齊墩果酸在惡性腫瘤中的研究概況

吳玲玲，周二霞，趙瑞東，韓 霞，云霏雨，劉秉春，云 升

齊墩果酸在惡性腫瘤中的研究概況

吳玲玲，周二霞，趙瑞東，韓 霞，云霏雨，劉秉春，云 升

齊墩果酸屬五環三萜類化合物，廣泛分布于多種天然植物中，具有多種生物活性。近年來齊墩果酸作為一個具有優秀抑瘤活性同時不良反應小的天然化合物，其抗腫瘤活性研究受到廣泛重視。

齊墩果酸；抗腫瘤作用；惡性腫瘤

齊墩果酸(oleanolic acid，OA)又名慶四素，是一種從植物中提取的天然產物，是自然界中分布最廣泛的五環三萜類化合物，以游離或結合成苷的形式廣泛存在多種植物中，如油橄欖、夏枯草、連翹、女貞、木瓜等[1-2]。已有的研究表明，OA有抗腫瘤、保肝、降糖、降脂、調節免疫、抗人類免疫缺陷病毒、抗炎、抗氧化等多種良性效應[3-6]，目前臨床上OA制劑主要用于治療各種類型的肝炎以及預防抗結核藥物對肝臟的損害。大量實驗室資料證實，OA有明確的抗腫瘤作用[7-9]，由于其高效低毒的藥理特點，國內外學者對其進行了大量的研究工作[10-12]。作者以近年來國內外對OA的抗腫瘤作用的研究概況作一綜述。

1 OA在惡性腫瘤中的作用

1.1 血液系統腫瘤 OA對白血病細胞有抑制作用，也可通過抑制人淋巴系白血病Molt4B細胞內鳥氨酸脫羧酶和S-腺苷甲硫氨酸脫羧酶的活性，降低細胞內多胺含量，抑制Molt4B細胞增殖[13]。李鴻梅等[14]以人早幼粒細胞白血病(M3型)NB4細胞為研究對象，以不同劑量的OA處理，觀察其對細胞增殖的影響及其對凋亡相關基因表達的影響，證實了OA對NB4細胞增殖的抑制作用可能是通過上調促凋亡基因的表達以及下調抗凋亡基因的表達而實現的。張鵬霞等[15]和湯華成等[16]在進行OA對人慢性髓系白血病細胞K562的影響實驗中進一步論證了OA對白血病細胞增殖的抑制作用。而近2年中王迪迪等[17-19]和Shukuya等[20]對白血病HL-60細胞進行了反轉錄聚合酶鏈反應檢測及Western Blot檢測，再次驗證了OA作用后的HL-60細胞出現細胞凋亡現象，細胞抑制率增加。提示OA可能通過抑制磷脂酰肌醇-3激酶/Akt信號通路轉導促進HL-60細胞凋亡，從而抑制腫瘤細胞增殖。OA既是白血病細胞增殖的抑制劑，又是細胞分化的促進劑[21]，類似于目前臨床治療白血病的常用藥物三氧化二砷，而且OA不良反應較低，有望成為白血病治療的領軍藥物。

1.2 呼吸系統腫瘤 張東方等[22]和黃煒等[23]用克隆化高轉移人肺巨細胞癌PGCL3細胞進行實驗，采用細胞增殖抑制實驗、軟瓊脂集落形成實驗、對重建基底膜的侵襲實驗、趨化運動實驗、對層粘連蛋白的黏附實驗以及組織蛋白酶B活性測定，觀察OA對PGCL3細胞侵襲能力的影響，用吖啶橙/溴乙啶(acridine orange ethidium bromide，AO/EB)熒光雙染法和原位末端轉移酶標志技術檢測細胞凋亡。研究結果提示，OA有抗PGCL3人肺癌細胞增殖和侵襲作用，并有誘導PGCL3細胞凋亡的作用。其機制可能包括2個方面:一是誘導癌細胞分化反轉。實驗證明OA使PGCL3細胞軟瓊脂集落形成數顯著下降，而通常認為癌細胞在半固體瓊脂上形成集落的多少與其惡性程度呈正相關，由此表明OA可誘導癌細胞分化從而呈現增殖抑制。二是誘導細胞凋亡，從而使細胞數量減少。反映細胞凋亡形態特征的AO/EB熒光雙染法和高靈敏度的反映細胞凋亡生化特征的實驗證明了OA有誘導PGCL3細胞凋亡的作用[24]。

1.3 消化系統腫瘤 目前許多文獻報道，OA可誘導人肝細胞癌HuH7細胞凋亡，抑制生長的半抑制濃度分別為100 μmol/L和75 μmol/L[25-27]；隨著OA濃度增加，HuH7細胞的亞G1期相應提高[28]。OA或含OA的三萜化合物的日本杏提取物與氟尿嘧啶聯用對食管鱗癌yZS-2細胞的副作用有疊加或協同作用，使細胞周期滯留在G2/M期和S期并誘導凋亡。

李鴻梅等[29-30]在體外建立胃癌順鉑化療耐藥細胞株SGC-7901/CDDP，采用藥物濃度梯度遞增持續作用法進行研究。實驗結果表明，OA抑制SGC-7901/CDDP增殖具有濃度依賴性，經高濃度OA處理能夠明顯抑制SGC-7901/CDDP增殖。實時熒光定量聚合酶鏈反應檢測實驗結果表明，OA可能通過線粒體途徑而誘導細胞發生凋亡。而瓊脂糖凝膠電泳實驗證實，對照組細胞和處理前期(12 h和24 h)細胞的 DNA保持較好的完整性；而給予 100 μmol/L的OA 48 h后，細胞的 DNA出現明顯的DNA Ladder圖譜，這是細胞凋亡最顯著的生物化學標志。從而進一步證明，OA抑制SGC-7901/CDDP增殖的方式為誘導細胞凋亡。

1.4 生殖系統腫瘤 韓國學者用多種實驗方法證實OA對體外培養的正常大鼠乳腺上皮細胞有誘導分化和凋亡的雙重作用[31]。OA(25～125 μmol/L)濃度依賴性抑制人乳腺癌MCF-7細胞增殖。末端轉移酶標志技術和流式細胞儀檢測都證明OA通過誘導凋亡抑制MCF-7細胞增殖，而上調細胞內游離Ca2＋水平是 OA誘導凋亡的機制之一[32]。吳林蔚等[33]研究了OA對卵巢癌細胞株IGROV1和人乳腺癌細胞株MDA-MB-231的抑制作用，結果顯示OA可降低IGROV1、MDA-MB-231的細胞增殖能力并呈劑量依賴性，表明OA對這2株惡性腫瘤細胞具有抑制活性，且對IGROV1的抑制活性高于對MDAMB-231的抑制活性。

1.5 其他 OA在無毒濃度時能使黑色素瘤B16F-10細胞出現凋亡小體和DNA碎片。OA通過激活前凋亡通路(p53參與，半胱天冬酶介導)和抑制抗凋亡通路(核轉錄因子-κB參與，B細胞淋巴瘤因子2介導)誘導B16F-10細胞凋亡[34]。表-齊墩果酸和氧代-齊墩果酸對皮膚黑色素瘤SK-MEL-2細胞增殖也有明顯抑制作用，以大鼠C6膠質瘤細胞和人肺腺癌細胞株A549為實驗模型，在有氧和乏氧條件下，采用無毒濃度的OA預處理腫瘤細胞，觀察細胞放射敏感性的變化，結果顯示OA對有氧和乏氧C6、A549細胞均具有較高的增敏比；且在早期的研究報道中發現，OA能夠促進照射后正常組織的恢復[35]，因此在腫瘤放射增敏治療中具有一定的靶向性。

2 OA在腫瘤治療中的展望與局限性

綜上所述，OA不僅誘導腫瘤細胞分化和凋亡，還有效抑制腫瘤血管的生成以及腫瘤細胞的轉移和侵襲。OA作為惡性腫瘤的免疫治療用藥已經進入Ⅱ期臨床試驗，作為天然來源的抗腫瘤藥物具有不良反應小的優點，是一種具有開發潛力的天然產物。但OA也有其自身的成藥局限性:首先，作為一種廣泛分布的價廉易得的天然產物，OA的生物活性較弱；其次，OA的不溶于水、脂水分布系數不良，導致其生物利用度低，這也大大限制了它在臨床上的應用。因此，研究者們不但對OA展開了深入的研究，還對其衍生物也進行了研究。相信未來OA及其衍生物將在惡性腫瘤治療中大放異彩。

[1]Yan SL，Huang CY，Wu ST，et al.Oleanolic acid and ursolic acid induce apoptosis in four human liver cancer cell lines[J].Toxicol In Vitro，2010，24(3):842-848.

[2]張秀真，高素蓮.PR-HPLC內標法測定5種中草藥的齊墩果酸含量[J].生物學雜志，2010，27(2):80-82.

[3]Yang EJ，Lee W，Ku SK，et al.Anti-inflammatory activities of oleanolic acid on HMGB1 activated HUVECs[J].Food Chem Toxicol，2012，50(5):1288-1294.

[4]Reisman SA，Aleksunes LM，Klaassen CD.Oleanolic acid activates Nrf2 and protects from acetaminophen hepatotoxicity via Nrf2-dependent and Nrf2-independent processes [J].Biochem Pharmacol，2009，77(7):1273-1282.

[5]Yim TK，Wu WK，Pak WF，et al.Hepatoprotective action of an oleanolic acid-enriched extract of Ligustrum lucidum fruits is mediated through an enhancement on hepatic glutathione regeneration capacity in mice[J].Phytother Res，2001，15(7):589-592.

[6]Fujiwara Y，Komohara Y，Kudo R，et al.Oleanolic acid inhibits macrophage differentiation into the M2 phenotype and glioblastoma cell proliferation by suppressing the activation of STAT3[J].Oncol Rep，2011，26(6):1533-1537.

[7]Zhou R，Zhang Z，Zhao L，et al.Inhibition of mTOR signaling by oleanolic acid contributes to its anti-tumor activity in osteosarcoma cells[J].J Orthop Res，2011，29(6): 846-852.

[8]Zeng YB，Hsiao HM，Chan SH，et al.Synthesis and anticancer activity of a glycosyl library of N-acetylglu-cosaminebearing oleanolic acid[J].Mol Divers，2014，18(1):13-23.

[9]Tang S，Gao D，Zhao T，et al.An evaluation of the antitumor efficacy of oleanolic acid-loaded PEGylated liposomes[J].Nanotechnology，2013，24(23):235102.

[10]Meng YQ，Nie HH，Wang XC，et al.Synthesis and antitumor activity of oleanolic acid derivatives[J].Yao Xue Xue Bao，2011，46(10):1215-1220.

[11]Zhou R，Zhang Z，Zhao L，et al.Inhibition of mTOR signaling by oleanolic acid contributes to its anti-tumor activity in osteosarcoma cells[J].J Orthop Res，2011，29(6): 846-852.

[12]Hua Y，Zhang Z，Li J，et al.Oleanolic acid derivative Dex-OA has potent anti-tumor and anti-metastatic activity on osteosarcoma cells in vitro and in vivo[J].Invest New Drugs，2011，29(2):258-265.

[13]張明發，沈雅琴.熊果酸和齊墩果酸抗皮膚癌與白血病藥理作用的研究進展[J].抗感染藥學，2012，9(3): 177-181.

[14]李鴻梅，王敬春，齊占朋，等.齊墩果酸對人早幼粒白血病NB4細胞增殖的影響及其機制[J].中國老年學雜志，2011，31(14):2702-2704.

[15]張鵬霞，薛芳喜，王迪迪，等.齊墩果酸對K562細胞bax、bcl-xL mRNA表達的影響[J].中國老年學雜志，2009，29(21):2751-2752.

[16]湯華成，趙蕾，張鵬霞，等.齊墩果酸對K562細胞系VEGF表達影響的實驗研究[J].中國老年學雜志，2007，27(24): 2371-2373.

[17]王迪迪，李麗，張鵬霞.齊墩果酸對白血病HL-60細胞cav-1表達的影響[J]中國醫學創新，2013，10(23):1-3.

[18]王迪迪，馬微，葛堂棟，等.齊墩果酸對白血病HL-60細胞PI3K、Akt、Cav-1表達的影響[J].黑龍江醫藥科學，2013，36(6):1-2，6.

[19]王迪迪，朱貴明，張鵬霞.齊墩果酸對白血病HL-60細胞PI3K、Akt表達的影響[J].腫瘤藥學，2013，3(4): 268-270，281.

[20]Shukuya T，Takahashi T，Naito T，et al.Continuous EGFRTKI administration following radiotherapy for non-small celllung cancer patients with isolated CNS failure[J]. Lung Cancer，2011，74(3):457-461.

[21]Umehara K，Takagi R，Kuroyanagi M，et al.Studies on differentiation-inducing activities of triterpenes[J].Chem Pharm Bull(Tokyo)，1992，40(2):401-405.

[22]張東方，黃煒，黃濟群，等.齊墩果酸抗人肺癌細胞增殖、侵襲和誘導細胞凋亡的研究[J].腫瘤防治研究，2003，30(3):180-183.

[23]黃煒，黃濟群，張東方，等.五環三萜類化合物抗人肺癌細胞侵襲和誘導細胞凋亡的研究[J].中國肺癌雜志，2003，6(4):254-257.

[24]李旸，劉卓剛，吳斌.齊墩果酸的抗腫瘤作用[J].實用醫學雜志，2010，26(10):3830-3832.

[25]Wu PK，Chi Shing Tai W，Liang ZT，et al.Oleanolic acid isolated from Oldenlandia diffusa exhibits a unique growth inhibitory effect against ras-transformed fibroblasts[J].Life Sci，2009，85(3/4):113-121.

[26]Shyu MH，Kao TC，Yen GC.Oleanolic acid and ursolic acid induce apoptosis in HuH7 human hepatocellular carcinoma cells through amitochondrial-dependent pathway and downregulation of XIAP[J].J Agric Food Chem，2010，58(10):6110-6118.

[27]Bao X，Gao M，Xu H，et al.A novel oleanolic acid-loaded PLGA-TPGS nanoparticle for liver cancer treatment[J]. Drug Dev Ind Pharm，2014，15:1-11.

[28]張明發，沈雅琴.熊果酸和齊墩果酸的抗消化系腫瘤作用[J].上海醫藥，2011，32(12):606-611.

[29]李鴻梅，李雪巖，蔡德富，等.齊墩果酸對順鉑耐藥胃癌SGC-7901細胞增殖的影響及其機制研究[J].中國藥理學通報，2009，25(10):1334-1337.

[30]李鴻梅，王敬春，齊占朋，等.齊墩果酸對順鉑耐藥胃癌SGC-7901細胞增殖及細胞凋亡的影響[J].中國老年學雜志，2010，30(5):667-669.

[31]Paik KJ，Jeon SS，Chung HY，et al.Induction of differentiation of the cultured rat mammary epithelial cells by triterpene acids[J].Arch Pharmacal Ras，1998，21(4):398-405.

[32]黃敏珊，黃煒，吳其年，等.齊墩果酸誘導人乳腺癌細胞凋亡及與細胞內Ca2＋水平關系的研究[J].中國現代醫學雜志，2004，14(16):58-60，63.

[33]吳林蔚，蒲薔，陳曉珍，等.齊墩果酸對卵巢癌細胞IGROV1和乳腺癌細胞MDA-MB-231生長的抑制作用[J].應用與環境生物學報，2010，16(2):202-204.

[34]Pratheeshkumar P，Kuttan G.Oleanolic acid induces apoptosis by modulating p53，Bax，Bcl-2 and caspase-3 gene expression and regulatesthe activation of transcription factors and cytokine profile in B16F[J].J Environ Pathol Toxicol Oncol，2011，30(1):21-31.

[35]Kwon HC，Lee KR，Zee OP.Cytotoxic constituents of Pilea mongolica[J].Arch Pharm Res，1997，20(2):180-183.

Research progress of oleanolic acid in the malignant tumor

WU Lingling，ZHOU Erxia，ZHAO Ruidong，HAN Xia，YUN Feiyu，LIU Bingchun，YUN Sheng
(Stem Cell Laboratory，the Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University，Huhhot Inner Mongolia 010050，China)

Oleanolic acid was a kind of pentacyclic triterpenoid that widely found in natural plants and had a variety of pharmacological activities.In recent years，Oleanolic acid as small natural compounds has an excellent antitumor activity and less toxicity that gained widely attention.

Oleanolic acid(OA)；Anti tumor effect；Malignant neoplasm

R730.5

A

2095-3097(2015)02-0115-03

10.3969/j.issn.2095-3097.2015.02.013

2014-10-29 本文編輯:徐海琴)

010050內蒙古呼和浩特，內蒙古醫科大學附屬醫院干細胞實驗室(吳玲玲，周二霞，趙瑞東，韓 霞，云霏雨，劉秉春，云 升)

云 升，E-mail:sheng.yun＠hotmail.co.uk