結(jié)核分枝桿菌特異性抗原檢測在臨床診斷中的意義

【摘要】目的　探討結(jié)核菌特異性抗原ESAT-6及CFP-10在肺結(jié)核及肺炎患者中診斷與鑒別診斷的意義。方法　就我院肺炎患者20例，肺結(jié)核患者40例，通過ELISA實驗及PPD實驗，對2組人群進行比較，研究結(jié)核菌特異性抗原在肺結(jié)核及肺炎患者中診斷與鑒別診斷的意義。結(jié)果　通過ELISA法對二組人群進行結(jié)核菌檢測的陽性率的比較，肺結(jié)核組與肺炎組相比，P＜0.01。通過皮試法（TST法）進行結(jié)核菌素實驗對二組人群結(jié)核菌陽性率的比較，肺結(jié)核組與肺炎組相比，P＞0.05，無統(tǒng)計學意義。結(jié)論　ELISA實驗法在兩組人群的對照中靈敏度特異度均普遍高于PPD實驗方法，并且在肺結(jié)核和肺炎的鑒別診斷中有統(tǒng)計學意義，說明該實驗在臨床中對肺結(jié)核的鑒別診斷是有價值的。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.01.030

作者單位：110044 沈陽市胸科醫(yī)院結(jié)核內(nèi)科　　　　　　　　　　通訊作者：張放，E-mail：zh_zhangfang@163.com

Significance of Mycobacterium Tuberculosis-Specific Antigens Detection in the Clinical Diagnosis

ZHAO Hongmei　ZHANG Fang　Department of Internal Medicine – Tuberculosis，China Shenyang Chest Hospital，Shenyang 110044，China

【Abstract】

Objective　To explore the clinical significance of mycobacterium tuberculosis-specific antigens ESAT-6 and CFP-10 in the diagnosis and identification of tuberculosis and pneumonia. Methods　A total of 20 pneumonia patients and 40 tuberculosis patients were selected，and compared between these two groups through ELISA and PPD methods，in order to study the clinical significance of mycobacterium tuberculosis-specific antigens in the diagnosis and identification of tuberculosis and pneumonia. Results　The comparison of the positive rate of mycobacterium tuberculosis detection with ELISA method showed that P＜0.01 in the tuberculosis group and pneumonia group. PPD method was used to conduct the tuberculin test，and the comparison of the positive rate between twogroups showed there was no significant difference between tuberculosis group and pneumonia group （P＞0.05）. Conclusion　ELISA method has the higher sensitivity and specificity than PPD method in comparison between two grups，and has statistical significance in the diagnosis and identification of tuberculosis and pneumonia，indicating that it has the significance in the clinical diagnosis and identification of tuberculosis.

【Key words】Tuberculosis Infection T Cells spot test，Tuberculous meningitis，PPD

近年來結(jié)核病疫情呈現(xiàn)上升趨勢，是目前感染率和死亡率最高的傳染性疾病，結(jié)核病的快速診斷是全球控制結(jié)核病的重要措施。目前對結(jié)核病的診斷主要依據(jù)細菌學檢查與結(jié)核菌素試驗，由于結(jié)核分枝桿菌本身生長特點以及卡介苗接種在我國的廣泛使用，使得這些方法對結(jié)核病診斷極為有限。本文通過ELISA實驗在血清中檢測CFP-10和ESAT-6這兩種結(jié)核分枝桿菌特異性抗原在確診肺結(jié)核病患者、肺炎患者的表達，與結(jié)核菌素實驗在上述人群中的檢測及這兩種實驗方法在特異度和靈敏度的比較，研究及評價該實驗在臨床診斷中的意義，現(xiàn)報告如下。

1　一般資料與方法

1.1　病例資料

選取我院60例住院患者，其中20例為確診肺炎患者，其中40例為肺結(jié)核確診病例，男性33例，女性27例，年齡16～69歲。所有患者滿足以下標準：（1）初治患者尚未開始用結(jié)核藥；（2）復治患者未用結(jié)核藥一年以上。

1.2　標本處理

采集所有受試對象（結(jié)核病患者在接受抗結(jié)核治療前）空腹靜脈血2 ml，3000轉(zhuǎn)/min離心3分鐘，分離血清，-20℃保存。

1.3　實驗方法測定

1.3.1　ELISA實驗 （1）取100 μl不同濃度的標準品及血清加入反應(yīng)在孔中，25℃放置1小時。（2）沖洗3次后，加入酶標記的抗體，25℃放置1小時。（3）沖洗3次后，加入顯色液，20分鐘后，在所有孔內(nèi)都加入100 μl終止液，混勻后即用酶標儀在450 nm處測定各孔溶液的吸光度值。

1.3.2　結(jié)核菌素實驗（PPD實驗）實驗方法　TST法選擇左側(cè)前臂曲側(cè)中上三分之一處，0.1 ml（5 IU）皮內(nèi)注射，用26號10 mm長的一次性短斜面的針頭和1 ml注射器，注射后應(yīng)能產(chǎn)生凸起的皮丘，邊界清楚，上面可以看見明顯的小凹。實驗后48～72小時看結(jié)果。

2　實驗結(jié)果

2.1　通過ELISA法對兩組人群進行結(jié)核菌檢測的陽性率的比較，結(jié)果肺結(jié)核組與肺炎組的P值＜0.01，有統(tǒng)計學意義。兩組比較的特異度和靈敏度分別為92.5%和80%。

2.2　通過皮試法（TST法）進行結(jié)核菌素實驗對兩組人群結(jié)核菌陽性率的比較得出的結(jié)果。肺結(jié)核組與肺炎組的P值＞0.05，無統(tǒng)計學意義，靈敏度為95%，特異度僅為5%。

3　討論

隨著全球結(jié)核病的迅速增加結(jié)核病的診斷和鑒別診斷顯得尤為重要。目前結(jié)核病的診斷主要依靠痰涂片鏡檢、結(jié)核菌培養(yǎng)、結(jié)核菌素實驗和影像學等相關(guān)實驗進行檢測。ESAT-6（early secretory antigrntic target-6，ESAT-6）是一種特異性低分子質(zhì)量分泌性蛋白，僅存在于致病性結(jié)核桿菌中。ESAT-6能刺激機體產(chǎn)生特異性免疫球蛋白，因此利用其結(jié)合特性，采用ELISA方法檢測患者血清抗原和抗體含量，就可以區(qū)分MTB感染還是接種了BCG。CFP-10（culture filtrate protein-10）是1998年鑒定出來的低分子質(zhì)量蛋白，能被特異性識別并釋放γ干擾素（interfe ron-γ，IFN-γ），CFP-10 可作為T細胞診斷抗原。CFP-10和ESAT-6聯(lián)合可使敏感性提高到90%，特異性提高到97%。

本次實驗選擇了ELISA法檢測ESAT-6和 CFP-10在兩組人群中的存在情況并與目前一直在沿用的PPD實驗進行比較，最終由統(tǒng)計學分析結(jié)果評價ELISA在臨床應(yīng)用的可行性。

本研究用ELISA法檢測的兩組人群進行比較，可以看到肺結(jié)核組與肺炎組的比較是有統(tǒng)計學意義，P<0.01，特異度和靈敏度分別為92.5%和80%，說明該方法在區(qū)別肺結(jié)核與肺炎是可以考慮作為鑒別診斷的依據(jù)。我們對TST法進行了統(tǒng)計學分析，在肺結(jié)核組與炎癥組的比較中沒有統(tǒng)計意義，P>0.05，靈敏度和特意度分別為95%和5%，影響該結(jié)果的原因也在很大程度上受卡介苗的影響，這也是一直以來不能用PPD實驗作為結(jié)核病診斷依據(jù)的主要原因。實驗結(jié)果表明ELISA實驗法在兩組人群的對照中靈敏度特異度均普遍高于PPD實驗方法，并且在肺結(jié)核和肺炎的鑒別診斷中有統(tǒng)計學意義，說明該實驗在臨床中對肺結(jié)核的鑒別診斷是有價值的。