大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）質量控制程序

秦霄雯，李鳳霞，胡方崢

（山東省計量科學研究院，山東濟南250014）

大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）質量控制程序

秦霄雯，李鳳霞，胡方崢

（山東省計量科學研究院，山東濟南250014）

浮游菌和沉降菌是醫院潔凈手術部和臨床實驗室的空氣質量控制指標之一。為了細化浮游菌和沉降菌的測試方法，加強對微生物培養基的質量控制，避免誤操作引起的生物污染，保障檢測過程中的人員健康，本文給出了大豆酪蛋白瓊脂培養基的質量控制程序，希望有助于微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。

大豆酪蛋白瓊脂培養基；檢測；質量控制

GB 50333-2013《醫院潔凈手術部建筑技術規范》和GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》中均要求檢測空氣中的浮游菌和沉降菌的含量，作為判定合格與否的指標之一。標準中雖然給出了浮游菌和沉降菌的檢測方法，但過程不甚細致，尤其是對毫無微生物基礎的檢測人員而言，往往無法完成對該項指標的測試。為了加強對微生物培養基的質量控制，避免因不適當操作而引起的生物污染，保障檢測過程中工作人員的健康，本文詳細給出了大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）制備過程中使用的儀器設備﹑材料和制備程序，與廣大檢測工作者共享。

1 質量控制程序

1.1 儀器和設備

高壓消毒鍋：使用時應嚴格按照儀器說明書操作；電子天平：必須經過計量檢定合格；容量瓶: 必須經過計量檢定合格；恒溫培養箱：必須經過計量校準合格；培養皿：一般采用90 mm×15 mm的硼硅酸玻璃培養皿。

1.2 大豆酪蛋白瓊脂培養基（TSA）培養基配方

酪蛋白胰酶消化物 15 g；大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5 g；氯化鈉 5 g；瓊脂 15 g；蒸餾水或離子交換水1000 ml。因自來水或井水中含有鈣和鎂，會與蛋白胨或牛肉浸膏中的磷酸鹽發生反應，生成磷酸鈣和磷酸鎂等沉淀，影響培養基的質量。

1.3 制備方法

1.3.1 稱量

按培養基配方比例依次推確地稱取酪蛋白胰酶消化物﹑大豆粉木瓜蛋白酶消化物﹑氯化鈉﹑瓊脂放人燒杯中。

1.3.2 溶化

在上述燒杯中先加入少量純化水，用玻棒攪勻，然后在石棉網上加熱使其溶解，將完全溶解后，補充水至1000 ml。在溶化過程中，應控制火力，以免培養基因沸騰而溢出容器。同時，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底燒焦。配制培養基時，不可用銅或鐵鍋加熱溶化，以免離子進入培養基中，影晌細菌生長。

1.3.3 調 pH

在未調 pH前，先用精密 pH試紙測量培養基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培養基中逐滴加入NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用 pH試紙測其 pH，直至 pH達7.3±0.2。反之，用HCL調節。

1.3.4 分裝

將培養基分裝至三角瓶內，瓶內分裝量以不超過三角燒瓶容積的一半為宜。

1.3.5 加塞

培養基分裝完畢后，在試管口或三角烷瓶口上塞上棉塞，加塞時的棉塞的總長度的 3/5應在口內，2/5在口外。

1.3.6 包扎

加塞后，將全部試管用麻繩捆好，再在棉塞外包一層牛皮紙，以防止滅菌時冷凝水潤濕棉塞，其外再用一道麻繩扎好。用記號筆注明培養基名稱﹑組別﹑配制日期。

1.3.7 滅菌

將上述培養基以 0.103 MPa，121 ℃，20 min高壓蒸汽滅菌。

1.3.8 無菌操作下倒平板

同時預先將潔凈工作臺﹑酒精燈﹑噴壺﹑封口膜﹑平面皿等采取紫外線滅菌30 min。待滅菌后的培養基冷至60℃后，開啟潔凈工作臺，點燃酒精燈，用酒精燈擦拭雙手，將三角瓶口端捆在玻棒或其他合適高度的器具上，將培養基倒入無菌平皿，每個培養皿約20 ml培養基。

1.3.9 無菌撿查

將滅菌后培養基平皿放人 37 ℃的恒溫培養箱中培養

24～48 h，檢查滅菌是否徹底。若無微生物生長，則培養基制備合格，否則應廢棄重新配置。制備好的培養基平皿宜在2～8 ℃保存，使用期限一般以一周為宜。

2 討論

在做培養基的滅菌檢查時，如果培養基的容器較大，需相應延長滅菌時間。對有特殊需求的培養基，應嚴格按

TQ460.8+2

C

1002-2376（2015）12-0033-02

2015-11-06