檢測器的種類及其在藥物分析中的應用

周 玥* 姚書揚 吳 斌 鄭 璐

（揚子江藥業集團上海海尼藥業有限公司，上海 201318）

檢測器的種類及其在藥物分析中的應用

周 玥* 姚書揚 吳 斌 鄭 璐

（揚子江藥業集團上海海尼藥業有限公司，上海 201318）

本文介紹了高效液相色譜分析上常用的檢測器，并對其在藥物分析方面的應用進行了介紹。

檢測器，藥物分析

高效液相色譜（HPLC）是現代分離測定的重要手段。它的特點在于能夠高效、快速地分離樣品，同時使用范圍廣泛，針對大分子、高沸點、極性強和對熱敏感的化合物具有很好的分離效果。因此，在醫藥衛生、食品、環保等各個領域已得到了廣泛的應用。在各國的藥典中，HPLC也作為一種重要的分析鑒別手段而格外受到重視。其中檢測器作為HPLC的關鍵組成部分，可用于連續監測被色譜系統分離后的柱流出物的組成和含量變化。檢測器的靈敏度、響應范圍、穩定性等都會對藥物分析產生巨大影響。為了更好的進行藥物研究，人們研發出了多種檢測器。本文主要將目前在藥物分析中所使用的檢測器做一個綜述，以便廣大讀者對檢測器的種類及應用有一個更加全面和清晰的認識。

檢測器主要分為通用型檢測器和選擇型檢測器兩大類。其中通用型檢測器是指可連續測量色譜柱流出物（包括流動相和樣品組分）的全部特性變化；而選擇型檢測器是用以測量被分離樣品組分某種特性的變化，這類檢測器對樣品中組分的某種物理或化學性質敏感，而這一性質是流動相所不具備的，或至少在操作條件下不顯示。選擇型的檢測器主要有紫外檢測器（UV）、光電二極管陣列檢測器（PDAD）、熒光檢測器、電化學檢測器（ECD）、放射性檢測器、手性檢測器、紅外檢測器、發光檢測器。通用型檢測器主要有示差折光檢測器（RID）、蒸發光散射檢測器（ELSD）、電噴霧檢測器（CAD）、質譜檢測器（MSD）、核磁檢測器（NMRD）。下面將逐一對以上檢測器進行介紹。

紫外檢測器（UV）：紫外檢測器作為HPLC中最常用的檢測器，覆蓋面大概為75%。它的工作原理是當樣品組分通過流通池的時候，對特定的紫外波長有吸收，根據濃度的不同，吸收強度也會有相應的變化，從而可以得到濃度-時間的曲線。它具有靈敏度高、穩定性好、線性范圍寬的特點。但是只能應用于具有紫外吸收波長的化合物的測定。20世紀80年代出現了一種新型紫外檢測器一二極管陣列檢測器（DAD），用二極管陣列裝置可以同時獲得樣品的色譜圖及每個色譜圖組分的吸收光譜，色譜圖用于定量，光譜圖用于定性。韓敏、姚忠明等人采用Agilent SB-C18色譜柱，乙腈-水為流動相，HPLC-UVD對新型減肥藥奧利司他進行了溶出度檢測，得到了一種專屬性強、準確度好、檢測效率高的分析方法［1］。初立梅、徐家根等人采用用Hypersil ODS色譜柱，以三水合乙酸鈉溶液-甲醇為流動相，對用于治療骨關節病的氨基葡萄糖進行了分析，建立了一種簡便、快速、準確的分析方法，并可用于硫酸氨基葡萄糖含量的測定［2］。PDAD是一種多通道的檢測器，它利用一系列的光電二極管可以同時測定吸光度、時間、波長三者的關系。并可繪制出三者的三維譜圖，也可做出任意波長的吸光度一時間曲線（色譜圖）和任意時間的吸光度-波長曲線（紫外可見光譜圖）。光電二極管陣列檢測器的優點是掃描速度快、能夠采用比較光譜法測定峰的純度、繪制三維譜圖、進行微柱分析等［3］。童奎驊采用：Waters系列高效液相色譜儀-光電二極管陣列檢測器（2996型）對杠板歸不同部位中的齊墩果酸和熊果酸進行了含量測定研究。建立了一個簡便、快速，分離效果好的分析方法，為杠板歸不同部位中熊果酸和齊墩果酸的定量分析及質量評價控制提供了科學依據［4］。

熒光檢測器：目前使用的FD多是具有流通池的熒光分光光度計。熒光檢測器的檢測限較紫外檢測器的靈敏度高、同時它的線性范圍廣、對流動相的要求較低、只要流動相不會發射熒光，就可采用熒光檢測器進行分析。但是其缺點就是使用范圍狹窄，只能適用于能產生熒光或衍生物能發熒光的物質，主要用于氨基酸、多環芳烴、維生素、甾體化合物及酶等的檢測。涂星等人復制藥物誘導失眠動物模型、平臺水環境誘導失眠動物模型、刺激誘導失眠動物模型，以Agilent 1100熒光檢測器高效液相系統為檢測工具，甲醇-醋酸鈉緩沖液為流動相，采取梯度洗脫，測定正常組及模型組大鼠腦組織中谷氨酸、甘氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸的含量［5］。

電化學檢測器（ECD）：電化學檢測器從工作原理上可以分為兩大類，一類是以測量電解電流為基礎的伏安檢測器，主要有安培、極譜、庫倫三種；另一類是以測量液體電阻變化為基礎的電導檢測器。在過去的十幾年中，ECD檢測器的發展十分迅速，在生物、氨基糖苷類等方面，尤其是低濃度的生物樣品分析方面發揮了重要的作用。廣泛應用于卡托霉素、四環素、磺胺類藥物、氨基糖苷類抗生素等藥物的檢測。

其余的選擇型檢測器還有放射性檢測器、手性檢測器、紅外檢測器等。其中放射性檢測器主要是針具有放射性標記的藥物，廣泛應用于藥物動力學的研究。手性檢測器主要針對具有光學活性的化合物，無光學活性的化合物則不受干擾。紅外檢測器主要用于凝膠色譜，并且要求流動相在該紅外波長下無吸收。化學發光檢測器是應用某些物質在化學反應時發出微弱的光的原理制造的。捕集這些光信號可以檢測出極微量的成分。這種檢測器的靈敏度比熒光檢測器高100～10000倍，可用于血液中微量成分等低濃度的分析。

檢測器中的另一大類型是通用型檢測器，下文將對一些常用的通用型檢測器做一些介紹。

示差折光檢測器（RID）：RID是一種通用型檢測器，即如果選擇合適的溶劑，幾乎對所有的物質都可以進行檢測。它是利用樣品和流動相在流經檢測池時吸光度的差異來顯示樣品的濃度，主要用于糖類的分析。

蒸發光散射檢測器（ELSD）：ELSD就是利用在一定條件下粒子的數量不變，光散射強度正比于由溶質濃度決定的粒子的大小而進行檢測的。對所有不揮發溶質都有響應，是一種較理想的通用檢測器。其特點是靈敏度高，檢出限為l0 ng，溶劑成分及溫度的波動對其影響不大。彭娟等人采用薄層色譜法對天麻、淫羊藿、丹參進行定性鑒別。采用高效液相色譜-蒸發光散射檢測器法對黃芪甲苷含量進行測定，得到了一種很好的該制劑的質量控制標準［6］。

電噴霧檢測器（CAD）：電噴霧檢測器是近年來戴安公司推出的一款新型檢測器。它的檢測原理是當有分析物顆粒流經檢測器時，顆粒產生的信號電流與樣品中分析物的質量成正比，因此無論何種化合物，只要進樣質量相同響應都基本一致，所以電噴霧檢測器能檢測所有非揮發物。李祖明等人用反相高效液相色譜，二極管陣列檢測器，電噴霧質譜聯用技術研究類球紅細菌紅色素，初步分離出一種結構，并對其進行了鑒定［7］。

質譜檢測器（MSD）：質譜檢測器（MSD）作為通用型檢測器具有靈敏度高、選擇性好、指紋特征性強、可用于微量或痕量分析等特點，常與高效液相色譜法（HPLC）和氣相色譜法（GC）聯用。吳宏偉等人用Diamonsil C18色譜柱，乙腈-0.1%甲酸為流動相，梯度洗脫，三重四級桿質譜檢測器，MRM掃描方式，12 min內對血漿中12種氨基酸進行定量分析。應用本方法對腦缺血模型和黃芪注射液的治療作用做出評價［8］。

核磁檢測器（NMRD）：LC-NMR聯用技術在20世紀80年代初期已經開始研究，由于NMR靈敏度低，試劑昂貴、固定相技術的單一使其發展緩慢。近年來，在靈敏度、氘代溶劑、核磁流體探頭的設計方面的迅速發展，使其在藥品、食品、環境監測等方面得到了廣泛應用。Zelh.M等人采用此項技術從茅膏菜屬中鑒定出了十三種化學成分，其中有三種為首次報道［9］。

綜上所述，檢測器在對于藥品、食品的質量安全控制以及研究毒物快速分析、環境檢測等有關生命科學的發展均具有重要意義。

［1］韓敏，姚忠明，龔毅飛.奧利司他膠囊溶出度檢測［J］.中國抗生素雜質，2013，38（4）：268-271.

［2］初立梅，徐家根.反相高效液相色潽法測定硫酸氨基葡萄糖泡騰片中硫酸氨基葡萄糖的含量［J］.兒科藥學雜志，2012，18（3）：40-42.

［3］Huber L.二極管陣列檢測技術在高效液相色譜中的應用［M］. Hewlett-Packard，1967.

［4］童奎驊.杠板歸不同部位中齊墩果酸和熊果酸含量的測定研究［J］.浙江中醫雜志，2011，46（4）：294-295.

［5］涂星，郜紅利.熒光高效液相色譜法測定三種失眠模型大鼠腦組織氨基酸類神經遞質的含量［J］.中國實驗動物學報，2013，21（5）：74-77.

［6］彭娟，閆寒.HPLC-ELSD 測定養血益腎膠囊中黃芪甲苷的含量［J］.中國中醫藥信息雜質，2013，20（7）：52-54.

［7］李祖明，李健.高效液相色譜一串聯質譜法分離鑒定類球紅細菌紅色素［J］.東北農業大學學報，2013，44（8）：76-80.

［8］吳宏偉，高健.基于液相色譜-串聯質譜的氨基酸代謝組學方法研究黃芪注射液治療腦缺血［J］.分析化學，2013，41（3）：344-348.

［9］Zehl M，Braunberger C，Conrad J.Identification and quantification of flavonoids and ellagic acid de-rivatives in therapeutically important Drosera speciesby LC-DAD，LC-NMR，NMR，and LCMS［J］.Anal Bioanal Chem，2011，400（8）： 2565-2576.

R9

C

1671-8194（2015）012-0294-02