IL-17在系統性硬皮病患者中的表達及與結締組織生長因子的相關性

劉孟莊，王 娟，阿克木江·阿西木

(1. 新疆維吾爾自治區人民醫院，新疆 烏魯木齊 830001；2解放軍第23醫院，新疆 烏魯木齊 830000)

IL-17在系統性硬皮病患者中的表達及與結締組織生長因子的相關性

劉孟莊1，王 娟1，阿克木江·阿西木2

(1. 新疆維吾爾自治區人民醫院，新疆 烏魯木齊 830001；2解放軍第23醫院，新疆 烏魯木齊 830000)

目的 探討白細胞介素-17(IL-17)在系統性硬皮病(SSc)患者中的表達水平，及其與結締組織生長因子(CTGF)的相關性。方法 選擇68例SSc患者和同期整形外科收治的30例非SSc患者，采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血漿IL-17水平，采用免疫組化SABC法檢測皮膚CTGF含量。比較各組IL-17和CTGF表達水平的差異，及二者的相關性。結果 與對照組比較，SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達水平較對照組顯著升高，且活動組IL-17、CTGF蛋白表達水平顯著高于非活動組(P<0.05)；彌漫型SSc組IL-17、CTGF蛋白表達水平較局限型SSc組明顯增高(P<0.05)；SSc患者IL-17、CTGF蛋白與改良Rodman總皮膚厚度評分(MRSS)均呈線性正相關(r=0.712,0.738,P<0.05)；血漿IL-17與皮損組織CTGF蛋白亦呈線性正相關(r=0.680,P<0.05)。結論 IL-17在SSc患者外周血中表達增高，與CTGF具有較好相關性，共同參與了SSc的發病過程，阻斷Th17細胞活化、分泌IL-17，有望為SSc的治療提供新的靶點。

系統性硬皮病；白細胞介素-17；結締組織生長因子

系統性硬皮病(SSc)又稱硬化癥，是一種自身免疫性彌漫性結締組織疾病，發病高峰年齡是30～50歲，以手、足皮膚發硬為突出表現，嚴重者可出現全身皮膚僵硬和內臟器官纖維化[1]。研究認為，免疫性疾病患者組織和外周血中的Th17/Treg細胞體系處于失衡狀態，而由Th17分泌的白細胞介素-17(IL-17)對固有免疫及獲得性免疫炎癥均有促進作用[2]。目前，結締組織生長因子(CTGF)對SSc的作用已得到證實[3]，但其與IL-17的相關性，是否共同作用于SSc的發病，國內尚未見報道。本研究通過聯合檢測SSc患者IL-17和CTGF的表達水平，并分析其相關性，旨在為SSc的發病機制研究提供新的思路。

1 臨床資料

1.1一般資料 選擇2009年1月—2013年12月新疆維吾爾自治區人民醫院皮膚科收治的SSc患者共68例，均符合1980年美國風濕協會制訂的SSc分類標準[4]，并經組織病理檢查確診。其中男25例，女43例；年齡34～67(46.1±5.7)歲；病程3～105(39.4±8.6)個月；按照Valentini評分標準：活動組(≥3分)29例，非活動組(<3分)39例；改良Rodnan總皮膚厚度評分(MRSS)為4.4～7.3(6.1±0.7)分；彌漫型SSc 37例，局限型SSc 31例。同時選擇我院整形外科收治的非SSc患者30例，其中男13例，女17例；年齡33～69(45.8±6.1)歲。本研究經我院倫理學委員會審核通過，所有研究對象均簽署知情同意書。2組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 標本采集及檢測

1.2.1 IL-17 所有研究對象均于清晨抽取空腹靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管中，充分混勻，3 000 r/min離心10 min，留取上層血漿。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測血漿IL-17水平，試劑盒購自深圳晶美生物工程有限公司，所有操作嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.2.2 CTGF 破損標本取自前臂伸側或脛前部皮損患處，未經任何藥物治療。對照標本取自整形外科手術切除的正常皮膚組織。將標本組織通過10%甲醛固定、石蠟包埋，4 μm厚連續切片后進行免疫組化SABC法染色。每例標本組織均取相連的3張切片，常規脫蠟、水化、0.01 mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)作抗原熱修復。兔抗人CTGF免疫組化單克隆抗體購自美國Santa Cruz生物技術公司，S-P免疫組化試劑盒均購自福州邁新生物技術開發公司，均采用試劑盒已知陽性組織作為陽性對照，以PBS代替一抗體作為陰性對照。

1.3 CTGF蛋白表達定量方法 采用Nikon Eclipss E600型全自動圖像分析儀及Image-proplus圖像分析軟件進行定量分析，每張切片選取四周及中央5個區域(10×40倍)，均取該區域陽性反應最多的視野。測陽性反應面積比(陽性面積/組織面積×100%)，即吸光度值(A)，再取平均值。

2 結 果

2.1SSc患者疾病活動度與IL-17、CTGF表達的關系 與對照組比較，SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達水平均顯著升高，且活動組IL-17、CTGF蛋白表達水平顯著高于非活動組(P<0.05)。見表1。

表1 SSc患者疾病活動度與IL-17、CTGF表達的關系

注：①與對照組比較，P<0.05；②與非活動組比較，P<0.05。

2.2 不同亞型的SSc患者IL-17、CTGF表達比較 與對照組比較，彌漫型和局限型SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達水平均顯著升高(P<0.05)，且彌漫型SSc組IL-17、CTGF蛋白表達水平明顯高于局限型SSc組(P<0.05)。見表2。

表2 不同亞型SSc患者IL-17、CTGF表達比較

注：①與對照組比較，P<0.05；②與非活動組比較，P<0.05。

2.3SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達水平與MRSS的相關性分析 經Pearson相關性分析顯示，SSc患者IL-17、CTGF蛋白與MRSS均呈線性正相關(r=0.712,0.738,P<0.05)；血漿IL-17與皮損組織CTGF蛋白亦呈線性正相關(r=0.680,P<0.05)。

3 討 論

SSc的發病機制復雜，目前尚不十分清楚，臨床上缺乏有效的藥物，但免疫功能紊亂作為發病的重要原因已達成共識[5]。大量文獻證實CTGF作為轉化生長因子β(TGF-β)的下游效應因子，具有極強的致纖維化作用，在多種肺、肝等器官的纖維化疾病中高表達。近年來，研究發現SSc組織纖維化與CD4+T細胞的活化密切相關[6]，且血漿IL-17水平和TGF-β在不同亞型的SSc患者體內選擇性增高，但關于IL-17與CTGF之間的相互關系，以及二者在SSc發病機制中的作用尚未見相關報道。

IL-17作為新近發現的一種致炎細胞因子，是由不同于Th1、Th2的CD4+T細胞亞群所分泌，該亞群細胞被命名為Th17細胞[7]。本組研究顯示，與對照組比較，SSc患者IL-17、CTGF蛋白表達水平較對照組有不同程度顯著升高，且活動組IL-17、CTGF蛋白表達水平顯著高于非活動組(P<0.05)，推測IL-17在SSc發病機制中起一定的作用，一方面IL-17可誘導其他炎癥細胞的活化、聚集，促進炎癥反應；另一方面IL-17還可促進成纖維細胞的增生，影響機體纖維化的形成。同時彌漫型SSc組IL-17、CTGF蛋白表達水平較局限型SSc組明顯增高(P<0.05)，說明IL-17水平與病情嚴重程度相關，高水平IL-17提示病情較重，預后較差。

皮膚增厚是SSc纖維化進展的重要表現，MRSS是目前最常用的臨床評價標準。相關性分析發現，SSc患者IL-17、CTGF蛋白與MRSS均呈線性正相關，進一步說明IL-17與CTGF在SSc參與了SSc致病的整個過程，而并非只在炎癥反應階段發揮作用。有學者研究認為，在SSc疾病的后期，隨著炎癥反應逐漸被抑制，干擾素-γ(IFN-γ)、IL-4等因子水平不斷降低，對Th17細胞的抑制作用也隨之減弱，從而促進IL-17對成纖維細胞的活化，加速纖維化的進展[8-9]。此外，血漿IL-17與皮損組織CTGF蛋白亦呈線性正相關，說明存在較好的相關性和協同性，但二者在SSc發病中的相互作用機制尚需進一步研究證實。

綜上所述，IL-17在SSc患者外周血中表達增高，與CTGF具有較好相關性，共同參與了SSc的發病過程，且可作為SSc病情嚴重程度的判斷指標之一。阻斷Th17細胞活化、分泌IL-17有望為SSc的治療提供新的靶點。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2015.24.032

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1008-8849(2015)24-2703-02

2014-06-15