HRM分析方法中不同擴增片段、染料和儀器的比較

饒　丹，嘎利兵嘎，郭小權，張建峰，張春紅，沈海燕，

朱余軍2，劉志成2 ，孫俊穎2，郭鵬舉2*

(1．江西農業大學動物科學技術學院，江西南昌330045；2.廣東農科院動物衛生研究所，廣東廣州510640)

HRM分析方法中不同擴增片段、染料和儀器的比較

饒丹1,2，嘎利兵嘎2，郭小權1*，張建峰2，張春紅2，沈海燕2，

朱余軍2，劉志成2，孫俊穎2，郭鵬舉2*

(1．江西農業大學動物科學技術學院，江西南昌330045；2.廣東農科院動物衛生研究所，廣東廣州510640)

摘要:高分辨率熔解曲線技術(High resolution melting,HRM)是近年發展起來的基于實時熒光定量技術分析核苷酸突變而進行基因分型的一種新型技術。比較了幾種動物疫病病原(豬瘟病毒、禽白血病病毒、雞艾美耳球蟲株)的不同擴增片段(C202、ALV450、En573和C965)、不同熒光染料(LC Green、SYTO9 和SYBR GreenⅠ)和不同儀器[LightScanner96(Idaho), LightCycler480(Roche)和Rotor-Gene Q(Qiagen)]在HRM基因分型上的異同，揭示了HRM技術對病原體進行分型時，不同擴增片段和不同性質熒光染料對其分型結果影響較大：擁有多個熔解區間的核酸序列比單獨1個SNP位點特異性高，更適合于分型；核酸相鄰熔解區間Tm差值影響實際HRM分型結果；飽和熒光染料(LC Green和SYTO9)比非飽和染料(SYBR GreenⅠ)分辨率更高，更適合用于HRM分析，并且不同濃度熒光染料對Tm值有一定的影響；不同HRM儀器之間HRM結果無明顯差異。

關鍵詞:高分辨率熔解曲線；單核苷酸多態性；熒光染料；熔解Tm；熔解曲線模擬

The Comparison of Amplified Fragments,Different Dyes

高分辨率熔解曲線技術(HRM)是美國Utah大學Wittwer等人在2003年首次提出的基于新型飽和熒光染料LC Green的發明而進行基因突變檢測的新技術[1]。HRM技術最初應用于單核苷酸多態(single nucleotide polymorphism，SNP)檢測分析，HRM-SNP檢測原理是根據熔解溫度的微弱變化來區分野生型和純合子突變單堿基差異，根據熔解曲線的形態變化來區分純合子和雜合子之間的單堿基差[2]。……