150例宮頸上皮內瘤變Ⅰ級患者HPV感染型別的研究及隨診

張靜平　洪　穎

?

150例宮頸上皮內瘤變Ⅰ級患者HPV感染型別的研究及隨診

張靜平洪穎

[摘要]目的探討南京鼓樓醫院宮頸上皮內瘤變Ⅰ級(CINⅠ)人乳頭瘤病毒(HPV)感染的分型情況及其轉歸。方法回顧性研究2010年至2012年在南京鼓樓醫院確診的CINⅠ患者，采用凱普核酸分子快速導流雜交基因芯片技術對HPV進行分型。定期隨診(每半年1次，持續2年)，隨診項目包括宮頸液基細胞學檢測(TCT)、第二代基因雜交捕獲(HC-II)檢測HPV(人乳頭瘤病毒)。結果①CINⅠ患者以HPV單一高危型感染為主，150例CINⅠ患者，HPV陽性的患者134例(89.33%),HPV檢測陰性16例(10.67%)。單一高危型別感染86例(57.33%)，多重感染46例(30.67%)，單一低危型別感染2例(1.33%)。②CINⅠ中HPV陽性的患者134例，其中單一感染者88例(65.67%)，雙重感染30例(22.39%)，三重感染10例(7.46%)，四重感染6例(4.48%)；③HPV52、58、16感染率最高，分別占HPV陽性患者中的27.61%、17.16%、15.67%。④隨訪過程中，150例CINⅠ患者1年轉陰率達62.00%，2年轉陰率達80.00%，病程持續2年及病理升級的占20.00%，其中病理升級者占所有患者的12.67%。 結論HPV以單一高危型感染為主，其中以HPV52、58、16亞型感染率最高。但在病變持續及進展病例中，以HPV16及18亞型感染率最高。HPV多重感染可能會導致病毒清除時間的延長，是否增加病理升級的風險，需待大樣本進一步調查研究。

[關鍵詞]人乳頭瘤病毒分型；宮頸上皮內瘤變Ⅰ級；隨診

宮頸癌是嚴重威脅女性健康的婦科惡性腫瘤之一。近年來，宮頸癌發病率呈上升趨勢且發病年齡趨于年輕化[1]。宮頸上皮內瘤變(CIN)是與子宮頸浸潤癌密切相關的一組宮頸病變，包括CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ，反映了子宮頸癌發生發展中的連續過程，通過篩查發現CIN，及時治療高級別病變，是預防子宮頸癌行之有效的措施。人乳頭瘤病毒(HPV)的持續感染是導致癌前病變，形成宮頸癌的主要病因[2]，人乳頭狀瘤病毒感染是宮頸癌發生的先決必要條件[3]，接近90%的CIN和99%以上的宮頸癌伴有人乳頭瘤病毒感染[4]。在某些發達國家，宮頸癌篩查已逐步開始向HPV檢測與細胞學檢查聯合篩查轉化。由于多數HPV感染為一過性，可以被機體自動清除，因此，以HPV-DNA檢測為基礎的篩查必然造成一定程度的假陽性，引起HPV陽性婦女的恐慌和衛生資源的浪費。目前，國內外已開始使用其他生物標志物分流HPV陽性人群[5-7]。本文對鼓樓醫院婦科經病理組織學檢查確診為C1NⅠ的150例患者進行HPV分型檢測，研究不同亞型HPV感染在CINⅠ中的發生率及其對CINⅠ患者轉歸的影響，以明確CINⅠ病變持續及進展的高危亞型，盡早做出診治，預防子宮頸癌的發生。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2010年1月1日至2012年7月1日在南京市鼓樓醫院婦產科，經組織病理學確診為CINⅠ的150名患者為研究對象(去除妊娠者，此前宮頸手術者)，年齡23～73歲，平均(42.2±3.45)歲，回顧分析其HPV分型。

1.2方法取樣避開月經期，3 d內沒有陰道內用藥或沖洗，24 h內無性生活；擴陰器充分暴露宮頸，棉拭子擦去宮頸口過多的分泌物，宮頸刷在宮頸口順時針旋轉3～5圈，取出放入專用HPV采樣管中；4℃保存，在2周內進行檢測。HPV-DNA分型測定采用凱普生物工程有限公司提供的人乳頭瘤病毒分型檢測試劑盒。

通過提取臨床樣本病毒DNA，經過PCR擴增，利用導流雜交平臺，在已經固定好核酸探針的低密度基因芯片上雜交、顯色、診斷脫落細胞標本中的21種HPV病毒DNA分子的存在。21種常見型別精確分型檢測包括，15種高危型別：HPV16,18,31,33,35,39,45,51,52,53，56,58,59,66,68；6種低危型別：HPV6,11,42,43,44，CP8304(81)。

1.3統計學方法所有實驗數據采用SPSS 17.0軟件包進行統計分析。實驗數據中部分采用統計學描述的方法，計數資料用率表示，率的比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1CINⅠ中HPV感染率150例CINⅠ患者，HPV陽性的患者134例(89.33%)，HPV檢測陰性16例(10.67%)。HPV陽性的患者中單一感染者88例(88/150，58.67%)，其中單一高危型別感染86例(86/150，57.33%)，單一低危型別感染2例(2/150，1.33%)；多重感染46例(46/150，30.67%)，其中雙重感染30例(30/150，20.00%)，三重感染10例(10/150，6.67%)，四重感染6例(6/150，4.00%)。多重感染主要是高-低及高-高危HPV亞型組合，本研究未發現低-低危HPV亞型混合感染。所有病例中，以HPV高危亞型單一感染為主，其差異有統計學意義。

2.2CINⅠ中HPV亞型分布不論是單一HPV感染還是復合感染(多重感染重復計數)，HR-HPV(高危型HPV),HPV52、58、16感染率最高，累計分別占HPV陽性患者中的27.61%(37/134)、17.16%(23/134)、15.67%(21/134)。LR-HPV(低危型HPV)以CP8304為主，占10.45%(14/134)。HR-HPV中未發現HPV35(+)及HPV59(+)；HPV45(+)發現稀少。LR-HPV中，未發現HPV6(+)。亞型分布見表1。

表1　150例CINⅠ HPV感染情況及亞型分布

注：﹡復合感染重復計數

2.3CINⅠ患者病變持續2年及病理升級的主要型別病變持續2年及病理升級的患者共30例，其中，單一HPV16(+)及HPV18(+)患者分別有7例及4例；復合HPV16(+)及HPV18(+)分別有5例及2例，分別占各自感染率的57.14%(12/21)和60%(6/10)。占HPV高危亞型感染的前2位，和其他型別比較，差異有統計學意義(χ2=5.803，P<0.05)

2.4單一感染和多重感染對CINⅠ轉歸的影響本實驗CINⅠ患者，88例HPV單一感染者，半年內單一HPV感染逆轉率18.18%(16/88),1年內逆轉率45.45%(40/88)，2年內逆轉率13.64%(12/88)，病變持續2年及病理升級的患者占單一感染的22.73%(20/88)； 46例HPV復合感染患者中，半年內復合HPV感染逆轉率15.22%(7/46)，1年內逆轉率30.43%(14/46),2年內逆轉率32.61%(15/46),病變持續2年及病理升級的患者占復合感染的21.74%(10/46)。 除2年陰轉病例，單一感染和復合感染差異有統計學意義(χ2=6.758，P<0.05),余皆無。說明HPV復合感染可能會導致病毒清除時間延長，但并不增加病理升級的風險。CINI患者轉歸情況見表2。

表2　150例CINⅠ患者轉歸情況[n(%)]

3討論

HR-HPV病毒感染是宮頸癌及癌前病變發病的必要條件,主要病因。本研究中150例確診CINⅠ的患者中，HPV分型檢測陽性134例，檢出率為89.33%，單一高危型別感染86例(57.33%)，多重感染46例(30.67%)，無論單一感染還是多重感染，均以高危型HPV感染為主。既往觀點認為，宮頸高級別病變主要由高危型HPV感染引起，宮頸低級別病變主要由低危型HPV感染引起[8]。但近年來李曉紅等[9]及湯惠如等[10]的研究表明，宮頸低級別病變，大部分由高危型HPV感染所致。這與本文分析結果一致。

在不同國家和地區，HPV感染率及亞型分布存在一定差異[11]。北京地區高危型HPV感染，以16,58型為主；上海地區高危型HPV感染，以16，52，58，33，31型為主；云南地區以16，52，33型為主；大連地區以16，58，52型為主。本實驗CINⅠ感染以52,58,16型為主。HPV16和18是最主要的高危致癌亞型，導致了全世界范圍內大約70%的宮頸癌[12,13]。HPV52和HPV58是亞洲人感染HPV的主要兩個基因亞型，在中國、日本等亞洲國家有較高的檢出，而在世界其他地區很少或者沒有檢出[14]。 HPV感染常無臨床癥狀，平均持續時間為8～12個月，其中低危型平均清除時間為5～6個月，高危型平均清除時間為8～14個月，約50%～90%的HPV感染可在數月至2年內被機體清除，而HPV16或18型持續感染的時間會更長[15]。本實驗的研究結果顯示，CINⅠ患者的逆轉率半年為22%，1年為62%，2年達到80%，與上述文獻報道HPV清除率基本一致。

本實驗HPV單一感染和多重感染對CINⅠ轉歸的影響，除2年陰轉率差異有統計學意義，余皆無統計學意義。亦支持多重感染不增加宮頸癌的發病率，但引起病變持續的風險的觀點[16]，還需大樣本進一步調查研究。

對CINⅠ的隨診，主要是防止對高級別病變的漏診和宮頸癌的發生，通過本實驗，我們了解到高危型HPV在疾病發生、發展中的作用，并認識到CINⅠ的主要HPV感染亞型以及HPV16及18型的危害，對其加以重視，定期檢查，將宮頸癌的發生盡量降到最低。

參考文獻

[1]章文華，白萍.35歲以下婦女宮頸癌[J]．中國腫瘤臨床與康復,1999,6(16):39.

[2]Shukla S，Shishodia G，Mahata S，et al．Aberrant expression and Constitutive activation of STAT3 in cervical careinogenesis：implications in high-risk human papillomavirus infection[J]．Mol cancer,2010,9:282．

[3]Walboomera JM，Jacobs MV，Manos MM，et al．Human papillomavirus is a necessary cause of invasive cervical cancer worldwide[J]．J Pathol,1999,189:12-19．

[4]謝幸，茍文麗，林仲秋，等.婦產科學[M].8版.北京：人民衛生出版社，2014:301-304.

[5]李曼，曹箭，王乃鵬，等．p16免疫細胞化學檢測在篩查宮頸癌中的作用[J]．中華腫瘤雜志，2006，28(9)：674-677．

[6]Pierry D，Weiss G，Iack B，et al．Intracellular human papiUo

Study and follow-up of 150 cases of CINⅠ with HPV infection type

ZhangJingping，HongYing

GulouSchoolofClinicalMedicine,NanjingMedicalUniversity,Nanjing210008,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the cervical intraepithelial neoplasia grade I (CINⅠ) points in human papilloma virus (HPV) infection situation and its outcome in this hospital.MethodsA retrospective study was performed in patients with CINⅠform 2010 to 2012 in this hospital,HPV was classified with cape nucleic acids rapid diversion hybridization of HPV gene chip technology.The regular follow-up was once every half a year,in two years.Follow-up projects included TCT,HPV HC-II.Results①Patients with CINⅠwere mainly with single high-risk HPV type infections; of 150 patients with CINI,HPV positive was in 134 cases (134/150,89.33%) and negative in 16 cases (16/150,10.67%).There were 86 cases of single high-risk pattern infection,(86/150,57.33%) ,46 cases of multiple infections (46/150,30.67%),and 2 cases of single low-risk type infection (2/150,1.33%).②CINⅠHPV positive was in 134 cases,in which a single infection was in 88 cases (88/134,65.67%),dual infection in 30 cases(30/134,22.39%),triple infection was in 10 cases (10/134,7.46%),and quadruple infection was in 6 cases (6/134,4.48%).③In turn,HPV52,58,16 infection rate was the highest,which was respectively 27.61%,17.16%,15.67% of HPV positive patients.④In the process of follow-up,1 year negative conversion rate of 150 patients with CINⅠwas 62.00%; two years conversion rate was 80.00%.Course for two years and pathological upgrade accounted for 20.00%,and the pathological upgrade accounted for 12.67% of all patients.ConclusionA single high-risk HPV infection is the main type,with the highest infection rate of HPV52,58,16 subtypes.But in cases of disease duration and progression,HPV16 and 18 subtypes has highest infection rate.Multiple HPV infections can lead to viral clearance extension of time.Large sample for further investigation is still in need with regard to whether to increase the risk of pathological upgrade.

[Key words]Human papilloma virus classification; Cervical intraepithelial neoplasia grade I; Follow-up

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.01.007

通信作者：洪穎，hongyingwjm@sina

基金項目：江蘇省科技廳科技支撐計劃-社會發展課題(BE2012606)
作者單位： 210008江蘇南京南京醫科大學鼓樓臨床醫學院(張靜平，洪穎)，南京大學醫學院附屬鼓樓醫院婦產科(洪穎)