UPLC法測定新生脈散液中紫丁香苷的含量Δ

劉建海，崔維利，陳濤，孟萌

（1.天津中醫藥大學研究生院，天津 300193；2.天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津 300193）

UPLC法測定新生脈散液中紫丁香苷的含量Δ

劉建海1＊，崔維利2#，陳濤2，孟萌2

（1.天津中醫藥大學研究生院，天津 300193；2.天津中醫藥大學第一附屬醫院，天津 300193）

目的：建立測定新生脈散液中紫丁香苷含量的方法。方法：采用超高效液相色譜（UPLC）法。色譜柱為ACQUITY UPLCBENC18，流動相為乙腈-0.4%磷酸水溶液（5∶95，V/V），流速為0.2ml/min，檢測波長為265nm，柱溫為30℃，進樣量為1μl。結果：紫丁香苷的進樣量在0.0197～0.1970μg范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r＝0.9999）；精密度、穩定性、重復性試驗的RSD均＜2%；平均加樣回收率為99.01%，RSD＝1.27%（n＝6）。結論：該方法結果準確、重復性好，可作為新生脈散液中紫丁香苷的含量測定方法。

新生脈散液；超高效液相色譜法；紫丁香苷；含量測定

新生脈散液是天津中醫藥大學第一附屬醫院自制制劑，由刺五加、黃芪、丹參、黨參等多味中藥材提取加工制成，具有益氣、活血、利水之功效，臨床用于治療心力衰竭（氣虛血瘀水停證），療效顯著。刺五加為方中君藥之一，具有益氣健脾、補腎安神的功效[1]。藥理學研究表明，刺五加能增強機體免疫調節功能，提高抗疲勞、抗衰老能力，還具有顯著的擴血管、降血壓作用，對心腦血管系統疾病有良好的治療效果[2-3]。紫丁香苷是刺五加中的主要有效成分之一，也是刺五加及其復方制劑質量控制的指標成分。近年來，超高效液相色譜（UPLC）由于在分離度、靈敏度和溶劑用量等方面具有明顯優勢，已經在中藥質量控制和制劑分析等領域發揮著重要作用[4]。本研究嘗試采用UPLC法測定新生脈散液中紫丁香苷的含量，以為提高新生脈散液的質量控制標準提供科學依據。

1 材料

1.1 儀器

ACQUITYUPLCH-Class型UPLC儀，包括四元溶劑管理器、自動進樣恒溫管理器、ACQUITYPDA二極管陣列檢測器、EmpowerⅢ色譜工作站和柱溫箱（美國Waters公司）；AG135型電子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）；KQ-250E型臺式超聲波清洗機（昆山超聲儀器有限公司）；DZKW-S-6型電熱恒溫水浴鍋（北京永光明醫療儀器廠）。

1.2 藥品與試劑

新生脈散液（天津中醫藥大學第一附屬醫院制劑室自制，批號：120301、120401、120501）；紫丁香苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111574-200603）；乙腈、甲醇、磷酸均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：ACQUITYUPLCBENC18（100mm×2.1mm，1.7μm）；流動相：乙腈-0.4%磷酸水溶液（5∶95，V/V）；流速：0.2ml/min；檢測波長：265nm；柱溫：30℃；進樣量：1μl。色譜見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取紫丁香苷對照品適量，置于50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，即得質量濃度為197.0μg/ml的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 精密量取新生脈散液10.0ml，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并提取液，置于100ml量瓶中，加水飽和的正丁醇至刻度，搖勻。精密量取40ml，置于水浴上蒸干，殘渣加甲醇使溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，經0.22μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得。

2.2.3陰性對照溶液 按照處方工藝制成缺刺五加的陰性樣品，再按“2.2.2”項下方法制備陰性對照溶液，即得。

圖1 超高效液相色譜圖A.紫丁香苷對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.紫丁香苷Fig1UPLCchromatogramsA.syringinreference；B.testsample；C.negativecontrol；1.syringin

2.3 線性關系考察

分別精密量取對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0ml，置于10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成系列濃度的對照品溶液。精密吸取系列對照品溶液各1μl，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以峰面積（y）為縱坐標、對照品的進樣量（x，μg）為橫坐標，繪制標準曲線，得紫丁香苷的回歸方程為y＝1.4×107x－45990（r＝0.9999，n＝6）。結果表明，紫丁香苷的進樣量在0.0197～0.1970μg范圍內與各自峰面積呈良好線性關系。

2.4 精密度試驗

精密吸取紫丁香苷對照品溶液1μl，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次，記錄峰面積。結果，RSD＝0.33%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.5 重復性試驗

精密量取同一批樣品（批號：120301）適量，共6份，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，RSD＝0.82%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.6 穩定性試驗

精密吸取同一批樣品（批號：120301）制備的供試品溶液適量，分別于制備0、2、4、6、8、12、24h時按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，RSD＝1.15%（n＝7），表明供試品溶液在24h內穩定性良好。

2.7 加樣回收率試驗

精密量取已知含量的同一批樣品（批號：120301）5ml，共6份，分別精密加入適量的紫丁香苷對照品溶液，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率，結果見表1。

2.8 樣品含量測定

取3批新生脈散液樣品（批號：120301、120401、120501）各適量，分別按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算樣品的質量濃度。結果，3批樣品中紫丁香苷的質量濃度分別為80.22、78.73、81.14μg/ml，平均值為80.03μg/ml（n＝3）。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab1 Results of recovery test（n＝6）

3 討論

3.1 提取條件的考察

本研究考察了水飽和的正丁醇、乙酸乙酯兩種提取溶劑。結果，水飽和的正丁醇去除雜質的效果較好。又采用氨試液洗滌水飽和正丁醇提取液，對氨試液去除雜質的效果進行考察。結果，樣品中紫丁香苷的質量濃度明顯降低，故提取液不采用氨試液洗滌。又分別考察了提取溶劑的用量和提取次數。結果，采用2倍量水飽和正丁醇提取4次，對紫丁香苷的提取較為完全，且可除去其他水溶性雜質、排除干擾、改善峰形。故最終采用水飽和的正丁醇提取4次的方法。

3.2 色譜條件的考察

筆者參考相關文獻[5-10]，分別考察了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-0.4%冰乙酸水溶液、乙腈-0.4%磷酸水溶液4種流動相系統，并采用不同的配比進行試驗。結果，采用乙腈-0.4%磷酸水（5∶95，V/V）為流動相，紫丁香苷色譜峰的峰形及分離效果最好。

筆者又考察了ACQUITY UPLC BEN C18（100mm×2.1mm，1.7μm）、ACQUITY UPLC BEN Shield RP18（100mm×2.1mm，1.7μm）和ACQUITY UPLC HSS T3（100mm×2.1mm，1.8μm）3種色譜柱。結果，采用ACQUITY UPLC BEN C18（100mm×2.1mm，1.7μm）為色譜柱，紫丁香苷色譜峰的分離效果較好。

筆者還考察了不同柱溫（25、30、35℃）、流速（0.6、0.4、0.3、0.2ml/min）對測定結果的影響。結果，柱溫為30℃、流速為0.2ml/min時有利于色譜峰的分離，同時可減少溶劑用量。

綜上所述，本試驗所建立的方法結果準確、重復性好，可作為新生脈散液中紫丁香苷的含量測定方法。

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[3] 張旭東，馬杰，張淑慧，等.刺五加制劑的臨床應用進展[J].中國藥房，2008，19（3）：231.

[4] 金高娃，章飛芳，薛興亞，等.超高效液相色譜在復雜體系中藥分離分析中的應用[J].世界科學技術：中醫藥現代化，2006，8（3）：106.

[5] 車勇.高效液相色譜法測定刺五加中紫丁香苷含量的研究[J].時珍國醫國藥，2005，16（2）：115.

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Content Determination of Syringin in New Shengmaisan Liquid by UPLC

LIU Jian-hai1，CUI Wei-li2，CHEN Tao2，MENG Meng2
（1.Graduate School，Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China；2.The First Hospital Affiliated to Tianjin University of TCM，Tianjin 300193，China）

OBJECTIVE：To establish a method for content determination of syringin in New Shengmaisan liquid. METHODS：UPLC method was adopted. The determination was performed on ACQUITY UPLC BEN C18column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.4％ phosphoric acid（5∶95，V/V）at the flow rate of 0.2 ml/min. The detection wavelength was 265 nm，the column temperature was 30℃ and the sampling volume was 1 μl. RESULTS：There was a good linear relationship between the amount of syringin and peak area in the range of 0.0197-0.1970 μg（r＝0.9999）；the RSDs of precision，stability and repeatability tests was less than 2％；the average recovery was 99.01％（RSD＝1.27%，n＝6）.CONCLUSIONS：The method is accurate and reproducible. It can be used for content determination of syringin in New Shengmaisan liquid.

New Shengmaisan Liquid；UPLC；Syringin；Content determination

R927.2

A

1001-0408（2015）09-1236-03

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2015.09.29

國家科技重大專項課題（No.2010ZX09102-202）

＊碩士。研究方向：中藥質量控制與分析。E-mail：manlyzhongyao@163.com

#通信作者：主任藥師，碩士生導師。研究方向：中藥炮制與中藥新藥研發。電話：022-83969661。E-mail：cuiweili@shitian.com

2014-02-16

2014-09-04）

（編輯：孫 冰）

·藥業專論·