口腔扁平苔蘚角質形成細胞與淋巴細胞的混合培養

許　斌，陳　純　（江蘇省無錫市中醫醫院口腔科，江蘇無錫214000）

口腔扁平苔蘚角質形成細胞與淋巴細胞的混合培養

許斌，陳純（江蘇省無錫市中醫醫院口腔科，江蘇無錫214000）

近年來對口腔扁平苔蘚（OLP）的研究越來越多，OLP的組織病理學表明角質形成細胞和淋巴細胞與其發病有著重要關系，很多學者開始建立這兩種細胞的體外培養模型，尋找OLP的發病機制，本研究就最近幾年的研究狀況作以簡要概括，并對OLP的細胞培養模型提出一些研究設想．

口腔扁平苔蘚；角質形成細胞；淋巴細胞；混合培養

0　引言

口腔扁平苔蘚（oral lichen planus，OLP）是發生于口腔黏膜的一種慢性炎癥性疾病，其發病率為0．1%～4%［1］，其病因和發病機制目前尚不清楚，但是有研究表明OLP是一種T細胞介導的自身免疫性疾病［2］，其中以T淋巴細胞活化為主的細胞免疫失調是口腔發生病變的關鍵環節［3］．但具體機制仍然不明確，使得OLP缺乏有效的治療方法，為此很多學者開始體外培養OLP相關細胞，模擬機體局部OLP的發病環境，探尋OLP的發病機制，尋求有效治療方法．

1　細胞培養

1．1角質形成細胞的培養角質形成細胞的培養方法目前主要有：組織塊培養法、以3T3細胞為滋養層的培養法、以膠原為滋養層的培養法、氣?液交界面培養法、無血清培養法［4］．

張興洪等［5］證實了胰酶加dispase酶消化、限制性KC?FSM培養基體外培養是制備和培養人皮膚角質形成細胞的好方法．有學者比較了酶化法和直接分離法獲得口腔黏膜角質形成細胞的效果，結果顯示酶催化法在獲得角質形成細胞所用的時間、細胞的數量以及細胞在體外的生存時間方面要優于直接法［6］．

1．2淋巴細胞的培養從外周血分離單個核細胞（peripheral bloodmononuclear cells，PBMCs）純化培養T淋巴細胞常用的方法有：尼龍毛吸附法、補體細胞毒法、免疫磁珠法．前兩種方法得到的T淋巴細胞純度低且含有自然殺傷（natural killer，NK）細胞，后一種方法得到的T淋巴細胞純度高但是費用昂貴［7］．

李付廣等［8］根據不同細胞在特定培養基中的死亡時間不同而篩選出T淋巴細胞，該實驗在低劑量IL?2的維持條件下利用細胞培養淘汰法獲得了初步純化的T淋巴細胞，該方法經濟、操作簡單．

1．3角質形成細胞與淋巴細胞的混合培養目前關于OLP的角質形成細胞與淋巴細胞的體外共培養模型的建立尚且不多．李琴等［9］成功建立了OLP角質形成細胞與淋巴細胞的體外混合培養模型，一定程度上模擬了人體局部OLP的發病環境．國外有學者從OLP患者口腔粘膜切取部分組織，分離得到角質形成細胞后在無血清的培養基中進行培養，從正常人外周血中分離得到單個核細胞，懸浮在含有L?谷氨酸和抗生素的RPMI?1640培養基中，再將單個核細胞在角質形成細胞的培養基中培養，實驗結果顯示角質形成細胞表達的TNF?α、GMCSF、IL?1β等細胞因子可以誘導單個核細胞表達更多的細胞粘附分子，從而增強外周血單個核細胞的增殖、遷移［10］．

2　對OLP細胞培養的討論

近年來對于OLP角質形成細胞、淋巴細胞培養的研究尚且不多，其中存在一些值得討論的問題．

2．1不同培養基對培養結果的影響OLP的細胞培養大部分采用含10%胎牛血清的1640培養基．不過最近有學者分別用RPMI?1640培養基和IMDM培養基培養外周血樹突狀細胞（dentritic cell，DC），觀察不同培養基對細胞功能的影響，實驗結果顯示兩種細胞培養基培養的DC在形態學、CD14和CD83的表達以及內吞作用方面沒有太大的差異，但是用IMDM培養的DC低表達CD1a、IL?12，高表達IL?6、IL?8、IL?10，減少了對T細胞增殖的刺激作用，用IMDM培養基培養的DC可能與誘導機體的免疫耐受有關［11］．

以上說明用RPMI?1640和IMDM培養細胞可以使同樣的細胞表現出不同的功能，目前IMDM有多種型號，如果采用不同型號的IMDM培養基在體外混合培養OLP角質形成細胞和淋巴細胞，結果是否會發生改變還需要進一步地研究．

2．2培養基中離子及其濃度的改變對培養結果的影響李習玲等［12］采用無血清無鈣離子的角質形成細胞生長培養基，不加任何細胞因子和生長因子，僅僅通過改變培養基中的鈣離子濃度，調節角質形成細胞的形成和分化，成功的對小鼠的表皮角質形成細胞進行了原代培養．

Takagi等［13］在培養應用于臨床再生醫學的角質形成細胞時發現，去掉傳統角質形成細胞培養基中的轉鐵蛋白和金屬元素硒，對犬科口腔黏膜上皮細胞層的形成沒有明顯影響．

2．3PFT?α對培養結果的影響張興洪等［14］取正常皮膚的角質形成細胞進行體外培養，證實一定劑量的P53抑制劑PFT?α可以減輕阿霉素對人皮膚角質形成細胞的損傷．口腔黏膜角質形成細胞培養的有關實驗證實只有小而圓的細胞才具有增殖能力［24］，如果在培養液中加入P53抑制劑PFT?α，會不會對角質形成細胞的培養結果產生影響需要通過實驗證實．

綜上所述，OLP是發生于口腔黏膜的慢性炎癥，作為一種T細胞介導的自身免疫性疾病［15］，OLP的發生發展與多種細胞因子密切相關．本研究對與OLP關系密切的主要細胞因子做了簡要概括，鑒于OLP與多種細胞因子有關，有些學者開始體外混合培養OLP角質形成細胞與淋巴細胞，但是目前相關的研究尚且不多，OLP的發病機制以及很多問題都有待進一步研究證實．

［1］Hirota SK，Moreno RA，Dos SC，et al．Analysis of a possible

association between oral lichen planusand drug intake．A controlled

study［J］．Med Oral PatolOral Cir Bucal，2011，16（6）：e750－e756．

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［3］Zhong X，Tumang JR，Gao W，et al．PD?L2 expression extends beyond dendritic cells／macrophages to B1 cells enriched for V（H）11／V（H）12 and phosphatidylcholine binding［J］．Eur J Immunol，2007，37（9）：2405－2410．

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R781．5

A

2095?6894（2015）08?117?02

2015－07－24；接受日期：2015－08－06

許斌．碩士．E?mail：xubin188＠126．com