鯉魚肌肉Ⅴ型膠原蛋白的分離純化及其抗體制備

徐　超，鮑俊旺，蔡秋鳳,2，張凌晶,2，劉光明,2，曹敏杰,2

(1.集美大學食品與生物工程學院，福建 廈門 361021；2.福建省水產品深加工工程研究中心，福建 廈門 361021)

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鯉魚肌肉Ⅴ型膠原蛋白的分離純化及其抗體制備

徐超1，鮑俊旺1，蔡秋鳳1,2，張凌晶1,2，劉光明1,2，曹敏杰1,2

(1.集美大學食品與生物工程學院，福建 廈門 361021；2.福建省水產品深加工工程研究中心，福建 廈門 361021)

[摘要]通過酸溶、胃蛋白酶酶解和氯化鈉鹽析等方法，從鯉魚肌肉中純化得到了V型膠原蛋白.SDS-PAGE電泳圖譜分析發現，其至少由2條α鏈(α1和α2)組成，其中α1分子質量約為135 ku，α2分子質量約為120 ku.通過圓二色光譜儀分析其二級結構，發現其具有膠原蛋白三股螺旋結構的典型特征，其熱變性溫度為30.5 ℃.將V型膠原蛋白作為抗原免疫新西蘭大白兔，成功制備了多克隆抗體.采用免疫印跡法對該多克隆抗體的特異性進行分析，證明其僅與魚類V型膠原蛋白產生反應，特異性良好.

[關鍵詞]V型膠原蛋白；圓二色譜；多克隆抗體；免疫印跡法；鯉魚

0引言

膠原蛋白(Collagen)是一種高分子蛋白質，是構成細胞外基質(Extracellular Matrix，ECM)非常重要的結構蛋白質之一，在細胞質基質中含量也最為豐富.膠原蛋白廣泛存在于動物的皮膚、肌腱、軟骨、韌帶及其他結締組織中，具有支撐器官、保護機體的功能，占哺乳動物蛋白質總量的25%~30%[1].生物體內膠原蛋白種類較多，常見的類型有Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅴ型和Ⅵ型.在魚類的肌肉組織中已經報道了Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅵ等類型的膠原蛋白，其中，Ⅰ型膠原蛋白的含量最為豐富，為主要膠原蛋白，而……