多管發酵法與紙片法檢測水中糞大腸菌群的比較

楊璐　朱雨欣

【摘 要】本文采用多管發酵法和紙片法同步檢測了太湖水的糞大腸菌群，并對兩種方法的實驗結果進行了比較分析，結果表明，兩者結果并無顯著性差異，且多管發酵法，操作步驟繁雜、干擾因素多，檢測周期長，不適合大批量樣品的分析；紙片法操作簡便、檢測時間短，適合大批量水樣的分析。

【關鍵詞】糞大腸菌群；多管發酵法；紙片法；無顯著性差異

水是微生物廣泛分布的天然環境，水的細菌學測定特別是腸道菌的檢驗，是研究水體污染和環境衛生的重要指標。糞大腸菌群是總大腸菌群的一部分，主要來自糞便，被糞便污染的水源水如溪水也可能被腸道病原菌污染，從而引起腸道傳染病甚至流行病，因此快速、方便、精準的糞大腸菌群檢測方法對于判斷水體糞大腸菌群的污染狀況和對于有效預防、控制流行病有很深遠的意義。

目前糞大腸菌的測定方法有多管發酵法、濾膜法、延遲培養法、紙片法等。多管發酵法、濾膜法是傳統檢測方法，干擾多、專一性差、操作繁瑣費時，需要確認實驗，因此檢測周期較長，需48～72h，不適合大量樣品的分析。在常規檢驗步驟不能實現時，可以用延遲培養法。紙片法依據環保部標準HJ 755-2015《水質 總大腸菌群和糞大腸菌群的測定 紙片快速法》，在水質監測工作中，紙片法由于其方便高效，應用逐年增多。本文采用多管發酵法和紙片法同步檢測了太湖水的糞大腸菌群，并對兩種方法的實驗結果進行了比較分析。

1 糞大腸菌群的實驗方法

1.1 多管發酵法

多管發酵法是根據大腸菌群在一定溫度下能發酵乳糖產酸產氣并能使乳糖蛋白胨培養液變黃且產生氣泡的原理，將水樣按三個10倍遞減的濃度接種到有乳糖蛋白胨培養液的發酵管中進行初發酵試驗，在37℃±0.5℃下培養24±2h，再將產酸產氣的陽性發酵管中輕微振蕩，用接種環或滅菌棒轉到EC培養液中進行復發酵試驗，在44.5℃±0.5℃下培養24±2h，發酵管產氣說明糞大腸菌群陽性。

1.2 紙片法

每個水樣按三個10倍遞減的是濃度接種，每個濃度梯度分別接種5張紙片。每張大紙片接種10mL水樣，每張小紙片接種1mL水樣，再是1︰10稀釋的水樣接種到5張小紙片中，每張接種1mL，濃度高時可適當稀釋。接種水樣時要均勻涂抹于紙片上，用手輕輕壓平，做好標記，于44.5℃±1℃下培養18～24h。觀察結果，若紙片上出現紅斑或紅暈且周圍變黃為陽性或紙片全部變黃無紅斑或紅暈也為陽性。紙片無變化，紙片部分變黃無紅斑或紅暈，紙片不變黃有紅斑或紅暈均為陰性結果。

1.3 計算

兩種方法均根據不同接種量所出現陽性結果的數目，從MPN表中查得相應的MPN指數，再經下面的公式換算成每100mL的MPN值。

MPN值=MPN指數×10（ml）/接種量最大的一管（ml）

MPN值再乘10，即為1L水樣中的糞大腸菌群數。

2 實際水樣檢測結果

用紙片法和多管發酵法對8個實際水樣中的糞大腸菌群作比對檢測，結果見表1。

對兩種方法的檢測結果進行秩和檢驗，結果為t=7，P>0.10，表明紙片法與多管發酵法檢測結果無顯著性差異。

3 檢測方法的比較

在糞大腸菌群檢測方法中多管發酵法是傳統的檢測方法，干擾多、專一性差、操作繁瑣費時，需要確認實驗，不適于大量樣品的分析。但傳統方法均有原理簡單、費用較低、利于推廣的優點，因此仍是常規監測中的主要檢測方法。

紙片法與多管發酵法相比，紙片法只需在44.5℃下培養18～24h就可出結果，紙片法快速省時簡單方便，適合大批量監測和應急監測。兩者比較見表2。

4 結論

實際水樣檢測結果證明，紙片法與多管發酵法檢測結果之間無顯著性差異。但是紙片法的檢測結果普遍略低于經典的多管發酵法，這可能是因為紙片法是將接種后的樣品直接放于44.5℃環境中培養，而多管發酵法是將接種后的樣品先置于37℃環境中進行初發酵試驗，再置于44.5℃環境中復發酵試驗，比前者多一個富集過程。

紙片法具有快速簡單方便等優點，可以較準確地判斷水樣微生物污染情況，可以作為環境分析方法中糞大腸菌群的快速篩查方法。因此在工作量大且需要快速判定時，可采用紙片法替代多管發酵法。

【參考文獻】

[1]《水質總大腸菌群和糞大腸菌群的測定紙片快速法HJ 755-2015》環境保護部，2015.

[2]《水質糞大腸菌群的測定多管發酵法和濾膜法HJ/T 347-2007》環境保護部，2007.endprint