MBL對綿羊肺炎支原體抗性的影響

文│金遵 趙宗勝 袁聰 于要升 曹少奇 雷小萍（新疆石河子大學動物科技學院）

MBL對綿羊肺炎支原體抗性的影響

文│金遵 趙宗勝 袁聰 于要升 曹少奇 雷小萍（新疆石河子大學動物科技學院）

甘露糖結合凝集素（MBL）屬于凝集素家族，是機體先天性免疫的重要成分，有激活補體系統、調理吞噬等作用，并與許多免疫相關性疾病有關。為了揭示湖羊不同MBL基因型與綿羊肺炎支原體抗性的相關性，本研究在對中國美利奴羊MBL基因多態性分析的基礎上，利用ELISA方法檢測湖羊的綿羊支原體肺炎抗體水平，通過t檢驗對湖羊MBL基因外顯子1同一基因型在綿羊支原體肺炎陽性和陰性的個體中的基因型頻率進行差異顯著分析。

一、材料和方法

1.試驗樣品。湖羊血樣采自新疆生產建設兵團第九師某羊場共105只。使用一次性肝素鈉抗凝采血管頸靜脈采血5毫升，-20℃保存。采用一次性真空采血管（不加抗凝劑）采血3毫升分離血清。

2.試驗方法。

（1）綿羊支原體肺炎抗體ELISA血清學檢測。按ELISA試劑盒（美國ADL公司）說明操作，進行湖羊MBL支原體抗體檢測。

（2）綿羊MBL基因外顯子1基因分型。根據電泳圖譜，依照文獻報道的分型方法對各條帶帶型進行分析。

3.數據處理及統計分析。湖羊MBL基因外顯子1同一基因型在綿羊支原體肺炎陰性和陽性個體上基因頻率的顯著性差異比較，采用t檢驗；用統計軟件SPSS17.0進行統計學處理，以P＜0.05代表差異有統計學意義。

二、結果和分析

1.湖羊綿羊支原體肺炎抗體檢測。經綿羊支原體肺炎ELISA試劑盒檢測結果表明，105只湖羊中綿羊支原體肺炎陰性為35只，陽性為70只，但陽性抗體水平比較低。

2.綿羊MBL基因外顯子1基因分型。根據電泳圖譜，依照之前報道的分型方法對各條帶帶型進行分析。MB外顯1的SSCP分型，出現了4種基因型，由3種等位基因控制。基因型為：AA、BB、CC和BC，由A、B、C三種等位基因控制。

3.湖羊MBL基因外顯子1多態性與綿羊支原體肺炎的抗性關聯分析。MBL基因外顯子1在綿羊支原體肺炎陽性和陰性的湖羊個體中會出現一致的基因型，將它們之間的基因型頻率進行差異顯著分析（t檢驗）。結果發現，湖羊中，CC型在健康組中較多（P＜0.01），推測是綿羊支原體肺炎的抗性基因型。AA和BB在綿羊支原體肺炎組中較多（P＜0.01），提示是綿羊支原體肺炎的易感基因型。

三、結論與討論

綿羊支原體肺炎呈流行性，接觸傳染性疾病，以冬春季節發病較多。發病率高，死亡率低，可耐過，但增重緩慢。自2000年新疆引進大批湖羊后，大范圍爆發，導致湖羊死亡，并傳染給其他品種，且康復的羊也是長期帶菌者，該病不易消滅和清除，嚴重影響了新疆養羊業的生產和發展。MBL屬于凝集素家族，是機體先天性免疫的重要成分，有激活補體系統、調理吞噬等作用，并與許多免疫相關性疾病有關。近年來MBL作為天然免疫第一線的一種防御分子在各種感染性疾病中的作用倍受關注。

目前，用于檢測綿羊支原體的方法主要包括分離培養法、電鏡法、血清學方法和分子生物學方法。血清學方法因簡單、靈敏、快速、不出現假陽性等優點，因此被國內外廣泛使用。本研究對采集回來的湖羊血清樣品進行綿羊支原體肺炎ELISA抗體水平檢測，67%的湖羊呈陽性，但抗體水平不高，可能所采集的個體曾經感染過綿羊肺炎支原體，為隱性感染，抗體檢測陽性，但并未發病，無臨床癥狀出現。

湖羊外顯子1不同基因型與血清水平的相關性表明，MBL基因不同的基因型決定不同的MBL血清水平表達，而本試驗證實MBL基因不同基因型對綿羊支原體肺炎的易感性不同，建立了湖羊MBL不同基因型，MBL血清水平及綿羊支原體肺炎三者之間的關系。初步得出結論，AA型和BB型，血清水平較低，與綿羊支原體肺炎易感性相關；CC型，血清水平較高，與綿羊支原體肺炎抗性相關。