白喉烏頭的化學(xué)成分研究Δ

汪 芳，趙 軍，趙翡翠，聶繼紅#（1.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊 80011；.新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所/維吾爾藥重點實驗室，烏魯木齊 80004；.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，烏魯木齊 80000）

白喉烏頭的化學(xué)成分研究Δ

汪 芳1＊，趙 軍2，趙翡翠3，聶繼紅3#（1.新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，烏魯木齊 830011；2.新疆維吾爾自治區(qū)藥物研究所/維吾爾藥重點實驗室，烏魯木齊 830004；3.新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，烏魯木齊 830000）

目的：研究白喉烏頭的化學(xué)成分。方法：采用硅膠、Sephadex LH-20等色譜技術(shù)分離純化白喉烏頭中的化學(xué)成分，根據(jù)波譜數(shù)據(jù)和理化性質(zhì)進行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果與結(jié)論：共鑒定出了5個化合物，分別為Delvestidine（1）、高烏甲素（2）、N-去乙酰高烏甲素（3）、氨茴酰牛扁堿（4）、冉烏堿（5）。其中，化合物1、5為首次從白喉烏頭中獲得。

白喉烏頭；生物堿；化學(xué)成分

＊碩士研究生。研究方向：中藥復(fù)方制劑的開發(fā)。E-mail：w fang9009@163.com

#通信作者：教授，主任藥師，碩士生導(dǎo)師。研究方向：新藥研發(fā)。電話：0991-5810646。E-mail：xjnjh411@163.com

白喉烏頭Aconitum leucostomumWorosch.為毛茛科烏頭屬的多年生草本植物，主要分布于甘肅、新疆以及東北地區(qū)[1]。該藥材根部供藥用，其性味辛、苦，大熱，有毒，具祛風(fēng)散寒、消腫止痛、通經(jīng)活絡(luò)之功，一般用于風(fēng)寒濕痹等疾患的治療，收載于《哈薩克藥志》等醫(yī)藥文獻中[2]。此外，白喉烏頭在草場上廣泛生長，在嚴重危害牲畜生產(chǎn)與健康的同時，也會嚴重降低草地的品質(zhì)和質(zhì)量，繼而制約畜牧業(yè)生產(chǎn)。若能將這種具有顯著藥用價值的植物進行了規(guī)范性利用與開發(fā)，將有利于牧區(qū)經(jīng)濟發(fā)展。為此，本研究對白喉烏頭根進行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。

1 材料

1.1 儀器

INOVA-600和400型超導(dǎo)核磁共振儀（美國VARIAN公司）；WHF-203B暗箱式紫外分析儀（上海精科實業(yè)有限公司）。

1.2 試劑

硅膠（200～300目，青島海洋化工）；Sephadex LH-20凝膠（Amersham Pharmacia Biotech AB公司）；硅膠G（青島海洋化工）；所用試劑均為分析純。

1.3 藥材

白喉烏頭于2012年采自新疆伊犁州尼勒克縣，經(jīng)新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)院李永和教授鑒定為白喉烏頭A.leucostomumWorosch.的干燥根。樣品保存于新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)院藥研室。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離

取白喉烏頭根藥材10.0 kg，粉碎，過20目篩，用95%乙醇冷浸提取，提取液經(jīng)薄膜蒸發(fā)濃縮后以2%HCl混懸，石油醚萃取脫脂；剩余水液用氨水調(diào)pH至4，用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷萃取液，得pH為4的部位；水層用氨水調(diào)pH至8，用二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷萃取液，得pH為8的部位；水層用10%NaOH調(diào)pH至11，用二氯甲烷萃取，得pH為11的部位；水層再用飽和正丁醇萃取，得正丁醇部位。將上述不同部位分別經(jīng)反復(fù)硅膠、Sephadex LH-20凝膠柱色譜、結(jié)合重結(jié)晶等方式進行分離。其中，pH為4的部位經(jīng)硅膠（200～300目）柱，用石油醚-乙酸乙酯-二乙胺（10∶1∶0.5～5∶5∶0.5，V/V/V）梯度洗脫：用石油醚-乙酸乙酯-二乙胺（10∶1∶0.5，V/V/V）洗脫的第4～9組分合并后經(jīng)硅膠H柱、用石油醚-乙酸乙酯-二乙胺（20∶1∶0.5，V/V/V）洗脫得化合物1（748.0mg）；用石油醚-乙酸乙酯-二乙胺（9∶1∶0.5，V/V/V）洗脫的第2～8組分中得到化合物2（18.887 8 g），第11～16組分合并后經(jīng)ODS反相硅膠柱，用甲醇-水（7∶3，V/V）洗脫得到化合物3（8.037 3 g）；用石油醚-乙酸乙酯-二乙胺（8∶2∶0.5，V/V/V）洗脫的第10～14組分合并后經(jīng)硅膠（200～300目）柱、石油醚-乙酸乙酯-二乙胺（7∶3∶0.5，V/V/V）洗脫的第4～8組分得化合物5（300mg）。取pH為8的部位經(jīng)硅膠（200～300目）柱、用石油醚-乙酸乙酯-二乙胺（10∶1∶0.5～5∶5∶0.5，V/V/V）梯度洗脫：由石油醚-乙酸乙酯-二乙胺（8∶2∶0.5，V/V/V）洗脫的第11～15組分合并后，經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱色譜、用石油醚-三氯甲烷-甲醇（5∶5∶1，V/V/V）洗脫純化得化合物4（315.3mg）。pH為11的部位與正丁醇部位待進一步分離。

2.2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性。分子式：C33H48N2O8。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：1.07（3H，t，J＝36.8 Hz，N—CH2CH3），2.70（1H，s，H-17），3.23、3.35、3.37、3.46、3.47（各3H，s，—OCH3），3.67（1H，s，14-βH），5.73（1H，s，—NH2），6.65（1H，t，J＝15.6 Hz，Ar-H），7.82（1H，d，J＝8 Hz，Ar-H）。13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ（ppm）：14.85（C-22），25.59（C-2），27.92（C-12），28.04（C-15），31.89（C-3），37.70（C-4），37.97（C-13），0.48（C-5），46.71（C-10），47.55（C-11），51.81（C-21），51.92（C-9），53.27（C-19），54.36（C-8′），55.60（C-1′），56.42（C-16′），57.65（C-14′），59.81（C-6′），66.24（C-17），69.51（C-18），80.71（C-8），82.81（C-16），83.11（C-14），83.43（C-1），90.11（C-7），91.37（C-6），10.76（C-1″），116.25（C-5″），116.72（C-3″），131.08（C-6″），134.12（C-4″），150.58（C-2″），167.96（C＝O）。以上數(shù)據(jù)與文獻[3]中的Delvestidine基本一致，13C核磁共振譜化學(xué)位移基本一致，故確定該化合物為Delvestidine。

化合物2：白色方晶，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性。熔點（mp）

208～210℃。分子式：C32H44N2O8。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：1.13（3H，t，J＝6.8 Hz，N—CH2CH3），2.23（3H，s，—COCH3），3.32（6H，s，—OCH3×2），3.42（3H，s，—OCH3），7.03（1H，td，J1＝1.2 Hz，J2＝8.4 Hz，H-5″，Ar-H），7.50（1H，td，J1＝1.6 Hz，J2＝8.4 Hz，H-4″，Ar-H），7.93（1H，dd，J1＝8 Hz，J2＝1.2 Hz，H-3″，Ar-H），8.67（1H，d，J＝8.4Hz，H-6″，Ar-H），11.06（1H，s，NHCOCH3）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ（ppm）：13.56（C-22），24.14（C-12），25.56（NHCOCH3），26.23（C-2），26.81（C-6），31.87（C-3），36.32（C-13），44.89（C-15），47.58（C-7），48.58（C-5），49.01（C-21），49.90（C-10），50.98（C-11），55.72（C-19），56.35（C-16′），56.14（C-1′），57.94（C-14′），61.55（C-17），75.65（C-8），78.57（C-9），82.90（C-16），84.19（C-1），84.62（C-4），90.15（C-14），115.78（C-1″），20.22（C-3″），122.33（C-5″），131.08（C-6″），134.38（C-4″），141.65（C-2″），167.42（A rCO），169.04（NHCOCH3）。以上數(shù)據(jù)與從高烏頭A. sinomontanumNakai中分離的高烏甲素基本一致，13C核磁共振譜化學(xué)位移基本一致，故確定該化合物為高烏甲素[4]。

化合物3：白色無定形粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性。mp 202～204℃。分子式：C30H42N2O7。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ（ppm）：1.11（3H，t，J＝7.2Hz，N—CH2CH3），2.99（1H，s，H-17），3.30（3H，s，—OCH3），3.32（3H，s，—OCH3），3.41（3H，s，—OCH3），5.64（2H，s，—NH2），6.60（2H，m），7.22（1H，t，J＝15.2 Hz），7.76（1H，d，J＝8.4 Hz，Ar-H）；13C NMR（100 MHz，CDCl3）δ：13.58（C-22），24.08（C-12），26.26（C-2），26.83（C-6），31.98（C-3），36.33（C-13），44.87（C-15），47.56（C-7），48.83（C-5），49.01（C-10），49.85（C-21），50.86（C-11），55.66（C-19），56.12（C-16′），56.53（C-1′），57.93（C-14′），61.62（C-17），75.69（C-8），78.58（C-9），82.90（C-1），82.94（C-16），84.41（C-4），90.19（C-14），111.95（C-1″），116.25（C-5″），116.63（C-3″），131.55（C-6″），133.80（C-4″），150.39（C-2″），167.37（ArCO）。以上數(shù)據(jù)與從高烏頭A.sinomontanumNakai中分離的N-去乙酰高烏甲素基本一致，13C核磁共振譜化學(xué)位移基本一致，故確定該化合物為N-去乙酰高烏甲素[4]。

化合物4：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性。mp 165～167℃。分子式：C32H46N2O8。1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：1.07（3H，t，J＝16 Hz，N—CH2CH3），3.26、3.34、3.35、3.42（各3H，s，—OCH3），3.61（3H，t，J＝8 Hz，14-βH），3.92（1H，br，s，8-αH），4.00、4.13（各1H，s，18-H），5.74（2H，br，s，NH2），6.67、7.29（各1H，t，J＝16 Hz，Ar-H），7.81（1H，d，J＝8 Hz，Ar-H）；13CNMR（100MHz，CDCl3）δ（ppm）：14.10（C-22），26.17（C-2），28.73（C-12），32.26（C-3），33.59（C-15），37.58（C-4），38.27（C-13），43.25（C-5），46.15（C-10），49.08（C-11），50.34（C-9），51.03（C-21），52.46（C-19），55.82（C-1′），56.31（C-16′），57.85（C-6′），57.99（C-14′），64.55（C-17），68.63（C-18），77.54（C-8），82.59（C-16），83.94（C-14），84.06（C-1），88.51（C-7），90.90（C-6），110.33（C-1″），116.30（C-5″），116.84（C-3″），130.73（C-6″），134.33（C-4″），150.73（C-2″），167.81（C＝O）。以上數(shù)據(jù)與從草烏A.kusnezoffiiReichb.中分離得到的氨茴酰牛扁堿基本一致，13C核磁共振譜化學(xué)位移基本一致，故確定該化合物為氨茴酰牛扁堿[5]。

化合物5：白色粉末，碘化鉍鉀反應(yīng)呈陽性。mp.（130～132）℃。分子式：C32H44N2O9，1H NMR（400 MHz，CDCl3）δ：1.13（3H，t，J＝16 Hz，N—CH2CH3），2.23（1H，s，NHCOCH3），3.33（3H，s，—OCH3），3.35（3H，s，—OCH3），3.43（3H，s，—OCH3），7.01（3H，t，J＝12 Hz），7.41（1H，t，J＝8 Hz），7.94（1H，d，J＝8 Hz），8.67（1H，d，J＝8 Hz，Ar-H），11.05（1H，br，s，加D2O消失，NHAc）；13CNMR（100MHz，CDCl3）δ：14.55（C-22），25.55（NHCOCH3），25.94（C-12），26.58（C-2），31.64（C-3），32.54（C-6），36.68（C-13），38.05（C-15），48.65（C-5），49.64（C-10），51.12（C-21），51.39（C-11），55.23（C-19），56.22（C-1′），56.22（C-16′），57.97（C-14′），63.07（C-17），77.89（C-8），78.27（C-9），82.76（C-16），83.46（C-1），84.26（C-4），85.43（C-7），89.96（C-14），115.71（C-1″），120.24（C-3″），122.34（C-5″），131.53（C-6″），134.41（C-4″），141.64（C-2″），167.46（ArCO），169.06（NHCOCH3）。以上數(shù)據(jù)與從高烏頭A.sinomontanumNakai中分離的冉烏堿基本一致，13C核磁共振譜化學(xué)位移基本一致，故鑒定該化合物為冉烏堿[4]。

化合物1～5的結(jié)構(gòu)見圖1。

圖1 5種化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig 1 Chem icalstructuresof 5 compounds

3 結(jié)論

本研究從白喉烏頭中分離得到5個生物堿，分別為：Delvestidine（1）、高烏甲素（2）、N-去乙酰高烏甲素（3）、氨茴酰牛扁堿（4）、冉烏堿（5），其中化合物1、5為首次從該植物中獲得。

致謝：本研究中的核磁共振波譜由中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所理化測試中心代測。

[1] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志：第27卷[M].北京：科學(xué)出版社，1979：113-326．

[2] 徐新，巴哈爾古麗·黃爾汗.哈薩克藥志：一卷[M].北京：民族出版社，2009：45-47.

[3] Sam ir AR，Pelletier SW.New norditerpenoid alkaloids from Aconium septentrlonale[J].Tetrahedron，1992，48（7）：1 183.

[4] 彭崇勝，王建忠，簡錫賢，等.高烏頭和彭州巖烏頭中生物堿成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2000，12（4）：45.

[5] 李正邦，呂光華，陳東林，等.草烏中生物堿的化學(xué)研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1997，9（1）：9.

（編輯：孫 冰）

Study on the Chem icalConstituentsofAconitum leucostomum

WANG Fang1，ZHAO Jun2，ZHAO Fei-cui3，NIE Ji-hong3（1.College of TCM，Xinjiang Medical University，Urumqi 830011，China；2.Xinjiang Institute of Materia Medica/Xinjiang Key Laboratory for Uyghur Medicines，Urumqi 830004，China；3.Dept.of Pharmacy，A ffiliated Chinese Traditional Medicine Hospital，Xinjiang Medical University，Urumqi830000，China）

OBJECTIVE：To study the chem ical constituents ofAconitum leucostomum.METHODS：The chem ical constituents ofA.leucostomumwere isolated and purified by silica gel and Sephadex LH-20 chromatography，etc..The structures were identified according to spectral data and physicochem ical properties.RESULTS&CONCLUSION：A total of 5 compounds were identified，including delvestidine（1），lappaconitine（2），N-deacetylase lappaconitine（3），anthranoyllycoctonine（4），ranaconitine（5）. Compound 1 and 5 are isolated from this plant for the first time.

Aconitum leucostomum；A lkaloids；Chem ical constituents

R284.1

A

1001-0408（2015）09-1233-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2015.09.28

國家自然科學(xué)基金（No.81160498）

2014-08-22

2015-01-04）