論多管發酵法檢測生活飲用水中大腸菌群

【摘要】目的　利用多管發酵法檢測生活飲用水中大腸桿菌群情況，對被大腸菌群污染的情況做初步判斷。方法　采取生活飲用水80份水樣，其中包括井水25份，蓄水池水35份，城鎮自來水20份，利用多管發酵法檢測生活飲用水中大腸菌群，分析大腸桿菌群污染情況。結果 在80份水樣中，總體合格率為87.5%，井水25份中其合格率為88%，蓄水池水35份的合格率為85.71%，城鎮自來水20份的合格率為90%，三種不同生活飲用水合格率之間差異無統計學意義，P＞0.05。結論 我們日常中的生活飲用水的合格率有待提高，同時要加強水污染管理。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.01.004

作者單位：253018 德州市德城區疾病預防控制中心

Theory of Multiple Tube Fermentation Detection of Coliform Bacteria in Drinking Water

CUI Lilin　Dezhou Center for Disease Control and prevention，Dezhou 253018，China

【Abstract】

Objective　To study multiple tube fermentation method to detect coliforms in drinking water，the coliform contamination situation of preliminary judging. Methods 80 water samples taken from drinking water including well water 25 parts，35 parts of the reservoir water，20 parts of urban water

supply，the use of multiple tube fermentation method to detect coliform bacteria in drinking water analyzes coliform contamination. Results In the 80 water samples ，the overall pass rate of 87.5%，well there are　25 parts，a pass rate is 88 percent ，35 parts water reservoir coliform bacteria ，a pass rate is 85.71 percent ，20 parts of the town ，a pass rate of 90%，there were no statistically significant difference between the rate about three different drinking water passing，P＞ 0.05. Conclusion The pass rate of our daily drinking water needs to be improved.

【Key words】Multiple tube fermentation method，Drinking Water，Coliforms

大腸菌群是一群可以發酵乳糖、產酸產氣的革蘭染色的陰性無芽孢桿菌，主要來源于動物和人類的糞便，嚴重的污染的水資源 ［1］。有關文獻顯示，我國一直以總大腸菌群作為糞便污染的指標 ［2］。本研究通過多管發酵法檢測生活飲用水中大腸菌群數，現報道如下。

1　材料與方法

1.1　材料

1.1.1　實驗材料　井水25份、蓄水池水35份、城鎮自來水20份。

1.1.2　儀器　不銹鋼手提式滅菌器（由鄭州設備有限公司生產）、恒溫培養箱（由佳東科技公司生產）、海爾冰箱（由泓杰有限公司生產）等。

1.2　原理

根據伊紅美蘭平板上具有的典型的紫黑色帶有金屬光澤的菌落來計量大腸菌群數。

1.3　試劑

1.3.1　伊紅美藍培養基的制備　先將25 g瓊脂加入500 ml的蒸餾水中，加熱完全溶解后，再加入1.5 g磷酸氫二鉀、8 g蛋白胨，均勻混合并完全溶解，按照一定的劑量分裝于燒瓶內，經滅菌、冷卻、凝固備用。

1.3.2　三倍濃縮乳糖蛋白胨培養液制備 在1000 ml的蒸餾水中加入25 g蛋白胨、15 g氯化鈉和乳糖、10 g牛肉膏加熱溶解，將PH值調整在7.1～7.5，再加入1.5%的2 ml的溴甲酚紫乙醇溶液，完全混勻，分裝于試管中，放于110℃～120℃高壓蒸汽滅菌器內滅菌15～20 min，貯存于冰箱備用。

1.3.3　麥康凱瓊脂培養基制備　將20 g蛋白胨、10 g乳糖、5 g牛膽鹽、5 g氯化鈉、0.03 g中性紅、14 g瓊脂溶解于蒸餾水，分裝入試管中，110～120 ℃高壓滅菌15～20 min，調節PH為7.1±0.2。

2　試驗方法

2.1　初發酵試驗

在兩個裝有已經滅菌的30 ml三倍濃縮乳糖蛋白胨培養液的試管內，無菌操作加入100 ml水樣，在10支裝有已經滅菌的5 ml的三倍濃縮乳糖蛋白胨培養液的試管中，無菌加入水樣10 ml均勻混合，放于37℃恒溫箱培養2 d。

2.2　復發酵及轉種試驗

自初發酵試驗中的產酸產氣的陽性管中取1滴置于EC培養基中，放入45℃的水浴箱中，培養2 d左右，陰性：所有管均不產氣，產氣的再種于伊紅美蘭瓊脂平板，45℃培養24 h，平板上為紫黑色帶有金屬光澤等典型菌落則為大腸菌群陽性。以MPN檢索表為評價標準，根據證實為大腸菌群的陽性管數測量100 ml水樣中大腸菌群的數值。

2.3　選擇性培養基挑取菌落和生化鑒定

采用大腸菌群選擇性培養基麥康凱瓊脂平板轉種試驗為大腸菌群陽性的菌落，并選取培養后典型菌落進行生化鑒定，采用大腸菌群生化鑒定盒，根據操作說明書和鑒定結果判定進行操作和鑒定。

2.4　統計學處理

采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，計數資料以%表示，采用χ 2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

3　結果

在80份水樣中，共檢出大腸菌群10分，總體合格率為87.5%，井水25份中的合格率為88%，蓄水池水35份的合格率為85.71%，城鎮自來水20份的合格率為90%，三種不同生活飲用水合格率之間差異無統計學意義（P＞0.05）。

4　討論

很多文獻報道，水污染情況越來越嚴重，導致生活飲用水的合格率僅為85%左右，本次研究結果與之相近 ［3］。本次研究結果顯示，在80份水樣中，總體合格率為87.5%，井水合格率為88%，蓄水池水的合格率為85.71%，城鎮自來水的合格率為90%，三種不同生活飲用水合格率之間差異無統計學意義，P＞0.05。由此可見，我們日常中的生活飲用水的合格率有待提高。