TopoⅡα mRNA在乳腺癌中的分布規(guī)律和預后及蒽環(huán)類藥物療效的觀察

熊劍華

我國乳腺癌以每年3%～4%的增長速度上升[1]。含蒽環(huán)類化療方案是乳腺癌綜合治療的重要組成部分，但患者的敏感性存在個體差異，在治療過程中根據(jù)體外腫瘤藥敏試驗結果，有針對性地使用敏感的藥物，可避免其充血性心力衰竭、誘發(fā)其它腫瘤的不良反應，使患者得到最大的獲益。TopoⅡα為催化DNA拓撲結構改變的酶系，是多種抗腫瘤藥如蒽環(huán)類的靶分子，其表達將影響腫瘤對化療的敏感性，本文探討TopoⅡα在乳腺癌組織中的分布規(guī)律暨臨床多因素對其表達的影響，以及對預后和化療的觀察。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2009年1月～2012年6月江西省新干縣人民醫(yī)院行乳腺癌改良根治術女性患者的手術標本共78例，患者年齡32～68歲，其中45歲以下25例，45歲以上53例，左側38例，右側40例，伴同側腋窩淋巴結轉移的36例，無轉移的42例；均為原發(fā)腫瘤，術后經(jīng)病理證實為乳腺癌。

1.2 臨床因素 病理情況：浸潤性導管癌49例，乳腺導管內癌12例，乳腺黏液癌5例，導管原位癌4例，鱗癌3例，浸潤性小葉癌3例，髓樣癌2例。TNM分期：Ⅰ期10.26%（8/78），Ⅱ期 50%（39/78），Ⅲ期 26.92%（21/78），Ⅳ期 12.82%（10/78）。腋淋巴結轉移率 64.1%（50/78）；ER（+）48.72%（38/78），ER（-）46.15%（36/78），Her-2 高表達 37.18%（29/78）。

1.3 化療方案 患者化療前血常規(guī)、肝腎功能正常范圍內，心電圖正常。入選患者均未行含蒽環(huán)類藥物化療。所有患者給予CAF方案化療，具體為CTX（山西普德藥業(yè)公司生產(chǎn)，0.2g/支，批號 H14023686）400mg～600mg/m2靜滴，第 1 天；THP（浙江海正藥業(yè)公司，10mg/支，批號H20045983）45～55mg/m2靜滴，第 1天；5-Fu（天津金耀藥業(yè)公司，0.25g/支，批號H12020959）400～500mg/m2靜滴，第 1、8天。3周為 1周期，并且每人均用兩周期以上。共用226周期，平均每人用2.9周期。

1.4 療效評價 按WHO統(tǒng)一標準評價。有效患者為完全緩解（CR）+部分緩解（PR），療效持續(xù)時間定義：TTP指從本次治療開始到腫瘤進展的時間，TTF為治療開始到病變進展時間，還包括任何原因中斷治療日期為止。

1.5 免疫組織化學分析 TopoⅡα濃度測定采用SP免疫組織化學法，所有乳腺癌標本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，再連續(xù)切片4μm厚，常規(guī)用3%H2O2溶液作用10min，微波修復抗原，依次加入Ⅰ抗（抗TopoⅠα）和Ⅱ抗（抗TopoⅡα），最后DAB顯色，蘇木素復染后封片觀察，以TBS液代替Ⅰ抗作陰性對照，用已知扁桃體作陽性對照。

1.6 在光學顯微鏡下觀察 在腫瘤細胞核內有黃色或棕黃色著色顆粒判斷為陽性，相反如觀察無明顯變化則判斷為陰性。

1.7 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)分析使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，TopoⅡα mRNA的表達水平與預后和含蒽環(huán)類療效的關系用χ2檢驗分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 TopoⅡα的表達 78例患者組織中有41例（52.56%）TopoⅡα mRNA呈陽性表達。

2.2 TopoⅡα表達和臨床病例資料關系 根據(jù)臨床特征包括月經(jīng)情況、年齡（＜35和≥35歲）、病理學類型、臨床分期、淋巴結轉移、ER表達、PR表達、Her-2表達等特性進行統(tǒng)計。見表1。

表1 78例晚期乳腺癌患者的臨床特性與TopoⅡα表達的關系

2.3 TopoⅡα表達與臨床療效、預后及遠處轉移的關系見表2。

表2 78例乳腺癌TopoⅡα表達和臨床療效、預后及遠處轉移的關系

3 討論

目前乳腺癌的發(fā)病率明顯上升，在城市更加明顯，輔助化療是乳腺癌綜合治療的重要組成部分，經(jīng)統(tǒng)計表明含蒽環(huán)類藥物的方案要優(yōu)于不含蒽環(huán)類藥物。但蒽環(huán)類藥物不是對所有乳腺癌病人有效，有些開始治療有效的患者在多次治療后耐藥，這提示乳腺癌對化療藥物的敏感性存在個體差異。

拓撲異構酶II是一個已知蒽環(huán)類抗生素作用的點[2]，能調節(jié)核酸空間結構的動態(tài)變化，其蛋白水平的變化能一定程度上反映細胞的增殖情況[3]。TopoII在人類體內有二種同工酶：TopoIIα和TopoIIβ，前者在乳腺癌、肺癌和頭頸部腫瘤中表達明顯高于正常組織，具有細胞周期特異性，而后者在腫瘤細胞和正常組織中無差異，在細胞周期中保持恒定。TopoIIα主要有兩種生理方式：一是直接參與打斷后重新連接DNA分子鏈的生物過程；二是以調節(jié)DNA的螺旋結構以及打節(jié)或解節(jié)DNA的環(huán)聯(lián)體狀態(tài)的方式間接參與。蒽環(huán)類藥物是通過抑制TopoIIα和DNA的結合，引起DNA的斷裂最終導致細胞殺滅，如果TopoⅡα表達低下將影響藥物起效形成耐藥。

本文研究通過免疫組織化學分析檢測了78例乳腺癌組織中TopoIIα表達水平，結果發(fā)現(xiàn)，TopoIIα與月經(jīng)情況、年齡、病理學類型、臨床分期、ER表達、PR表達均無關，但在術后腋窩淋巴結轉移個數(shù)、Her-2表達比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示腋窩淋巴結轉移個數(shù)越多TopoIIα陽性表達越高，TopoIIα而且和Her-2表達呈正相關。

在腫瘤患者接受含蒽環(huán)類藥物聯(lián)合化療的療效分析中，TopoIIα陽性組有效率58.54%（24/41）高于TopoIIα陰性表達組的 40.54%（15/37），差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。從藥物療效持續(xù)時間來看，TopoIIα陽性組中位TTF 16周高于TopoIIα陰性表達組的12周，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示TopoIIα陽性顯示患者對于含蒽環(huán)類藥物化療療效持續(xù)時間更長。同時本實驗分析了TopoIIα陽性組腋窩淋巴結轉移為75.61%（31/41）高于TopoIIα陰性組遠處轉移率51.35%（19/37），兩者之間差異具有統(tǒng)計學意義，TopoIIα陽性表達出現(xiàn)腋窩淋巴結轉移風險高于陰性表達患者。

大量研究表明TopoIIα表達和預后有關[4-5]，對其發(fā)生、發(fā)展、淋巴結轉移相關[6-7]，可預測蒽環(huán)類藥物對乳腺癌化療敏感程度的指標[8]。

[1] 肖海鳳，于國華,劉淑真，等.TopoⅡα在乳腺癌中的表達與蒽環(huán)類藥物敏感性的分析[J].維坊醫(yī)學院學報，2013,35（5）:389.

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[3] 況麗萍，王媛媛，管慧紅，等.TopoⅡa和Ki-67在不同分子亞型乳腺癌組織中的表達及意義[J].實用醫(yī)學雜志，2014,30（5）:778.

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[5] 何奇，徐國萍，王杰，等.TopoⅡα在乳腺癌中的表達及其臨床意義[J].中國癌癥雜志，2011,21（1）:41.

[6] 張志生.TopoⅡα在青年乳腺癌中的表達及對新輔助化療療效的影響[J].河北醫(yī)藥，2011,33（21）:3264.

[7] 馬平.TopoⅡ、p53、Ki-67、c-erbB-2 在乳腺癌組織中的表達[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2011,19（8）:1546.

[8] 肖華武，歐陽取.TopoⅡα在乳腺癌組織中表達及其與蒽環(huán)類藥物敏感性的關系[J].實用癌癥雜志，2013,28（6）:590.