補(bǔ)腎中藥對(duì)H-P-O軸干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展*

楊麗娟，周惠芳

(1．南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京 210029;2．云南中醫(yī)學(xué)院，昆明 650200)

補(bǔ)腎中藥對(duì)H-P-O軸干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展*

楊麗娟1，2，周惠芳1△

(1．南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京 210029;2．云南中醫(yī)學(xué)院，昆明 650200)

H-P-O性腺軸對(duì)女性的月經(jīng)和生殖有重要影響，近年來(lái)關(guān)于補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)性腺軸結(jié)構(gòu)和內(nèi)分泌功能的研究不斷深入。縱觀近年來(lái)相關(guān)實(shí)驗(yàn)報(bào)道，補(bǔ)腎中藥從形態(tài)學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)及神經(jīng)遞質(zhì)學(xué)等方面均對(duì)H-P-O性腺軸有改善和保護(hù)作用，間接證明了中醫(yī)腎主生殖理論的科學(xué)性及心(腦)-腎-子宮軸與H-P-O性腺軸的相關(guān)性，為今后該領(lǐng)域的中西醫(yī)實(shí)驗(yàn)研究提供了思路。

H-P-O性腺軸;補(bǔ)腎中藥;實(shí)驗(yàn)研究

1977年Besedovsky，HO提出了神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)理論，下丘腦-垂體-性腺軸(HPG軸)是其中重要的組成部分。下丘腦分泌促性腺激素釋放激素(GnRH)，在正中隆起處經(jīng)垂體門(mén)脈系統(tǒng)到達(dá)垂體前葉，使垂體前葉分泌并釋放促卵泡激素(FSH)和黃體生成激素(LH)，促性腺激素調(diào)控卵巢的分泌及生殖功能，同時(shí)卵巢分泌的性激素又對(duì)垂體和下丘腦有反饋調(diào)節(jié)作用，下丘腦、垂體和卵巢之間相互協(xié)調(diào)、相互影響，形成完整而又協(xié)調(diào)的神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)，即下丘腦-垂體-卵巢軸(H-P-O axis)［1］。這一性腺軸對(duì)女性的月經(jīng)和生殖有著極其重要的影響，其功能失調(diào)常導(dǎo)致月經(jīng)不調(diào)、不孕或流產(chǎn)等。中醫(yī)認(rèn)為腎藏精、主生殖，腎氣的盛衰與生殖關(guān)系密切，腎氣盛，天癸至，精血充沛，任通沖盛，才能正常行經(jīng)，兩精相搏才能受孕。諸因損于腎，傷及沖任，可導(dǎo)致腎失封藏、沖任不固，終致不孕或孕后流產(chǎn)。現(xiàn)代藥理學(xué)認(rèn)為，補(bǔ)腎中藥在激素水平上的調(diào)節(jié)主要體現(xiàn)在對(duì)下丘腦-垂體-性腺軸(H-P-G)的調(diào)節(jié)，除對(duì)促卵泡刺激素(FSH)、黃體生成素(LH)等有明顯的調(diào)節(jié)作用外，還對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有明顯的調(diào)節(jié)作用［2］。目前國(guó)內(nèi)有許多研究者進(jìn)行了與之相關(guān)的臨床研究及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究，現(xiàn)將近年來(lái)的研究情況綜述如下。

1 補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)卵巢-子宮的影響

1.1 補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)性腺靶器官微結(jié)構(gòu)的影響

張森等［3］研究補(bǔ)腎中藥淫羊藿苷(ICA)促動(dòng)物生殖作用，給性成熟雌性大鼠不同劑量的ICA，觀察其對(duì)大鼠卵巢和子宮質(zhì)量的影響，并通過(guò)組織切片觀察其對(duì)卵泡發(fā)育和子宮發(fā)育的影響。結(jié)果表明，ICA能提高大鼠卵巢和子宮質(zhì)量。組織切片顯示，ICA能明顯促進(jìn)大鼠卵泡發(fā)育。該研究提示，ICA可以促進(jìn)大鼠卵巢和子宮的發(fā)育。周惠芳等［4］觀察補(bǔ)腎助孕方對(duì)SD大鼠胚胎著床期子宮內(nèi)膜及卵巢的形態(tài)學(xué)變化，結(jié)果顯示中藥補(bǔ)腎助孕方中、高劑量組與模型組比較，能明顯促進(jìn)胚胎著床期子宮內(nèi)膜的生長(zhǎng)及子宮內(nèi)膜腺體的增生和發(fā)育，并能促進(jìn)胚胎著床期卵巢黃體細(xì)胞的發(fā)育。由此得出中藥補(bǔ)腎助孕方通過(guò)促進(jìn)子宮內(nèi)膜的生長(zhǎng)及內(nèi)膜腺體的發(fā)育，使腺體和間質(zhì)發(fā)育同步，促進(jìn)卵巢黃體細(xì)胞的增生和改善黃體細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，從而提高子宮內(nèi)膜的容受性及改善黃體功能，有利于胚胎著床和發(fā)育。

從上述研究可以看出，補(bǔ)腎類(lèi)中藥有類(lèi)激素樣作用，可以促進(jìn)性腺器官的發(fā)育，增加其質(zhì)量，在微結(jié)構(gòu)方面促進(jìn)子宮內(nèi)膜腺體和卵巢黃體細(xì)胞的發(fā)育，利于胚胎的著床及發(fā)育。

1.2 補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)性激素分泌的影響

夏天等［5］運(yùn)用血清藥理學(xué)方法，觀察補(bǔ)腎調(diào)沖方對(duì)高雄激素培養(yǎng)的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞增殖與分泌功能的影響。結(jié)果顯示，補(bǔ)腎調(diào)沖方含藥血清可改善高雄激素對(duì)顆粒細(xì)胞功能的抑制狀態(tài)，促進(jìn)細(xì)胞增殖及E2和P的分泌，其作用呈劑量依賴(lài)性。并由此推測(cè)，補(bǔ)腎調(diào)沖方通過(guò)促卵泡發(fā)育、提高雌孕激素水平、改善雌/雄激素比值來(lái)調(diào)節(jié)卵巢功能。葛翠蓮等［6］以未成年雌性大鼠為對(duì)象，采用放免法檢測(cè)補(bǔ)腎健脾方高、中、低劑量組、陽(yáng)性對(duì)照組和空白對(duì)照組大鼠血清FSH、LH、E2和P水平;各組大鼠卵巢、子宮稱(chēng)重并作比較，結(jié)果顯示，補(bǔ)腎健脾方組血清FSH、LH、E2、P水平顯著增高，卵巢和子宮質(zhì)量明顯增重。提示該方能提高大鼠生殖激素水平，促進(jìn)卵巢和子宮的發(fā)育，改善卵巢功能以促進(jìn)排卵，也說(shuō)明該方對(duì)下丘腦-垂體-卵巢軸功能有整體調(diào)節(jié)作用。

2 補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)下丘腦-垂體的影響

2.1 補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)下丘腦-垂體超微結(jié)構(gòu)影響

宋春風(fēng)等［7］以大量醋酸可的松造成大鼠腎陽(yáng)虛模型，取其垂體制成超薄切片進(jìn)行電鏡觀察。結(jié)果顯示，腎陽(yáng)虛大鼠垂體內(nèi)分泌細(xì)胞存在著不同程度的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體擴(kuò)張、線(xiàn)粒體空化、細(xì)胞變形、核固縮等超微結(jié)構(gòu)損傷。使用益氣補(bǔ)腎中藥后，減輕腎陽(yáng)虛大鼠超微結(jié)構(gòu)的損傷，提示益氣補(bǔ)腎中藥可能通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞的蛋白質(zhì)和能量代謝，減輕垂體的超微結(jié)構(gòu)損傷，達(dá)到糾正腎陽(yáng)虛證的效應(yīng)。錢(qián)風(fēng)雷等［8］以溫補(bǔ)腎陽(yáng)為主、滋補(bǔ)腎陰為輔的補(bǔ)腎中藥，觀察其對(duì)長(zhǎng)期大運(yùn)動(dòng)量游泳運(yùn)動(dòng)所致大鼠低血睪酮和下丘腦-垂體-性腺軸(HPG)功能的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，下丘腦-垂體-性腺軸調(diào)節(jié)功能減退是造成運(yùn)動(dòng)性低血睪酮的重要原因，而合理采用補(bǔ)腎中藥能顯著改善運(yùn)動(dòng)性低血睪酮大鼠垂體和性腺激素水平，對(duì)調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸功能和維持性腺軸各級(jí)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的正常和完整性有保護(hù)作用。

2.2 補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)下丘腦-垂體蛋白表達(dá)及神經(jīng)遞質(zhì)的影響

陸煒等［9］觀察補(bǔ)腎中藥對(duì)垂體促性腺激素釋放激素(GnRH)受體及其基因表達(dá)的影響，將SD大鼠(35 d齡，相當(dāng)于青春?jiǎn)?dòng)期)分為對(duì)照組、滋陰瀉火組和益腎填精組，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)GnRH受體的蛋白表達(dá)水平，采用原位雜交組織化學(xué)方法檢測(cè)GnRH受體mRNA表達(dá)水平。結(jié)果顯示，給予滋陰瀉火中藥合劑后，大鼠垂體GnRH受體mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)，GnRH受體蛋白合成減少;而給予益腎填精中藥合劑后，大鼠垂體GnRH受體mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)，GnRH受體蛋白合成增多。由此可見(jiàn)，不同補(bǔ)腎中藥可通過(guò)改變垂體GnRH受體及其mRNA表達(dá)水平，調(diào)節(jié)下丘腦-垂體-性腺軸的功能。張森等［10］通過(guò)腺垂體細(xì)胞的原代培養(yǎng)技術(shù)和半定量RT-PCR技術(shù)，觀察補(bǔ)腎中藥淫羊藿苷對(duì)大鼠腺垂體合成分泌GTH的影響，建立了腺垂體細(xì)胞總RNA的提取，F(xiàn)SH和LH特異基因的PCR擴(kuò)增體系和條件，并以B-actin為內(nèi)參照與FSH和LH特異基因進(jìn)行多重比較。結(jié)果淫羊藿苷能提高大鼠腺垂體細(xì)胞中GTHmRNA水平，但并非與劑量呈線(xiàn)性關(guān)系。

沈皓等［11］以正常青春?jiǎn)?dòng)期雌性SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，分別喂飼生理鹽水、滋陰瀉火中藥合劑和益腎填精中藥合劑，灌胃法喂飼每日1次，劑量5 ml，共30 d。采用免疫組織化學(xué)法及計(jì)算機(jī)圖像處理技術(shù)對(duì)下丘腦內(nèi)側(cè)視前區(qū)、弓狀核和正中隆起3處的GnRH和神經(jīng)肽Y (neuropeptide Y，NPY)進(jìn)行定量形態(tài)觀察，采用組織勻漿法和放射免疫法測(cè)定下丘腦視前區(qū)GnRH含量，采用腦片孵育實(shí)驗(yàn)和高效液相色譜法測(cè)定內(nèi)側(cè)基底下丘腦單胺類(lèi)遞質(zhì)的釋放量，采用推挽灌流技術(shù)及放射免疫法測(cè)定下丘腦視前區(qū)GnRH和NPY的釋放量，高效液相色譜法測(cè)定該部位單胺類(lèi)遞質(zhì)的釋放量。結(jié)果顯示，滋陰瀉火中藥可以顯著抑制下丘腦GnRH周期性分泌中心及緊張性分泌中心GnRH的合成與釋放，而益腎填精中藥則顯著促進(jìn)其合成與釋放。滋陰瀉火中藥可能通過(guò)抑制下丘腦GnRH緊張性分泌中心去甲腎上腺素的釋放，促進(jìn)下丘腦GnRH周期性分泌中心多巴胺的釋放，并同時(shí)促進(jìn)這兩個(gè)GnRH分泌中心NPY的合成和釋放，使下丘腦GnRH神經(jīng)元的功能活動(dòng)顯著降低，從而明顯抑制下丘腦-垂體的促性腺機(jī)能。益腎填精中藥則可能通過(guò)降低下丘腦GnRH緊張性分泌中心NPY的合成和釋放，使GnRH神經(jīng)元功能顯著活躍，從而明顯促進(jìn)下丘腦-垂體的促性腺機(jī)能。該實(shí)驗(yàn)可以看出，補(bǔ)腎中藥可能通過(guò)對(duì)下丘腦GnRH及其相關(guān)神經(jīng)遞質(zhì)去甲腎上腺素、多巴胺和NPY合成與釋放的調(diào)節(jié)作用，調(diào)整下丘腦-垂體的促性腺機(jī)能。

2.3 補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)下丘腦-垂體激素分泌影響

徐紅艷［12］等研究中藥壯陽(yáng)促孕散，對(duì)雌性腎陽(yáng)虛大鼠垂體性腺軸分泌激素的影響，并初步探討其作用機(jī)制。先用氫化可的松造雌性大鼠腎陽(yáng)虛模型，造模21 d，從試驗(yàn)第8天開(kāi)始中藥治療組灌胃中藥壯陽(yáng)促孕散，陽(yáng)性對(duì)照組灌胃金匱腎氣丸，連續(xù)給藥14 d，放射免疫法測(cè)定血清中雌二醇(E2)、孕酮(P)、黃體生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)。結(jié)果表明，模型對(duì)照組造模后大鼠出現(xiàn)明顯的陽(yáng)虛癥狀，體質(zhì)量下降，血清中E2、P下降，F(xiàn)SH、LH升高。給藥后，陽(yáng)性對(duì)照組中藥治療組大鼠體質(zhì)量增加，血清中E2、P升高，F(xiàn)SH、LH下降。由此可見(jiàn)，中藥壯陽(yáng)促孕散可調(diào)節(jié)雌性腎陽(yáng)虛大鼠血清中FSH、LH、E2和P的分泌，對(duì)生殖內(nèi)分泌有促進(jìn)作用。

李亞麗等［13］用D-半乳糖連續(xù)腹腔注射致亞急性衰老動(dòng)物模型，造模后灌胃六味地黃湯連續(xù)60 d后，大鼠斷頭取垂體、卵巢。采用全自動(dòng)微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析方法檢測(cè)各組大鼠血清LH、E2、FSH含量，原位雜交方法檢測(cè)各組大鼠卵巢細(xì)胞FSHR 和LHR的變化，Western Bloting法檢測(cè)各組大鼠卵巢ER的變化。結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠垂體指數(shù)和卵巢指數(shù)均明顯降低，血清E2含量明顯降低，LH、FSH升高，ER、FSHR、LHR的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與模型組比較，六味地黃湯組垂體指數(shù)和卵巢指數(shù)都明顯升高，血清E2含量明顯上升，LH、FSH降低，ER、FSHR、LHR的表達(dá)明顯升高，呈現(xiàn)一定的劑量依賴(lài)性。研究發(fā)現(xiàn)，衰老大鼠的ER、FSHRmRNA和LHRmRNA表達(dá)量明顯下降，而六味地黃湯能上調(diào)卵巢的 ER、FSHRmRNA和LHRmRNA水平，提示該藥可以通過(guò)調(diào)節(jié)激素受體而發(fā)揮對(duì)內(nèi)分泌的調(diào)控作用。其可能機(jī)制即雌激素與受體結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，使生殖軸的反饋機(jī)制得以恢復(fù)，降低FSH和LH水平，同時(shí)雌激素又可上調(diào)自身受體和FSHR、LHR，使FSH和LH發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，促進(jìn)卵泡發(fā)育，構(gòu)成良性循環(huán)，恢復(fù)H-P-O軸的調(diào)控功能。

3 總結(jié)及展望

國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)夏桂成教授總結(jié)多年臨床實(shí)踐，創(chuàng)造性地提出了“心(腦)-腎-子宮軸”為女性的生殖軸學(xué)說(shuō)，指出腎在維持女性正常的行經(jīng)、胎孕等方面起著主導(dǎo)作用，所以補(bǔ)腎應(yīng)貫穿于疾病治療的始終。該學(xué)說(shuō)與與H-P-O軸相對(duì)應(yīng)，H-P-O軸功能的正常決定了女性的生殖生理功能正常。腎虛證與臨床上許多疾病有著密切關(guān)聯(lián)。實(shí)驗(yàn)研究證明，補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)多臟器多系統(tǒng)均有調(diào)節(jié)作用，其對(duì)于下丘腦-垂體-卵巢的調(diào)節(jié)作用是多方面的，既能直接促進(jìn)性腺細(xì)胞分泌促性腺激素及性激素，又能通過(guò)調(diào)節(jié)激素受體的表達(dá)而發(fā)揮內(nèi)分泌的調(diào)控作用。縱觀近年來(lái)的研究，大多集中在補(bǔ)腎類(lèi)中藥對(duì)性腺軸結(jié)構(gòu)和分泌功能的影響上，卻鮮有對(duì)補(bǔ)腎中藥干預(yù)下丘腦-垂體信號(hào)傳導(dǎo)通路的分子機(jī)制研究，應(yīng)盡快完善該方面的研究，以明確中藥作用靶點(diǎn)及通路，這必將對(duì)中醫(yī)藥理論、實(shí)踐的創(chuàng)新和發(fā)展起到良好的推動(dòng)作用。

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R289．1

A

1006-3250(2015)02-0370-02

2014-11-21

江蘇省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(BK2010565)

楊麗娟(1979-)，女，云南大理人，在讀博士，從事不孕癥的基礎(chǔ)與臨床研究。

△通訊作者:周惠芳(1962-)，女，主任醫(yī)師，教授，博士研究生導(dǎo)師，從事不孕癥的基礎(chǔ)與臨床研究，E-mail: zhouhuifang2011301@163．com。