布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪對潰瘍性結腸炎大鼠模型的影響

王 燁 司立洲 崔佳賓 張 楠 賀天遙 孫理婷

(佳木斯市中心醫院消化內科，黑龍江 佳木斯 154002)

布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪對潰瘍性結腸炎大鼠模型的影響

王 燁 司立洲 崔佳賓 張 楠 賀天遙 孫理婷

(佳木斯市中心醫院消化內科，黑龍江 佳木斯 154002)

目的 觀察布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪對潰瘍性結腸炎(UC)大鼠腸道菌群和腸組織Toll樣受體(TLR)4及核因子(NF)-кB激活的影響。方法 采用硫酸葡聚糖鈉加乙酸復合方法制作UC大鼠模型，抽取40只大鼠為研究對象，隨機分為A組和B組，每組20只大鼠，A組單純接受布拉氏酵母菌散劑治療，B組大鼠接受布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪治療。結果 B組大鼠腸組織中TLR4與NF-κB p65的陽性細胞數明顯減少，且顯著低于A組(P<0.05)。結論 布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪可有效調節UC模型大鼠腸道菌群，并抑制腸組織TLR4、NF-κB p65的激活。

布拉氏酵母菌散劑；美沙拉嗪；潰瘍性結腸炎；腸道菌群

潰瘍性結腸炎(UC)屬于一種病因機制還不明確的結腸慢性非特異性炎癥疾病，較難治愈〔1〕。傳統的類固醇皮質激素、柳氮磺胺嘧啶等具有一定的臨床療效，但還不能夠達到理想的治療效果。本組試驗觀察布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪UC模型大鼠腸道菌群和腸組織Toll樣受體(TLR)4及核因子(NF)-κB激活情況的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料 取佳木斯大學實驗動物中心提供的清潔級40只成年SD大鼠為研究對象，將其隨機分為A組和B組，每組20只，雌雄各半。在A組中，雌鼠的體重為190～248 g，雄鼠的體重為301～430 g；在B組中，雌鼠的體重為191～249 g，雄鼠的體重為302～428 g。將40只大鼠放置于安靜的房間中，房間的面積約42 m2，室溫19℃～25℃，相對濕度60%～80%。將40只大鼠分別裝在10只等籠子里，定期清洗籠具和開窗通風，同時每周對籠具和房間進行常規消毒。

1.2 方法

1.2.1 實驗方法 采用硫酸葡聚糖鈉加乙酸復合方法制作UC大鼠模型。A組大鼠單純接受布拉氏酵母菌散劑(saccharomyces bou-lardii，SB，億活)治療，將800 mg/kg的布拉氏酵母菌散溶于1 ml 生理鹽水中，灌胃給藥。在此基礎上，給予B組大鼠美沙拉嗪(惠迪)治療，每晚 1 次保留灌腸〔2〕。

1.2.2 檢測方法

1.2.2.1 腸道菌群檢測 處死大鼠后，將新鮮的糞便從肛門中擠出，并裝于無菌容器內，到指定地點進行細菌培養，最后對其進行檢測。

1.2.2.2 TLR4與NF-κB p65檢測 取出大鼠病變腸組織約3塊，每塊約0.6 m2，5%甲醛固定24 h后，包埋切片，行免疫組化染色。陽性細胞主要呈現黃棕色，TLR4陽性細胞為胞膜和胞質著色，NF-κB p65陽性細胞主要是胞核和胞質著色。每個切片中，選擇5個視野，要求其分布的區域較多，并在高倍鏡下計數陽性細胞，將平均值作為每張切片的陽性細胞數。

1.3 統計學分析 采用SPSS15.0軟件進行t檢驗。

2 結 果

2.1 兩組大鼠腸道菌群檢測結果對比 造模后，大腸埃希菌的數量為(26.2±2.4)株，明顯多于造模前的(12.3±1.1)株(t=9.466，P=0.000)；但治療后，兩組大鼠中革蘭陽性桿菌的數量明顯增加，A組為(33.34±5.1)株，B組為(21.9±3.3)株，兩組之間比較差異顯著(t=6.249，P=0.013)。

2.2 兩組大腸組織TLR4與NF-κB p65陽性細胞檢測結果比較 造模后，B組TLR4陽性細胞表達上升(29.10±7.27)，與A組(13.46±7.15)比較差異顯著(P<0.05)；且B組的NF-κB p65陽性細胞表達顯著升高(28.66±5.61)，與A組(15.00±5.07)比較差異顯著(P<0.05)。

3 討 論

腸道菌群參與了UC的發病，有研究學者對部分炎癥性腸病患者的腸黏膜細菌進行全面的檢測，發現與普通患者比較，其腸黏膜細菌的濃度較高〔3〕。在UC形成過程中，腸道細菌起著關鍵性的作用。通過對UC患者進行益生菌治療，發現患者的臨床癥狀和病理均得到有效的改善〔4〕。在本研究中，造模后腸內菌群發生病變化，其中大腸埃希菌的數量不斷增加，并成為腸內致病菌的主要條件之一，并反復發作腸道炎癥，其遷延的面積越來越大。通過給予布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪治療，大腸埃希菌的數量不斷減少，顯然在抑制腸道炎方面發揮著重要的作用〔1，2〕。

Aldemir等〔5〕研究發現，對于腸道炎癥而言，如果腸道菌群發生變化，則需要對信號的介導進行有效的識別，細胞膜表面受體的介導信號主要是TLR。對于正常者而言，在腸道上皮細胞中會有微量的TLR4表達，但沒有表達CD14 mRNA、CD14蛋白、MD2，而對于UC患者，TLR4在整個結腸上皮存在較高的表達，且多數TLR4分布在上皮基底部位。從本組試驗看大鼠腸組織內的NF-κB的激活與很多方面存在著密切的聯系，如腸道內大腸埃希菌的含量、腸組織內TLR4的激活等，且TLR4的激活在很大程度上與大腸埃希菌的含量存在著一定的相關性〔6〕。通過接受布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪治療，黏膜下層TLR4/NF-κB陽性巨噬細胞數量大大減少，顯然布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪在抑制TLR4、NF-κB的激活方面起著關鍵性的作用。本次研究結果表明，布拉氏酵母菌散劑聯合美沙拉嗪治療UC具有較大的可行性，為臨床治療UC提供了新的模式與思路，具有較高的推廣價值。

1 李建軍,郭連鳳,李建平,等.美沙拉秦、布拉氏酵母菌散和康復新液三聯療法治療潰瘍性結腸炎的效果〔J〕.中國醫藥導報,2014;35(22):166-9.

2 李建軍,司淑偉,李建平,等.美沙拉秦灌腸液聯合布拉氏酵母菌散治療潰瘍性結腸炎的療效觀察〔J〕.臨床合理用藥雜志,2014;23(33):241-2.

3 劉宏晶,劉茂坤,苗德芳,等.中藥灌腸聯合美沙拉嗪及布拉氏酵母菌治療潰瘍性結腸炎34例〔J〕.環球中醫藥,2013;13(12):943-6.

4 張曉明,王曉娟,徐洪雨,等.布拉氏酵母菌散對TNBS-大鼠潰瘍性結腸炎IL-8、IFN-γ的表達影響〔J〕.胃腸病學和肝病學雜志,2013;24(10):993-6.

5 Aldemir M，K?kog lu OF，Geyik MF，etal.Effect of octreotide acetate and saccharomyces boulardii on bacterial translocation in an experimen-tal intestinal loop obstruction model of rats〔J〕.Tohoku J Exp Med，2012;198(1):11-9.

6 袁瓊瓊.美沙拉嗪聯合布拉酵母菌治療潰瘍性結腸炎的臨床療效觀察〔J〕.中國藥物與臨床,2013;10(8):1359-61.

〔2013-12-10修回〕

(編輯 李相軍)

王 燁(1977-)，男，副主任醫師，醫學碩士，主要從事消化系統疾病臨床及消化內鏡治療的研究。

R574.62

A

1005-9202(2015)12-3271-04；

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.12.037