復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型的影響

林波，向麗，劉宇，石金鳳，張桂，曾勇，孟憲麗，陳小睿

復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型的影響

林波，向麗，劉宇，石金鳳，張桂，曾勇，孟憲麗，陳小睿

目的：研究復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭（ARF）模型的影響。方法：用50%的甘油按照10 mL．kg-1分別在大鼠兩側后肢肌肉注射造成急性腎衰模型，將大鼠分為模型對照組、復方保腎顆粒三個劑量組（3.6，1.8，0.9 g．kg-1）、醋酸地塞米松組，另設空白對照組。連續灌胃4天后測定大鼠尿蛋白、血清肌酐（Scr）、血清尿素氮（BUN）、血清總蛋白量、K+、Na+含量及腎臟指數。結果：復方保腎顆粒能明顯降低甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型的尿蛋白、Scr及BUN的含量，明顯降低腎臟指數。結論：復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型具有一定的保護作用。

復方保腎顆粒；急性腎功能衰竭；尿蛋白；肌酐；尿素氮

急性腎功能衰竭( acute renal failure, ARF) 是指由各種原因引起的腎功能在短期內（幾小時至幾天）急劇下降， 導致體內代謝產物潴留, 水、電解質、酸堿平衡紊亂的臨床綜合征[1]。復方保腎顆粒是由黃芪、絡石藤、魚腥草等中藥組成的臨床科研經驗方，主要用于治療慢性腎炎之風濕熱擾腎，腎絡瘀痹證[2]。方中黃芪為君藥，現代研究表明黃芪對機體免疫系統、腎臟系統具有藥理作用，能增強機體體液免疫與細胞免疫功能，保護腎小球血管內皮細胞結構完整性，還具有較好的利尿作用[3]。本實驗選用了經典急性腎衰動物模型—甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型，觀察復方保腎顆粒對該模型的治療作用，為臨床應用提供理論依據。

1 實驗材料

1.1 藥物

復方保腎顆粒（浸膏粉），由成都中醫藥大學中藥炮制與制劑教研室提供，批號：20120511；醋酸地塞米松片，浙江仙琚制藥股份有限公司生產，批號：20130123。

1.2 動物

SD大鼠，SPF級，雄性，體重140～160 g，由成都達碩生物科技有限公司提供，實驗動物生產許可證號：SCXK（川）2008-24。

1.3 試劑

甘油（丙三醇），成都市科倫化工試劑廠，批號20120310；氯化鈉注射液，四川科倫藥業股份有限公司生產，批號M12091019；尿蛋白定量測試盒、肌酐測試盒、尿素氮測試盒、血清總蛋白測試盒、血清K+、Na+測試盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.4 儀器

Varioskan全波長多功能酶標儀，美國ThermoFisher Scientific；分析電子天平，FA1104型，上海良平儀器儀表有限公司；電子天平，T500型，常熟市雙杰測試儀器廠；尿蛋白定性試紙，桂林優利特醫療電子有限公司。

2 方法

2.1 動物造模

SD大鼠，雄性，體重140～160 g。預先置于代謝籠中3日適應環境，觀察自由飲水條件尿量是否穩定。實驗前禁水24 h，以50%甘油按10 mL．kg-1分別在大鼠兩側后肢肌肉注射，完后大鼠自由進食和飲水，一般在2 h后出現血紅蛋白尿，48 h形成穩定模型（以尿蛋白試紙檢測陽性為模型成功）[4～6]。

2.2 分組與給藥

將造模成功的大鼠按體重分層，隨機均衡分為5組，每組10只，分別為：模型對照組(0.3%CMCNa溶液)，復方保腎顆粒3個劑量組（3.6、1.8、0.9 g．kg-1），醋酸地塞米松組(0.1 mg．kg-1)。另設空白對照組（0.3%CMC-Na溶液），共6組，每組10只大鼠，按上述劑量連續給藥4天。

2.3 動物處死

末次給藥后將大鼠放入代謝籠禁食不禁水，收集大鼠尿液，進行尿蛋白含量測定。次晨，全部大鼠麻醉后腹主動脈取血，分離血清測BUN、Scr、血清總蛋白量及血清中K+、Na+含量，分離大鼠腎臟，稱重，計算腎臟指數。

2.4 統計方法

3 實驗結果

3.1 復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型尿蛋白、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的影響

與空白對照組相比，模型對照組動物尿蛋白、血清Scr、BUN含量顯著升高，與模型對照組相比，復方保腎顆粒中、低劑量組，醋酸地塞米松組動物尿蛋白、血清Scr、BUN含量明顯降低（p＜0.01或p＜0.05），復方保腎顆粒高劑量組也有降低趨勢，但無顯著性差異。結果見表1。

表1 復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型給藥結束后尿蛋白、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的影響（±s,n=10）

表1 復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型給藥結束后尿蛋白、血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的影響（±s,n=10）

注：與模型對照組比較，* p＜0.05, ** p＜0.01

組別 劑量（g．kg-1）尿蛋白（mg．L-1）Scr (μmol．L-1) BUN (mmol．L-1)空白對照組 —— 575.2±91.5** 99.4±6.3** 7.0±1.9**模型對照組 —— 1299.8±172.2 150.8±12.6 17.6±1.9醋酸地塞米松組 0.1 mg．kg-11144.6±143.5*133.4±9.6**12.9±4.4**復方保腎顆粒高劑量組 3.6 1184.4±154.0 143.0±8.4 15.5±3.4復方保腎顆粒中劑量組 1.8 1136.5±152.1*138.7±13.7* 13.4±5.9*復方保腎顆粒低劑量組 0.9 1137.7±164.7*139.7±8.3* 13.6±2.8*

3.2 復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型血清總蛋白、血清K+、Na+的影響

與空白對照組相比，模型對照組動物血清總蛋白顯著降低，血清Na+顯著升高，模型對照組相比，復方保腎顆粒各劑量組含量動物血清總蛋白、血清Na+含量均無明顯變化（p＞0.05），但均有改善趨勢。各組動物血清K+均無明顯差異（p＞0.05）。結果見表2。

表2 復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型血清總蛋白、血清K+、Na+的影響（±s,n=10）

表2 復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型血清總蛋白、血清K+、Na+的影響（±s,n=10）

注：與模型對照組比較，*p＜0．05， **p＜0．01

組別 劑量（g．kg-1）血清總蛋白(μg．mL-1) K+ (mmol．L-1) Na+(mmol．L-1)空白對照組 —— 77.4±21.5** 5.55±0.88 109.3±17.8**模型對照組 —— 52.9±13.5 5.32±0.82 131.7±7.8醋酸地塞米松組 0.1 mg．kg-169.9±12.0* 5.47±0.77 117.6±11.0*復方保腎顆粒高劑量組 3.6 59.5±21.5 5.13±0.64 121.2±15.4復方保腎顆粒中劑量組 1.8 62.3±13.6 5.79±0.71 123.0±11.1復方保腎顆粒低劑量組 0.9 53.6±17.8 5.84±0.92 121.7±13.4

3.3 復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型腎臟系數的影響

與空白對照組相比，模型對照組動物腎臟系數極其明顯的提高，與模型對照組相比，復方保腎顆粒高、中、低劑量組，醋酸地塞米松組動物腎臟系數均有不同程度的明顯降低（p＜0.01或p＜0.05），結果見表3。

表3 復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型腎臟系數的影響（±s,n=10）

表3 復方保腎顆粒對甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型腎臟系數的影響（±s,n=10）

注：與模型對照組比較，* p＜0．05， ** p＜0．01

組別 劑量（g．kg-1）腎臟系數（g/g體重×100%）空白對照組 —— 0.920±0.069**模型對照組 —— 2.162±0.441醋酸地塞米松組 0.1 mg．kg-11.653±0.435**復方保腎顆粒高劑量組 3.6 1.791±0.412*復方保腎顆粒中劑量組 1.8 1.658±0.344**復方保腎顆粒低劑量組 0.9 1.622±0.332**

4 討論

復方保腎顆粒由黃芪、絡石藤、魚腥草等配伍為用，其中君藥黃芪補脾升陽、利尿消腫，全方組合具有祛風清熱利濕，活血通絡的作用。本實驗所采用的甘油法致大鼠急性腎功能衰竭模型屬橫紋肌溶解所致，外傷性和非外傷性橫紋肌溶解所致的急性腎功能衰竭約占臨床所有急性腎衰病例的15%～20%，且橫紋肌溶解性急性腎衰透析治療效果欠佳，死亡率高。大量臨床研究證實他汀類藥物引起橫紋肌溶解性急性腎衰的發生率約為0.1%[7]。大鼠注射50%甘油后，腎血流減少，腎小管內皮細胞腫脹，增大了腎血管阻力，血管節段性壞死，外膜纖維化，血管自身調節功能喪失，導致腎小球濾過率下降。另外，腎小球及腎小管周圍纖維蛋白沉積，血管內血瘀積，血栓形成, 血流不暢, 導致腎小球濾過率下降，腎小管壞死[8]。

在本實驗中，造模后的大鼠模型在腎功能和腎臟方面表現出明顯改變，主要體現在尿蛋白濃度升高，血清肌酐、尿素氮含量升高，導致血清總蛋白含量下降，腎臟指數明顯增大，表明造模成功。結果顯示，復方保腎顆粒能降低模型大鼠的尿蛋白、血肌酐、血尿素氮的含量，并在一定程度上減輕了腎臟的病理損害。關于復方保腎顆粒治療該動物模型的作用機制，還有待于我們進一步深入研究。

[1] 葉任高,陸再英,謝毅,等.內科學[M].北京:人民衛生出版社, 2004: 536.

[2] 林波,劉宇,向麗,等.復方保腎顆粒對家兔C-BSA異種血清免疫復合型腎炎模型的影響[J].中藥藥理與臨床,2014,30(3):121.

[3] 熊明彪.黃芪的藥理作用及臨床研究進展[J].亞太傳統醫藥,2013,9(10):70.

[4] 朱虹,楊進.急性腎功能衰竭動物模型的研究現狀和評價[J].實驗動物科學與管理, 2005, 22(2): 44.

[5] 黎祥勝,韓社香,張蓉,等.中華腎寧片對甘油誘導急性腎衰大鼠腎功能的影響[J].中成藥, 2000,22 (4):289.

[6] 國明,侯傳香,郝玲玲,等.腎安康膠囊對急性腎功能衰竭模型大鼠的保護作用[J].中國新藥雜志, 2012, 21(18):2202.

[7] 凌伯勛,劉克清,陳雙秀,等.卡托普利對甘油誘導的急性腎衰的保護作用及其機制探討[J].中南藥學, 2008, 6(3):270.

[8] 鄧虹珠,金偉軍,廖錫麟,等.急性腎功能衰竭病理模型的設計和方法[J].中國中藥雜志, 1998, 23(1):48.

（責任編輯：陳思敏）

The effects of Fufangbaoshen granule on acute renal failure rat induced by glycerin

LIN Bo, XIANG Li, LIU Yu, SHI Jinfeng, ZHANG Gui, ZENG Yong, MENG Xian-li, CHEN Xiao-rui//(School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:The effects of Fufangbaoshen granule on acute renal failure rat induced by glycerin were investigated.Method:Acute renal failure rats were induced by injection of 50% (v/v, i.m) glycerin into the leg muscle (10 mL．kg-1). And then rats were divided into model group, Fufangbaoshen granule group (3.6、1.8、0.9 g．kg-1), dexamethasone group. Normal control group was also used in the experiment. After intragastric administration for 4 days, the indexes including urine protein, SCR, BUN and serum total protein, the content of K+and Na+, and kidney coeffcient of rats were tested.Result:Fufangbaoshen granule could not only signifcantly decrease the contents of urine proteins，Scr and BUN, but also decrease rats' kidney index.Conclusion:Fufangbaoshen granule shows protective effect on acute renal failure rat induced by glycerin.

Fufangbaoshen granule; acute renal failure; urine protein; Scr; BUN

R 285.5

A

1674-926X(2015)04-006-03

四川省科技廳省青年科技創新研究團隊專項計劃項目（2014TD0007）

成都中醫藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 中藥資源系統研究與開發利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

林波，在讀碩士研究生，主要從事中藥藥效與毒理研究Tel:15828511724 Email:linbo0319@qq.com

陳小睿，副教授，碩導，主要從事中藥藥效與毒理研究 Tel:13882071427 Email:icelolly@yahoo.cn

2014-09-10