氣相色譜法測(cè)定黃瓜多種農(nóng)藥殘留

羅俊霞 ，李德瑜 ，杜鳳山 ，宋志強(qiáng) ，趙建波

（1. 鄭州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)流通中心，河南 鄭州 450006；2. 鄭州市園藝工作站，河南 鄭州 450006）

氣相色譜法測(cè)定黃瓜多種農(nóng)藥殘留

羅俊霞1，李德瑜1，杜鳳山1，宋志強(qiáng)1，趙建波2*

（1. 鄭州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)流通中心，河南 鄭州 450006；2. 鄭州市園藝工作站，河南 鄭州 450006）

通過(guò)氣相色譜法-電子捕獲檢測(cè)器采用離心和過(guò)濾兩種處理方法同時(shí)測(cè)定黃瓜中的六氯苯、氯硝胺、七氯等7種農(nóng)藥和敵稗、丁草胺等兩種除草劑的殘留。結(jié)果表明：兩種前處理方法均能滿(mǎn)足日常檢測(cè)的需要，可以在日常檢測(cè)中進(jìn)行推廣。另外，9 種農(nóng)藥在黃瓜基質(zhì)中存在不同程度的基質(zhì)效應(yīng)，其中敵稗和丁草胺存在較強(qiáng)的基質(zhì)抑制效應(yīng)，其它幾種農(nóng)藥或者除草劑存在較弱的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。

氣相色譜；黃瓜；離心；過(guò)濾；基質(zhì)效應(yīng)

為了節(jié)省勞力，近年來(lái)，有機(jī)氯類(lèi)的除草劑在生產(chǎn)中越來(lái)越多的使用，有機(jī)氯農(nóng)藥是一類(lèi)曾被世界各國(guó)廣泛使用的高效、廣譜殺蟲(chóng)劑。雖然禁用多年，但由于其半衰期長(zhǎng)、不易降解、所以長(zhǎng)期積存于植物和土壤中，至今仍有檢出 [1-2] 。七氯、艾氏劑、狄試劑、異狄氏劑是氯化環(huán)戊二烯殺蟲(chóng)劑，六氯苯和氯硝胺是殺菌劑，敵稗和丁草胺是除草劑，胺菊酯是擬除蟲(chóng)菊酯，這些農(nóng)藥和除草劑對(duì)動(dòng)物具有致畸、致癌和致突變等毒性 [3] 。目前這類(lèi)農(nóng)藥較普遍的使用氣相色譜法 [4-6] 、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法 [7-8] 來(lái)測(cè)定；劉長(zhǎng)武、劉瀟威等 [9] 在NY/T 761-2008的標(biāo)準(zhǔn)中列舉了用GC-ECD檢測(cè)的農(nóng)藥種類(lèi)，但是卻沒(méi)有具體的測(cè)定數(shù)據(jù)。為了快速對(duì)這幾種農(nóng)藥進(jìn)行測(cè)定，筆者進(jìn)行了固相萃取-氣相色譜法-電子捕獲檢測(cè)器同時(shí)測(cè)定黃瓜中六氯苯、氯硝胺等多種農(nóng)藥殘留試驗(yàn)，經(jīng)過(guò)在0.02 mg/kg、0.04 mg/kg、0.08 mg/kg（敵稗和丁草胺在0.04、0.08、0.16 mg/kg）3個(gè)水平下添加回收試驗(yàn)，結(jié)果表明這兩種前處理方法能滿(mǎn)足日常檢測(cè)的需要。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

瓦里安 CP3800，配 8400 自動(dòng)進(jìn)樣器和 ECD 檢測(cè)器，其色譜柱為 VF-5，30 m×0.32 mm，液膜厚0.25 μm；WH-861 型漩渦混合器；天孚牌電子計(jì)數(shù)天平（DT 500A） ；德國(guó)產(chǎn)的Heidolph牌 SilentCrusher M 型均質(zhì)機(jī)；美國(guó)產(chǎn)的 N-EVAP TM -112 型氮吹儀，美國(guó)產(chǎn)的固相萃取裝置，德國(guó)產(chǎn)的 Hettich 品牌的Universal302R 離心機(jī)。

乙腈、正己烷、丙酮為 CNW品牌試劑（HPLC 級(jí)） ；NaCl 為天津市科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心生產(chǎn)的綠環(huán)牌試劑（分析純）；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品七氯（Heptachlor）、艾氏劑（Aldrin）、狄試劑（Dieldrin）、異狄氏劑（Endrin）、六氯苯（Hexachlorobenzene）、氯硝胺（Dichloran）、敵稗（Propanil）、丁草胺（Butachlor）和胺菊酯（Tetramethrin），濃度均為 100 mg/kg，由農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所生產(chǎn)。

1.2 GC 條件

進(jìn)樣口溫度：220℃，檢測(cè)器溫度：300 ℃；柱溫箱：采用程序升溫，起始溫度150 ℃，保持 0.5 min,以 20 ℃/min升至 200 ℃，保持 2 min，以 0.8 ℃/min 升至 210 ℃，保持 2 min，以 50 ℃/min升至 260℃，保持 10 min。柱流量 2 mL/min；分流比：1∶10；進(jìn)樣量為 1 μL。

1.3 樣品前處理

1.3.1 過(guò)濾處理 依照 NY/T761-2008 [9] 的方法， 稱(chēng)取 25 g樣品于 250 mL的廣口瓶中， 加入 50 mL乙腈，用均質(zhì)機(jī)在(8 000～12 000) r/min轉(zhuǎn)速下均質(zhì)提取，之后過(guò)濾到裝有 5～7 g NaCl 的 100 mL具塞量筒中，劇烈振搖 1 min，靜置分層 20 min以上，收集濾液 60～70 mL（上層乙腈相體積大約為 30～40 mL），移取上層乙腈相 10 mL濃縮至近干，用 2 mL的正己烷定容，之后用弗羅里硅土 SPE 小柱凈化，再次濃縮至近干，用正己烷定容至 5 mL。根據(jù)保留時(shí)間定性，用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正，外標(biāo)法定量，單點(diǎn)校正。

1.3.2 離心處理 稱(chēng)取 25 g樣品于 250 mL的廣口瓶中，在廣口瓶中加入5～7 g NaCl，再加入 50 mL乙腈，依照NY/T761-2008 [9] 的方法，用均質(zhì)機(jī)在(8 000～12 000) r/min轉(zhuǎn)速下均質(zhì)提取 2 min，之后一并倒入 2 根 50 mL的離心管中，放入離心機(jī)中在 5 000 r/min轉(zhuǎn)速下離心 5 min，移取上層乙腈相 10 mL濃縮至近干，用 2 mL的正己烷定容，之后用弗羅里硅土SPE 小柱凈化，再次濃縮至近干，用正己烷定容至5 mL。根據(jù)保留時(shí)間定性，用基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液校正，外標(biāo)法定量，單點(diǎn)校正。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確吸取 1.1 中標(biāo)準(zhǔn)溶液各 1 mL至 10 mL的容量瓶中，用正己烷定容至 10 mL刻度線(xiàn)，成為10 mg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。用黃瓜樣品基質(zhì)進(jìn)行稀釋成低濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液上機(jī)測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理方法

各種農(nóng)藥在3 個(gè)濃度水平下各做 12 次添加回收試驗(yàn)，棄 去離群值，計(jì) 算平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，各農(nóng)藥的檢出限根據(jù)公式計(jì) 算，式中：DL 代表方法的檢測(cè)限（方法可檢測(cè)到的最小樣品量）；N 代表基線(xiàn)噪聲；C 代表樣品濃度；h 代表相應(yīng)的農(nóng)藥的峰高。

2 結(jié)果與分析

2.1 9 種農(nóng)藥或者除草劑的色譜圖及 9種化合物在黃瓜基質(zhì)中的基質(zhì)效應(yīng)

圖 1 9種化合物的色譜圖 （用正己烷配制）

圖 2 9種化合物的色譜圖 （用樣品基質(zhì)配制）

圖 3 黃瓜空白色譜圖

農(nóng)藥保留時(shí)間依次為：1-六氯苯；2-氯硝胺；3-敵稗；4-七氯；5-艾氏劑；6-丁草胺；7-狄試劑；8-異狄氏劑；9-胺菊酯。

9 種化合物的色譜圖、用樣品空白基質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖和黃瓜空白基質(zhì)的色譜圖分別見(jiàn)圖 1、圖 2、圖 3，由圖 1、圖 2、圖 3 可以看出，在 VF-5的色譜柱上， 9種化合物在 1.2 中所述的程序升溫條件下達(dá)到良好的分離效果。在黃瓜樣品基質(zhì)中存在一些干擾物，在 VF-5 的柱子上和六氯苯、敵稗和丁草胺分不開(kāi)，從而對(duì)這 3 種物質(zhì)的測(cè)定存在較大的影響。其中在敵稗和丁草胺的保留時(shí)間附近均有一個(gè)較大的倒峰，對(duì)二者存在嚴(yán)重的基質(zhì)抑制效應(yīng)，基質(zhì)抑制程度隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增大而減小；在六氯苯的保留時(shí)間附近有一個(gè)較小的正峰，使六氯苯有較弱的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。其它幾種農(nóng)藥也存在不同程度的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，有待于進(jìn)一步研究。

2.2 方法的回收率和精密度試驗(yàn)

表 1 9 種化合物的添加回收率、精密度和檢測(cè)限（n=10）

分別稱(chēng)取 25 g的黃瓜空白樣品，分別添加9 種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和單標(biāo)，使添加后六氯苯、氯硝胺、七氯、艾氏劑、狄試劑、異狄氏劑、胺菊酯的分別為 0.02 mg/kg、0.04 mg/kg、0.08 mg/kg，使敵稗和丁草胺的濃度分別為 0.04 mg/kg、0.08 mg/kg、0.16 mg/kg，按照 1.3.1和 1.3.2中的步驟進(jìn)行樣品前處理，每個(gè)水平的試樣重復(fù)測(cè)定 12 次，根據(jù)測(cè)定結(jié)果計(jì)算添加回收率，在 12 個(gè)添加回收中棄去 2 個(gè)離群值。具體的結(jié)果見(jiàn)表 1。試驗(yàn)結(jié)果表明，過(guò)濾處理的回收率為 68.0%～120.3%，精密度為 2.0%～20.8%；離心處理的回收率范圍為 57.1%～134.8%，精密度為 2.4%～13.0%。

表 1 表明過(guò)濾處理六氯苯、氯硝胺、七氯、艾氏劑、狄試劑、異狄氏劑、胺菊酯等 9種農(nóng)藥的檢出限在 0.08 mg/kg的水平下、敵稗和丁草胺在 0.16 mg/kg的水平下分別為 0.000 9 mg/kg～0.027 4 mg/kg，離心處理后9 種化合物的檢測(cè)限為 0.000 7 mg/kg～0.031 4 mg/kg。可見(jiàn)，兩種處理方法的回收率、精密度和檢測(cè)限均滿(mǎn)足多農(nóng)殘檢測(cè)分析的要求。

2.3 方法的檢測(cè)限和線(xiàn)性范圍

表 2 9 種化合物在不同介質(zhì)中的線(xiàn)性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線(xiàn)性范圍

筆者在試驗(yàn)中分別用正己烷配制了 0.001 mg/kg、0.01 mg/kg、0.1 mg/kg、1 mg/kg、10 mg/kg 5 個(gè)濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，9 種化合物的線(xiàn)性回歸方程、線(xiàn)性范圍和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表 2，因?yàn)閿嘲藓投〔莅返捻憫?yīng)較低，在 0.001 mg/kg濃度水平下幾乎可以視為沒(méi)有相應(yīng)，它們?cè)?10 3 （0.01～10 mg/kg）的范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)分別是 0.998 8和 0.999 3，其它七種化合物在 104的范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)均小于 103的相關(guān)系數(shù)，線(xiàn)性均不如在 103的范圍內(nèi)的線(xiàn)性好，在 10 3 （0.001～1 mg/kg）的范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)均大于 0.998 5；另外用黃瓜空白基質(zhì)配制了0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.04 mg/kg、0.08 mg/kg、0.16 mg/kg 5個(gè)濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)品，同樣，敵稗在0.01 mg/kg和0.02 mg/kg的濃度水平下，因?yàn)榛|(zhì)效應(yīng)，可以視為沒(méi)有響應(yīng)，在0.04～0.16 mg/kg的范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)是0.991 2，其它 8 種化合物在 0.01～0.16 mg/kg的范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)均大于 0.993 5；可見(jiàn)，用黃瓜空白基質(zhì)作為介質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液的線(xiàn)性范圍不如用正己烷試劑作為介質(zhì)配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液，但在一定的范圍內(nèi)其線(xiàn)性可以滿(mǎn)足多種農(nóng)藥殘留分析的要求；同時(shí)，在日常檢測(cè)工作中為了避免基質(zhì)效應(yīng)帶來(lái)的影響可以用相近濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)進(jìn)行校正。

3 結(jié) 論

本方法比較了過(guò)濾和離心兩種處理方法進(jìn)行前處理后測(cè)定六氯苯等多種有機(jī)氯農(nóng)藥和除草劑的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，兩種前處理方法均獲得了滿(mǎn)意的檢測(cè)靈敏度，方法的準(zhǔn)確度、精密度、線(xiàn)性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限等均能滿(mǎn)足多農(nóng)殘分析的要求。但是黃瓜基質(zhì)在 VF-5 的柱子上對(duì)敵稗和丁草胺的影響較大，建議在檢測(cè)工作中用相近濃度的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)進(jìn)行校正。

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Gas Chromatography Determination of Varieties of Pesticide Residues in Cucumber

LUO Jun xia 1 , LI De yu 1 ,Du Feng shan 1 ,SONG Zhi qiang 1 ,ZHAO Jian bo2*

（1. Quality Inspection Center for Agricultural Products, Zhengzhou 450006, China? 2. Horticultural Work-station, Zhengzhou 450006, China）

Gas chromatography-electron capture was used in the course of determination of various pesticides and herbicides, such as hexachlorobenzene, dichloran, heptachlor, etc., and centrifugation and filtration were used as the pre-treatment methods. Results showed that both pre-treatment methods could meet the needs of daily testing, and their use could be promoted in daily detection. Besides, varying degree of matrix effects of 9 kinds of pesticides existed in cucumber matrix, and that of propanil and butachor had strong inhibitory matrix effects, but weak matrix enhancement effects existed in other pesticides and herbicides.

chromatography? cucumber? centrifugation? filtration? matrix effect

羅俊霞, 李德瑜, 杜鳳山, 等. 氣相色譜法測(cè)定黃瓜多種農(nóng)藥殘留[J]. 生物災(zāi)害科學(xué), 2015, 38(1):61-65.

2015-01-30

羅俊霞，女，農(nóng)藝師，主要從事無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)工作，E-mail：71819@163.com；*通信作者：趙建波，E-mail：71819@163.com。

S481+.8

A

2095-3704（2015）01-0061-05