HPLC法測定注射用亞錫二巰丁二鈉中二巰丁二酸的含量

汪 洋，陳志明，吳二明，王 剛，劉佳琳

江蘇省原子醫學研究所，衛生部核醫學重點實驗室，江蘇省分子核醫學重點實驗室，無錫 214063

HPLC法測定注射用亞錫二巰丁二鈉中二巰丁二酸的含量

汪 洋，陳志明，吳二明，王 剛，劉佳琳

江蘇省原子醫學研究所，衛生部核醫學重點實驗室，江蘇省分子核醫學重點實驗室，無錫 214063

目的：以四丁基碘化胺為離子對試劑，采用離子對反相高效液相色譜法測定注射用亞錫二巰丁二鈉中二巰丁二鈉的含量。方法：采用SunFireTMC18色譜柱，流動相為6.5 g·L-1磷酸二氫鈉溶液∶甲醇=（80∶20），流速1.0 mL·min-1，檢測波長220 nm，柱溫25℃。結果與結論：二巰丁二鈉在1.92～17.28 μg范圍內線性良好（r=0.999）；平均加樣回收率為98.8%，RSD為1.3%。本方法適用于注射用亞錫二巰丁二鈉的質量控制。

二巰丁二鈉；離子對反相高效液相色譜法；四丁基碘化胺

注射用亞錫二巰丁二鈉為放射性锝[99mTc]標記配套凍干藥盒，提供制備锝[99mTc]二巰丁二酸注射液，用于腎皮質診斷顯像，其主要成分為二巰丁二鈉及還原劑、穩定劑及pH調節劑等輔料。該藥盒已在國內上市，國家標準中規定了二巰丁二鈉及還原劑的標示量，但未收錄兩者的含量檢測方法。二巰丁二鈉為锝[99mTc]標記配體，還原劑氯化亞錫用于還原+7價锝[99mTc]至有標記活性的低價態，是該藥盒主要的活性成分，對兩者含量應加以控制。

二巰丁二鈉可作為金屬離子螯合劑，用于治療重金屬中毒?！吨袊幍洹?010年版采用氧化還原滴定法測定其含量。但本文所探討的藥盒中含有還原劑，會對藥典方法有干擾?，F用離子對反相高效液相色譜法，對該藥盒的二巰丁二鈉含量進行測定。

1 儀器與試藥

Waters1525二元型高效液相色譜儀；Waters2487雙波長檢測器；注射用亞錫二巰丁二鈉凍干粉（每瓶內含二硫丁二鈉2.48 mg，氯化亞錫0.4 mg）由江蘇省原子醫學研究所江原制藥廠提供；二巰丁二酸對照品為分析純（經二次重結晶所得，純度99.9%）。甲醇為色譜純；其余試劑為分析純；水為注射用水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

SunFireTMC18色譜柱 （150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：6.5 g·L-1磷酸二氫鈉溶液 （內含1.8 g·L-1四丁基碘化胺、0.9 g·L-1乙二胺四乙酸二鈉）∶甲醇= 80∶20；流速：1.0 mL·min-1；檢測波長：220 nm；柱溫：25℃；進樣量：20 μL[1]。記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4倍，結果見圖1。

2.2 溶液配制

對照品溶液制備：取二巰丁二酸對照品60 mg，精密稱定，置25 mL量瓶中，加水適量，滴加1 mol· L-1氫氧化鈉溶液，振搖使溶解，調溶液pH為4.0～4.5，加水稀釋至刻度，作為對照品貯備液。精密量取對照品貯備液2 mL至10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，即得對照品溶液。

供試品溶液制備：取本凍干品1瓶，加水溶解并全部轉移至5 mL量瓶中，即得。

2.3 線性關系考察

分別精密量取二巰丁二酸對照品貯備液0.4、1.2、2.0、2.8、3.6 mL至10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，按“2.1”色譜條件檢測。

以二巰丁二鈉對照峰面積為縱坐標（Y），二巰丁二酸進樣量（μg）為橫坐標（X）進行線性回歸，求得回歸方程式：Y=2.09×105X+7×103，r=0.999。結果表明，二巰丁二酸在1.92～17.28 μg范圍內線性關系良好。

2.4 進樣精密度試驗

分別精密吸取對照品溶液及樣品溶液各20 μL，連續進樣6次，測定峰面積，計算RSD分別為0.6%和0.9%（n=6）。

2.5 回收率試驗

分別取二巰丁二酸0.04、0.06、0.08 g，各3份，精密稱定，置25 mL量瓶中，滴加1 mol·L-1氫氧化鈉適量，加入抗壞血酸0.075 g，振搖使溶解，控制pH值符合制劑要求，加水稀釋至刻度。分別取上述溶液2 mL置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度。按“2.1”色譜條件的方法分別進樣，計算回收率為98.8%，RSD=1.3%（n=3）。

2.6 專屬性試驗

精密稱取本品（批號20150106-1）1瓶，分別經酸（1 mL，1 mol·L-1稀鹽酸，室溫放置30 min，中和，加水至5 mL）、堿（1 mL，1 mol·L-1氫氧化鈉溶液，室溫放置30 min，中和，加水至5 mL）、氧化（0.5 mL，30%H2O2，室溫放置2 h，加水至5 mL）、水浴高溫（80℃，2 h，加水至5 mL）等條件強制降解破壞，以上樣品按“2.1”色譜條件檢測，結果見圖2，圖示主峰與雜質峰分離良好，說明該法專屬性較強。

2.7 注射用亞錫二巰丁二鈉含量測定 見表1。

3 討 論

本法檢測藥盒中二巰丁二酸含量時，其含量低于標示量。原因可能在于制備該凍干藥盒過程中，在藥液冷凍干燥尚未完成的階段，藥液中的二巰丁二酸離子與亞錫離子發生絡合，致游離的二巰丁二酸含量下降。同時結合锝[99mTc]標記率的測定，發現盡管二巰丁二鈉的含量有所下降，藥盒仍能較好地用于锝[99mTc]標記。這是因為該藥盒锝[99mTc]標記放射性強度不超過3700 MBq，該強度的锝[99mTc]化學量是微不足道的，理論上二巰丁二鈉僅需幾微克即可完成反應；但實際標記情況受多種化學、物理因素的影響，為保證锝[99mTc]標記，仍應使二巰丁二鈉含量控制在合理水平上[3]。

圖2 不同降解條件下注射用亞錫二巰丁二鈉的液相色譜圖

表1 注射用亞錫二巰丁二鈉含量測定結果

[1] 陳紅紅，張惠賢，羅梅初，等.反相高效液相色譜法測定二乙烯三胺五醋酸注射液的含量[J].中國現代應用藥學雜志，1998，15（6）：41.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].二部，北京：北京工業出版社，2010：500-3.

[3] 陳 方，周 前，李玉萍，等.電位滴定法定量測定藥盒中的微量亞錫[J].中華核醫學雜志，1990，10（3）：157-60.

Determination of Content of Succimer in Kit for Preparation of Technetinm [99mTc]Succimer Injection by HPLC

WANG Yang,CHEN Zhi-ming,WU Er-ming,WANG Gang,LIU Jia-lin
Key Laboratory of Nuclear Medicine,Ministry of Health,Jiangsu Key Laboratory of Molecular Nuclear Medicine,Jiangsu Institute of Nuclear Medicine，Wuxi 214063

Objective:To establish a reversed-phase HPLC method for determination of succimer in the kit of sodium succimer and stannous chloride mixture for injection.Methods:Tetrabutylammonium iodide was used as the ion pair reagent.A SunFireTMC18ODS column was adopted with 6.5 g·L-1sodium dihydrogen phosphate solution-methanol(80∶20)as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL·min-1,and the eluate was detected at 220 nm.Results and Conclusion:The curve was linear in the range of 1.92-17.28 μg (r=0.999),the average recovery was 98.8%and RSD was 1.3%.This method can be used for the quality control of the active pharmaceutical ingredient.

Succimer;Reversed-phase HPLC;Tetrabutylammonium iodide

R927.2

A

1673-7806（2015）06-569-02

汪洋，男，副主任藥師 E-mail:wangyang@jsinm.org

2015-06-05

2015-00-00