊P＜0.05；與對(duì)照組給藥前比較，#P＜0.01Note：vs.before medication，＊P＜0.05；vs.control group before medication，#P＜0.01

3.4 各組兔給藥前后FFA水平與體質(zhì)量的相關(guān)性

給藥前對(duì)照組、模型組FFA 水平與體質(zhì)量無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）；給藥后模型組體質(zhì)量與FFA水平呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.903，P＜0.05）。給藥后對(duì)照組、右旋糖酐組FFA水平與體質(zhì)量無(wú)相關(guān)性（P＞0.05）。

4 討論

羅格列酮的不良反應(yīng)主要有水腫、心力衰竭、體質(zhì)量增加、肝毒性等，其中水腫及體質(zhì)量增加是羅格列酮常見的不良反應(yīng)。Trobec K等[7]研究發(fā)現(xiàn)，羅格列酮可以減少惡性腫瘤小鼠每日的體質(zhì)量減輕情況，是因?yàn)槠涫怪镜鹊靡员Ａ簟Ｒ虼耍_格列酮致體質(zhì)量增加的不良反應(yīng)可能是其促進(jìn)了脂肪生成、減少了脂類分解引起的，并且羅格列酮致水腫的不良反應(yīng)也可引起體質(zhì)量增加。本研究結(jié)果也表明，羅格列酮能抑制糖尿病模型兔的體質(zhì)量降低。

糖尿病模型兔可使FPG、FFA 水平增加，從而導(dǎo)致血漿滲透壓升高，通過反饋調(diào)節(jié)使得血管舒張。本研究結(jié)果顯示，模型組兔的AngⅡ水平低于對(duì)照組，提示糖尿病模型兔表現(xiàn)出了血管舒張作用。羅格列酮激活PPARγ后可以降低糖尿病模型兔的FPG、FFA水平，Shi HB等[8]指出PPARγ對(duì)調(diào)節(jié)脂肪酸、總膽固醇（TG）的合成和分泌具有多方面的作用。李金艷等[9]研究發(fā)現(xiàn)，羅格列酮明顯降低甘油三酯（TC）、TG、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、FFA 水平及升高高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，改善高脂狀態(tài)。另有研究認(rèn)為PPARγ 對(duì)糖代謝的調(diào)節(jié)主要是增加外周組織對(duì)胰島素的敏感性[10]。而羅格列酮水腫不良反應(yīng)癥狀一般主要表現(xiàn)為外周水腫，提示羅格列酮致外周水腫不良反應(yīng)與激活PPARγ 調(diào)節(jié)外周糖、脂代謝有關(guān)。所以筆者初步認(rèn)為水腫可能是因?yàn)榱_格列酮能使糖尿病兔較高的FPG、FFA 水平迅速下降，導(dǎo)致血漿滲透壓急劇下降。通過滲透壓作用，血漿中大量水分進(jìn)入組織中引起水腫，使得血容量減少、腎血流量減少，機(jī)體通過反饋調(diào)節(jié)使腎臟加重對(duì)水和鈉離子的重吸收，導(dǎo)致水鈉潴留，與已報(bào)道文獻(xiàn)[11]一致。

心力衰竭也是羅格列酮的不良反應(yīng)癥狀。由于羅格列酮能使血漿滲透壓下降，血漿中大量水分進(jìn)入組織中，血容量減少，心輸出量降低。心輸出量降低可導(dǎo)致腎血流量減少、腎素-血管緊張素系統(tǒng)被激活，AngⅡ生成和醛固酮分泌增加。AngⅡ引起血管強(qiáng)烈收縮可加重心臟后負(fù)荷，促使心肌間質(zhì)纖維化，還可使血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO 減少，最終導(dǎo)致心力衰竭并使得心衰患者病情惡化。AngⅡ與NO水平反映血管舒張與收縮的情況。本研究發(fā)現(xiàn)，羅格列酮能夠降低正常兔的AngⅡ水平，卻不能降低糖尿病模型兔的AngⅡ水平，分析其原因可能是羅格列酮降低FPG、FFA水平后，血漿滲透壓急劇下降，血漿水分進(jìn)入組織，血容量減少，反饋調(diào)節(jié)使得AngⅡ水平升高，最終表現(xiàn)出AngⅡ水平并沒有下降趨勢(shì)，而羅格列酮降低AngⅡ水平作用可能被抵消了。如果長(zhǎng)期使用羅格列酮可能會(huì)表現(xiàn)出AngⅡ水平升高，從而加重心力衰竭癥狀。因此，對(duì)于糖尿病合并心力衰竭患者，應(yīng)該禁用羅格列酮。

右旋糖酐能提高血漿滲透壓、增加血容量、降低血黏稠度，也有滲透性利尿作用，可用于改善微循環(huán)障礙、防治急性腎功能衰竭等。通過其膠體滲透壓作用，將組織中細(xì)胞外液的水分吸入血管內(nèi)，從而擴(kuò)充血容量。本研究發(fā)現(xiàn)右旋糖酐組兔的FPG、FFA 水平均高于模型組，說明右旋糖酐能夠?qū)沽_格列酮作用。通過比較體質(zhì)量發(fā)現(xiàn)，右旋糖酐組兔體質(zhì)量低于給藥前，其原因可能有兩個(gè)，一是右旋糖酐能夠抵抗羅格列酮對(duì)糖尿病模型兔體質(zhì)量降低的抑制作用；二是右旋糖酐可提高血漿滲透壓，緩解因?yàn)镕PG、FFA 等水平急劇下降引起的輕微水腫，使得水鈉潴留作用減弱，最終表現(xiàn)出糖尿病模型兔的體質(zhì)量減輕，但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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