栝樓牡蠣散對四氧嘧啶糖尿病小鼠的降糖作用研究

★　姚婷　沈孝麗　周惠芳　(.海寧衛(wèi)生學(xué)校　浙江 海寧 34400；.海寧市疾病預(yù)防控制中心　浙江 海寧 34400)

栝樓牡蠣散對四氧嘧啶糖尿病小鼠的降糖作用研究

★姚婷1沈孝麗1周惠芳2(1.海寧衛(wèi)生學(xué)校浙江 海寧 314400；2.海寧市疾病預(yù)防控制中心浙江 海寧 314400)

摘要：目的：研究栝樓牡蠣散對四氧嘧啶糖尿病小鼠的影響。方法：將健康ICR小鼠49只，分成空白組、模型組、陽性藥組、栝樓牡蠣散組。采用腹腔注射四氧嘧啶200mg/kg建立糖尿病模型小鼠，5天后灌胃治療，持續(xù)15天。實驗結(jié)束后，測定血糖水平、臟器指數(shù)、血清總膽固醇(TG)、甘油三酯(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的含量。結(jié)果：栝樓牡蠣散能顯著改善糖尿病的血糖水平(P<0.01)、減少體重的下降(P<0.01)，調(diào)節(jié)血脂代謝(P<0.01)。結(jié)論：栝樓牡蠣散對四氧嘧啶所致小鼠血糖升高有顯著的保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：栝樓牡蠣散；糖尿病；四氧嘧啶；血糖

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，人們生活方式的改變和老齡化進(jìn)程的加速，糖尿病的發(fā)病率迅速增加。糖尿病已成為全球性的公共健康問題，預(yù)計至2030年全球糖尿病發(fā)病人數(shù)將超過4.39億[1]。栝樓牡蠣散出自《金匱要略》，系仲景為治百合病而設(shè)。《金匱要略·百合狐惑陰陽毒病證治第三》第7條載：“百合病渴不愈者，栝樓牡蠣散主之”。傳統(tǒng)用法：栝樓根、牡蠣(熬)等分，上為細(xì)末，飲服方寸匕，日三服。方中栝樓根清熱潤燥、生津止渴；佐以牡蠣益陰潛陽，以降虛熱。二味相配，共奏生津止渴、益陰潛陽之效。適用于百合病陰虛內(nèi)熱、虛陽上浮、肺胃津傷而見口渴者。另經(jīng)臨床研究證明栝樓牡蠣散加味具有良好的降血糖作用[2]，但在動物藥理藥效研究方面未見報道。本實驗通過研究和觀察栝樓牡蠣散對四氧嘧啶致糖尿病小鼠的降血糖作用，為尋找和開發(fā)新型降糖藥物及對栝樓牡蠣散的藥用價值研究提供理論依據(jù)，對治療糖尿病和預(yù)防糖尿病并發(fā)癥具有積極意義。

1實驗材料與動物

1.1實驗動物健康ICR小白鼠，體重20±2g，雄性，由浙江醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，動物飼養(yǎng)合格證號SYXK(浙)2008-0033號。

1.2實驗材料和試劑栝樓根與牡蠣購于浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬中藥飲片廠，批號分別為20120506和20120812，經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院李越蘭老師鑒定為正品。栝蔞牡蠣散液由浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥教研室實驗室自制得到，4℃保存，供實驗用。玉泉丸，規(guī)格：60g/瓶/盒；批號：120726；公司：成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司，常溫保存。四氧嘧啶(ALX)，德國Sigma公司產(chǎn)品，4℃保存。

1.3實驗儀器4K15型高速冷凍離心機(jī)(德國Sigma公司)；血糖儀(美國強(qiáng)生醫(yī)療器材有限公司)；血糖試紙(美國強(qiáng)生醫(yī)療器材有限公司)；KQ-25OB型超聲儀(昆山市超聲儀器有限公司)；日立7180型全自動生化分析儀(日本日立公司)。

2實驗方法

2.1藥物的提取制備稱取栝樓和牡蠣各200g，用8倍量水于微波儀中中火提取20min，共2次，過濾，合并濾液，濃縮得浸膏，出膏率為35.4%。

2.2四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的建立[3]及分組健康ICR小白鼠49只，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天后，稱重，隨機(jī)分為空白組(8)和造模小鼠(41)。禁食不禁水12h后，按200mg/kg劑量給予小鼠腹腔注射2%四氧嘧啶溶液(生理鹽水配制)進(jìn)行造模。5天后待血糖穩(wěn)定后測體重、血糖，將血糖值≥10mmol/L者作為本次實驗的糖尿病小鼠，未達(dá)標(biāo)準(zhǔn)者淘汰。將符合要求的小鼠隨機(jī)分為：模型組(13)、玉泉丸組(14)、栝樓牡蠣散組(14)。各組組間平均值差異不超過10%，組內(nèi)各個血糖值差異不超過15%。

2.3檢測指標(biāo)在給藥前和給藥15天后，空腹8h后，進(jìn)行尾部取血測定小鼠的血糖值，然后摘眼球取血，將血液靜置凝固約30分鐘后，在低溫離心機(jī)中以3500轉(zhuǎn)/分，離心15分鐘，得到的血清置于4℃冰箱中保存，用于測定小鼠的總膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)的含量。

臟器的處理：將小鼠頸椎脫臼處死，分別取出肝臟、脾臟和胰腺。用生理鹽水漂洗干靜后，再用濾紙吸干，于天平上稱重，記錄并計算臟器指數(shù)。

3結(jié)果

3.1栝樓牡蠣散對四氧嘧啶糖尿病小鼠體重的影響實驗期間，空白組小鼠的飲水及攝食量均衡，由表1可見體重穩(wěn)步增長，精神狀態(tài)良好；造模后，小鼠體重呈負(fù)增長，出現(xiàn)多飲、皮毛枯黃，動物進(jìn)食量及耗食量增加的現(xiàn)象。治療后，小鼠體重均有所緩解(P<0.01)，精神狀態(tài)有所改善，活動量增加，但是皮毛仍然無光澤，較為暗淡。

3.2栝樓牡蠣散對實驗性糖尿病小鼠各臟器指數(shù)的影響由表2可見，模型組小鼠肝臟指數(shù)、胰腺指數(shù)與空白組比較有顯著差異(P<0.01)，說明四氧嘧啶造成小鼠肝臟和胰腺損傷，而給藥后，小鼠的肝臟指數(shù)和胰腺指數(shù)均有所改善(P<0.05，P<0.01)。說明括樓牡蠣散對肝臟和胰腺有一定的保護(hù)作用，對脾臟無明顯影響。

±s)

注：與空白組相比，*P<0.01；與模型組相比，◆P<0.01。

±s)

注：與空白組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3.3栝樓牡蠣散對實驗性糖尿病小鼠血糖值的影響數(shù)據(jù)結(jié)果顯示，給藥前，各造模小鼠的血糖均明顯高于空白組(P<0.01)，表明糖尿病小鼠模型的建立成功；給藥治療后，各組小鼠的血糖水平均有不同程度降低，且與模型組有顯著差異(P<0.01)。從給藥前后的降血糖效果來看，玉泉丸組最優(yōu)，栝蔞牡蠣散組次之。說明栝樓牡蠣散具有較好的降血糖效果。而模型組在沒有進(jìn)行任何治療的情況下，實驗結(jié)束時的血糖反而升高了，糖尿病加重。結(jié)果見表3。

±s)

注：與空白組相比，**P<0.01；與模型組相比，▲▲P<0.01。

3.4栝樓牡蠣散對實驗性糖尿病小鼠血脂的影響由于胰島素分泌不足，糖尿病患者出現(xiàn)三大物質(zhì)的代謝紊亂。其中，在脂質(zhì)代謝方面，脂肪組織攝取葡萄糖及從血漿中清除甘油三脂和脂肪酸的能力下降，血中游離脂肪酸和甘油三酯濃度增高。

表4結(jié)果顯示，模型組小鼠的血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白的含量較空白小鼠均有顯著升高(P<0.01)，而血清高密度脂蛋白的含量較空白組小鼠有顯著降低(P<0.01)，說明血糖代謝的異常影響了脂類代謝，從側(cè)面反映了造模成功。給藥治療后，各組小鼠血清總膽固醇含量較模型組小鼠有了一定的降低(P<0.01，0.05)；各治療小鼠的血清甘油三酯水平較模型組小鼠均有明顯降低(P<0.01，0.05)，而且可以明顯提高血清高密度脂蛋白的含量(P<0.01，0.05)，但是對低密度脂蛋白的影響不明顯(P>0.05)。

±s)

注:與空白組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

4分析與討論

4.1糖尿病模型四氧嘧啶是一種特異性細(xì)胞毒劑，可選擇性損傷動物的胰島β細(xì)胞，促進(jìn)氧自由基釋放，直接破壞β細(xì)胞的膜結(jié)構(gòu)，損傷DNA，使胰島廣泛壞死導(dǎo)致胰島素原合成障礙，空腹血糖升高，從而形成實驗性糖尿病模型[4]，四氧嘧啶誘導(dǎo)的實驗性糖尿病模型是近年來國內(nèi)應(yīng)用較多的一種糖尿病模型[5]，其特點是容易簡便，周期短，價格相對低廉。本試驗在文獻(xiàn)和預(yù)試驗的基礎(chǔ)上，采用禁食后腹腔注射ALX(200mg/kg)的方法制備糖尿病模型小鼠。5天后模型小鼠出現(xiàn)多尿、多飲、多食、體重下降等癥狀，并且血糖值顯著高于正常對照組小鼠，成模率達(dá)到92%。說明四氧嘧啶法建立的糖尿病模型，成模率高，模型穩(wěn)定，是一種簡單快速的造模方法。

4.2栝樓牡蠣散的降糖機(jī)制糖尿病屬于中醫(yī)學(xué)“消渴病”范疇，是由于燥熱偏盛，陰津虧耗所致的熱盛陰傷之病，陰虛為本，燥熱為標(biāo)。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究認(rèn)為，糖尿病是一組由于胰島素分泌缺陷或其生物學(xué)作用障礙引起的以高血糖為特征的代謝性疾病。

栝樓牡蠣散出自《金匱要略》，系仲景為治百合病而設(shè)。方中栝樓根清熱潤燥，生津止渴；佐以牡蠣益陰潛陽，以降虛熱。二味相配，共奏生津止渴，益陰潛陽之效。適用于百合病陰虛內(nèi)熱，虛陽上浮，肺胃津傷而見口渴者。現(xiàn)代中藥研究表明，栝樓根主要成分為蛋白質(zhì)、淀粉、植物凝血素、多糖、皂普等[6]，而且具有抗病毒、抗腫瘤、終止妊娠、提高免疫力等廣泛的藥理作用[7-9]。就目前研究狀況分析，栝樓根提取物及復(fù)方對于改善糖尿病及其并發(fā)證的各種癥狀具有明顯效果[10]，這與本實驗結(jié)果相一致，說明在治療糖尿病方面有著巨大的潛力和優(yōu)勢，市場前景廣闊。

牡蠣(Oyster)屬軟體動物門，瓣鰓綱，異柱目，牡蜘科，粵、閩稱蠔，江、浙稱蠣黃，山東以北稱蠣子或海蠣子。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究的深入，人們對牡蠣功能的認(rèn)識也越來越廣泛，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)牡蠣具有多種生物學(xué)活性，如:抗疲勞、抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗高血壓、抗血栓、抗凝血、降血脂、降血糖等作用[11-13]。但關(guān)于牡蠣的降血糖作用及可能的機(jī)制尚少見研究報道。

本實驗以四氧嘧啶所致糖尿病小鼠為實驗對象，探討栝樓牡蠣散對糖尿病小鼠的降糖效果和降糖機(jī)制。實驗結(jié)果表明栝樓牡蠣散對四氧嘧啶小鼠的降糖效果良好，并能調(diào)節(jié)脂類代謝，推測栝樓牡蠣散可能通過刺激胰島的β細(xì)胞再生，或?qū)σ葝uβ細(xì)胞具有保護(hù)和修復(fù)作用，刺激胰島β細(xì)胞分泌胰島素，從而增加機(jī)體對葡萄糖的利用率，加速糖原合成，抑制糖異生，降低血糖，并改善糖尿病帶來的機(jī)體異常癥狀。對今后括蔞牡蠣散用于治療糖尿病腎病具有重要的臨床意義。

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The Effects of Trichosanthes Oysters Powder on Alloxan-induced Diabetic Mice

YAO Ting1，SHEN Xiao-li1，ZHOU Hui-fang2

1.HainingHealthSchool，Haining314400，China;

2.HainingCenterforDiseaseControlandPrevention，Haining314400，China.

Abstract:Objective:To study the effects of trichosanthes oysters powder on alloxan-induced diabetic mice. Methods: 49 healthy ICR mice were divided into normal control group, model control group, positive control group, trichosanthes group. The mice were administrated with alloxan 200mg/kg by intraperitoneal injection to build diabetic mice model. The test substance was given to mice through stomach everyday. 15 days later, the contents of the blood sugar, the organ index, TG, TC, HDL, LDL, were measured. Results: Trichosanthes oysters powder could significantly reduce the levels of FBG(P<0.01), increase the weight(P<0.01), regulate blood lipids for diabetic mice(P<0.01). Conclusion: The trichosanthes oysters powder has a significantly protective effect on increasing of blood glucose in model mice induced by alloxan.

Key words:Trichosanthes Oysters Powder; Diabetes Mellitus; Alloxan; Blood Sugar

收稿日期：(2014-09-23)編輯：薛鐵瑛

中圖分類號：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B