不同產(chǎn)地桑葚中總黃酮含量的測定

周慶頌　孫若飛　宴麗芳　等

摘要：為控制桑葚制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性，采用分光光度法對不同產(chǎn)地桑葚藥材中總黃酮含量進(jìn)行分析比較。以蘆丁為對照品，亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，測定波長為501 nm，蘆丁濃度在0.008 18～0.049 06 mg/mL范圍內(nèi)吸收值與濃度具有良好的線性關(guān)系（r=0.999 7），平均加樣回收率分別為103.30%、104.03%和105.83%，RSD值為2.65%、2.86%和2.27%（n=9）。該分析方法簡單快速、準(zhǔn)確可靠，可用于桑葚中總黃酮成分含量的測定。分別測定了8個不同產(chǎn)地藥材中的總黃酮含量，含量范圍為0.653～2.074 mg/g。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地桑葚中總黃酮含量差異較大，說明環(huán)境綜合機(jī)制對桑葚中總黃酮含量有明顯影響。

關(guān)鍵詞：桑葚；蘆丁；總黃酮；產(chǎn)地

中圖分類號：R917 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5526-02

桑葚是蕁麻目桑科植物桑樹（Morus alba L.）的成熟果穗，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，既具有食用價值又可作為藥材使用，為衛(wèi)生部首批藥食兩用的農(nóng)產(chǎn)品之一，具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景[1-4]。中國桑葚資源豐富，共有15個種4個變種3 000多個種質(zhì)資源，在全國各省市均有桑葚的分布[5]。

總黃酮為桑葚及其相關(guān)制劑的主要藥效成分，在桑葚藥品的開發(fā)過程中，總黃酮為其制劑的主要質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。但另一方面，在制劑生產(chǎn)過程中，研究人員發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的桑葚中總黃酮差異較大，導(dǎo)致其制劑質(zhì)量不穩(wěn)定。為控制藥品質(zhì)量，通過分析比較不同產(chǎn)地桑葚中的總黃酮含量，可為開發(fā)其相關(guān)產(chǎn)品提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

桑葚干果（分別購自山東樂陵、安徽合肥、新疆吐魯番、江西樟樹、四川南充、廣東揭陽、河北安國、陜西洋縣），經(jīng)鑒定為桑科植物桑葚成熟果實，留樣憑證存放于本校藥學(xué)院中藥鑒定實驗室。

蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100 080-200 707，以UV法測定含量為92.5%）；水為去離子水；其余試劑均為分析純試劑。

1.2 儀器

UV-2550型紫外可見分光光度計（日本島津制作所），XS205型電子分析天平（梅特勒-托利多國際股份有限公司）；KQ300-DE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；JC101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（南通嘉程儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 樣品溶液的制備 取蘆丁對照品22.10 mg于100 mL容量瓶中，加70%（V/V，下同）乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得0.221 0 mg/mL對照品溶液；將桑葚樣品干燥至恒重，取約5g干燥樣品于具塞三角瓶中，加入70%乙醇100 mL，超聲1 h，過濾，重復(fù)2次，合并濾液即得樣品溶液。

1.3.2 測定波長的選擇 經(jīng)紫外-可見光區(qū)掃描，蘆丁對照品溶液的最大吸收波長為501 nm，故本研究選擇501 nm為測定波長。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別量取2.0～12.0 mL不同體積的對照品溶液于50 mL容量瓶中，加水至12 mL，加5%亞硝酸鈉溶液2 mL，混勻，放置6 min。加10%（m/V）硝酸鋁溶液2 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液20 mL。再加水至刻度，搖勻，放置15 min；以相應(yīng)試劑為空白參比，按照紫外-可見光分光光度法[6]，測定501 nm處吸光度。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程

按照“1.3.3”得回歸方程為A=11.584 0C-0.006 3，r=0.999 7，線性范圍0.008 18～0.049 06 mg/mL。

2.2 方法學(xué)考察結(jié)果

取同一份對照品溶液，每隔一定時間測定501 nm處吸光值。結(jié)果表明在顯色后30 min內(nèi)溶液吸收值保持穩(wěn)定；取同一供試品溶液（產(chǎn)地：山東樂陵），連續(xù)測定6次，其吸收值的RSD為0.55%，說明精密度良好；取同一桑葚樣品（產(chǎn)地：山東樂陵），平行制備6份供試品溶液，并按測定項下方法測定，其吸收值RSD為1.92%，表明方法重復(fù)性良好。

采用加樣回收法，取已知含量的桑葚樣品（產(chǎn)地：山東樂陵），共9份，按80%，100%，120%分別加入蘆丁對照品，各3份，按上述方法測定3種濃度的平均回收率及RSD值，如表1所示。

2.3 樣品測定

精密量取供試品溶液12.0 mL，定容至50 mL（同時設(shè)去離子水為空白對照），同上法測定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣品中總黃酮（以蘆丁計）的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

總黃酮是評價桑葚藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)，以蘆丁為對照品的比色法是測定總黃酮含量的經(jīng)典方法[7]。本文建立了桑葚藥材中總黃酮含量測定的方法，方法簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好，該方法可用于桑葚及其相關(guān)制劑中總黃酮含量的分析測定。根據(jù)文獻(xiàn)方法[8，9]，比較了60%、70%、80%、90%乙醇等不同提取溶劑，結(jié)果表明，以70%乙醇提取黃酮總含量較高，干擾雜質(zhì)少，故確定用70%乙醇作為提取溶劑。中藥材中有效成分的含量受地質(zhì)、環(huán)境、氣候的影響。本試驗結(jié)果表明，產(chǎn)地不同的桑葚中總黃酮具有較大差異，即在桑葚制劑的制備過程中，有必要對所不同產(chǎn)地、不同批次、不同采收季節(jié)的桑葚原藥材中總黃酮的含量進(jìn)行監(jiān)測，防止因藥材中總黃酮含量的變化導(dǎo)致桑葚制劑中總黃酮含量的大幅波動，以保證制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李冬香，陳清西.桑葚功能成份及其開發(fā)利用研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2009，25（24）：293-297.

[2] 吳祖芳，翁佩芳.桑椹的營養(yǎng)組分與功能特性分析[J].中國食品學(xué)報，2005，5（3）：102-106.

[3] 劉學(xué)銘，肖更生，陳衛(wèi)東.桑椹的研究與開發(fā)進(jìn)展[J].中草藥， 2001，32（6）：569-571.

[4] 孫潔民.丹參、桑椹子、四物湯對小鼠免疫功能影響的實驗研究[J].中醫(yī)藥研究，1991（3）：50-51.

[5] 潘一樂.桑種質(zhì)資源和桑樹育種的研究現(xiàn)狀與展望[J].蠶業(yè)科學(xué)，2000，26（Z1）：1-8.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[7] 馬陶陶，張群林，李 俊.中藥總黃酮的含量測定方法[J].安徽醫(yī)藥，2007，11（11）：1030-1032.

[8] 陳江梅，李利軍，馬 齊.桑葚汁、茱萸汁和沙棘汁中的總黃酮含量測定分析[J].中國釀造，2009，208（7）：153-155.

[9] 張 帆，劉宏炳，田樹革，等.藥桑中黃酮和多糖的超聲提取與含量測定[J].西北藥學(xué)雜志，2008，23（5）：282-283.

（責(zé)任編輯 周有祥）

摘要：為控制桑葚制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性，采用分光光度法對不同產(chǎn)地桑葚藥材中總黃酮含量進(jìn)行分析比較。以蘆丁為對照品，亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，測定波長為501 nm，蘆丁濃度在0.008 18～0.049 06 mg/mL范圍內(nèi)吸收值與濃度具有良好的線性關(guān)系（r=0.999 7），平均加樣回收率分別為103.30%、104.03%和105.83%，RSD值為2.65%、2.86%和2.27%（n=9）。該分析方法簡單快速、準(zhǔn)確可靠，可用于桑葚中總黃酮成分含量的測定。分別測定了8個不同產(chǎn)地藥材中的總黃酮含量，含量范圍為0.653～2.074 mg/g。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地桑葚中總黃酮含量差異較大，說明環(huán)境綜合機(jī)制對桑葚中總黃酮含量有明顯影響。

關(guān)鍵詞：桑葚；蘆丁；總黃酮；產(chǎn)地

中圖分類號：R917 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5526-02

桑葚是蕁麻目桑科植物桑樹（Morus alba L.）的成熟果穗，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，既具有食用價值又可作為藥材使用，為衛(wèi)生部首批藥食兩用的農(nóng)產(chǎn)品之一，具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景[1-4]。中國桑葚資源豐富，共有15個種4個變種3 000多個種質(zhì)資源，在全國各省市均有桑葚的分布[5]。

總黃酮為桑葚及其相關(guān)制劑的主要藥效成分，在桑葚藥品的開發(fā)過程中，總黃酮為其制劑的主要質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。但另一方面，在制劑生產(chǎn)過程中，研究人員發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的桑葚中總黃酮差異較大，導(dǎo)致其制劑質(zhì)量不穩(wěn)定。為控制藥品質(zhì)量，通過分析比較不同產(chǎn)地桑葚中的總黃酮含量，可為開發(fā)其相關(guān)產(chǎn)品提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

桑葚干果（分別購自山東樂陵、安徽合肥、新疆吐魯番、江西樟樹、四川南充、廣東揭陽、河北安國、陜西洋縣），經(jīng)鑒定為桑科植物桑葚成熟果實，留樣憑證存放于本校藥學(xué)院中藥鑒定實驗室。

蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100 080-200 707，以UV法測定含量為92.5%）；水為去離子水；其余試劑均為分析純試劑。

1.2 儀器

UV-2550型紫外可見分光光度計（日本島津制作所），XS205型電子分析天平（梅特勒-托利多國際股份有限公司）；KQ300-DE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；JC101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（南通嘉程儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 樣品溶液的制備 取蘆丁對照品22.10 mg于100 mL容量瓶中，加70%（V/V，下同）乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得0.221 0 mg/mL對照品溶液；將桑葚樣品干燥至恒重，取約5g干燥樣品于具塞三角瓶中，加入70%乙醇100 mL，超聲1 h，過濾，重復(fù)2次，合并濾液即得樣品溶液。

1.3.2 測定波長的選擇 經(jīng)紫外-可見光區(qū)掃描，蘆丁對照品溶液的最大吸收波長為501 nm，故本研究選擇501 nm為測定波長。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別量取2.0～12.0 mL不同體積的對照品溶液于50 mL容量瓶中，加水至12 mL，加5%亞硝酸鈉溶液2 mL，混勻，放置6 min。加10%（m/V）硝酸鋁溶液2 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液20 mL。再加水至刻度，搖勻，放置15 min；以相應(yīng)試劑為空白參比，按照紫外-可見光分光光度法[6]，測定501 nm處吸光度。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程

按照“1.3.3”得回歸方程為A=11.584 0C-0.006 3，r=0.999 7，線性范圍0.008 18～0.049 06 mg/mL。

2.2 方法學(xué)考察結(jié)果

取同一份對照品溶液，每隔一定時間測定501 nm處吸光值。結(jié)果表明在顯色后30 min內(nèi)溶液吸收值保持穩(wěn)定；取同一供試品溶液（產(chǎn)地：山東樂陵），連續(xù)測定6次，其吸收值的RSD為0.55%，說明精密度良好；取同一桑葚樣品（產(chǎn)地：山東樂陵），平行制備6份供試品溶液，并按測定項下方法測定，其吸收值RSD為1.92%，表明方法重復(fù)性良好。

采用加樣回收法，取已知含量的桑葚樣品（產(chǎn)地：山東樂陵），共9份，按80%，100%，120%分別加入蘆丁對照品，各3份，按上述方法測定3種濃度的平均回收率及RSD值，如表1所示。

2.3 樣品測定

精密量取供試品溶液12.0 mL，定容至50 mL（同時設(shè)去離子水為空白對照），同上法測定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣品中總黃酮（以蘆丁計）的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

總黃酮是評價桑葚藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)，以蘆丁為對照品的比色法是測定總黃酮含量的經(jīng)典方法[7]。本文建立了桑葚藥材中總黃酮含量測定的方法，方法簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好，該方法可用于桑葚及其相關(guān)制劑中總黃酮含量的分析測定。根據(jù)文獻(xiàn)方法[8，9]，比較了60%、70%、80%、90%乙醇等不同提取溶劑，結(jié)果表明，以70%乙醇提取黃酮總含量較高，干擾雜質(zhì)少，故確定用70%乙醇作為提取溶劑。中藥材中有效成分的含量受地質(zhì)、環(huán)境、氣候的影響。本試驗結(jié)果表明，產(chǎn)地不同的桑葚中總黃酮具有較大差異，即在桑葚制劑的制備過程中，有必要對所不同產(chǎn)地、不同批次、不同采收季節(jié)的桑葚原藥材中總黃酮的含量進(jìn)行監(jiān)測，防止因藥材中總黃酮含量的變化導(dǎo)致桑葚制劑中總黃酮含量的大幅波動，以保證制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李冬香，陳清西.桑葚功能成份及其開發(fā)利用研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2009，25（24）：293-297.

[2] 吳祖芳，翁佩芳.桑椹的營養(yǎng)組分與功能特性分析[J].中國食品學(xué)報，2005，5（3）：102-106.

[3] 劉學(xué)銘，肖更生，陳衛(wèi)東.桑椹的研究與開發(fā)進(jìn)展[J].中草藥， 2001，32（6）：569-571.

[4] 孫潔民.丹參、桑椹子、四物湯對小鼠免疫功能影響的實驗研究[J].中醫(yī)藥研究，1991（3）：50-51.

[5] 潘一樂.桑種質(zhì)資源和桑樹育種的研究現(xiàn)狀與展望[J].蠶業(yè)科學(xué)，2000，26（Z1）：1-8.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[7] 馬陶陶，張群林，李 俊.中藥總黃酮的含量測定方法[J].安徽醫(yī)藥，2007，11（11）：1030-1032.

[8] 陳江梅，李利軍，馬 齊.桑葚汁、茱萸汁和沙棘汁中的總黃酮含量測定分析[J].中國釀造，2009，208（7）：153-155.

[9] 張 帆，劉宏炳，田樹革，等.藥桑中黃酮和多糖的超聲提取與含量測定[J].西北藥學(xué)雜志，2008，23（5）：282-283.

（責(zé)任編輯 周有祥）

摘要：為控制桑葚制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性，采用分光光度法對不同產(chǎn)地桑葚藥材中總黃酮含量進(jìn)行分析比較。以蘆丁為對照品，亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉為顯色劑，測定波長為501 nm，蘆丁濃度在0.008 18～0.049 06 mg/mL范圍內(nèi)吸收值與濃度具有良好的線性關(guān)系（r=0.999 7），平均加樣回收率分別為103.30%、104.03%和105.83%，RSD值為2.65%、2.86%和2.27%（n=9）。該分析方法簡單快速、準(zhǔn)確可靠，可用于桑葚中總黃酮成分含量的測定。分別測定了8個不同產(chǎn)地藥材中的總黃酮含量，含量范圍為0.653～2.074 mg/g。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地桑葚中總黃酮含量差異較大，說明環(huán)境綜合機(jī)制對桑葚中總黃酮含量有明顯影響。

關(guān)鍵詞：桑葚；蘆丁；總黃酮；產(chǎn)地

中圖分類號：R917 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）22-5526-02

桑葚是蕁麻目桑科植物桑樹（Morus alba L.）的成熟果穗，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)，既具有食用價值又可作為藥材使用，為衛(wèi)生部首批藥食兩用的農(nóng)產(chǎn)品之一，具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景[1-4]。中國桑葚資源豐富，共有15個種4個變種3 000多個種質(zhì)資源，在全國各省市均有桑葚的分布[5]。

總黃酮為桑葚及其相關(guān)制劑的主要藥效成分，在桑葚藥品的開發(fā)過程中，總黃酮為其制劑的主要質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。但另一方面，在制劑生產(chǎn)過程中，研究人員發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地的桑葚中總黃酮差異較大，導(dǎo)致其制劑質(zhì)量不穩(wěn)定。為控制藥品質(zhì)量，通過分析比較不同產(chǎn)地桑葚中的總黃酮含量，可為開發(fā)其相關(guān)產(chǎn)品提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

桑葚干果（分別購自山東樂陵、安徽合肥、新疆吐魯番、江西樟樹、四川南充、廣東揭陽、河北安國、陜西洋縣），經(jīng)鑒定為桑科植物桑葚成熟果實，留樣憑證存放于本校藥學(xué)院中藥鑒定實驗室。

蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100 080-200 707，以UV法測定含量為92.5%）；水為去離子水；其余試劑均為分析純試劑。

1.2 儀器

UV-2550型紫外可見分光光度計（日本島津制作所），XS205型電子分析天平（梅特勒-托利多國際股份有限公司）；KQ300-DE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；JC101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（南通嘉程儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 樣品溶液的制備 取蘆丁對照品22.10 mg于100 mL容量瓶中，加70%（V/V，下同）乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得0.221 0 mg/mL對照品溶液；將桑葚樣品干燥至恒重，取約5g干燥樣品于具塞三角瓶中，加入70%乙醇100 mL，超聲1 h，過濾，重復(fù)2次，合并濾液即得樣品溶液。

1.3.2 測定波長的選擇 經(jīng)紫外-可見光區(qū)掃描，蘆丁對照品溶液的最大吸收波長為501 nm，故本研究選擇501 nm為測定波長。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別量取2.0～12.0 mL不同體積的對照品溶液于50 mL容量瓶中，加水至12 mL，加5%亞硝酸鈉溶液2 mL，混勻，放置6 min。加10%（m/V）硝酸鋁溶液2 mL，搖勻，放置6 min，加氫氧化鈉試液20 mL。再加水至刻度，搖勻，放置15 min；以相應(yīng)試劑為空白參比，按照紫外-可見光分光光度法[6]，測定501 nm處吸光度。以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程

按照“1.3.3”得回歸方程為A=11.584 0C-0.006 3，r=0.999 7，線性范圍0.008 18～0.049 06 mg/mL。

2.2 方法學(xué)考察結(jié)果

取同一份對照品溶液，每隔一定時間測定501 nm處吸光值。結(jié)果表明在顯色后30 min內(nèi)溶液吸收值保持穩(wěn)定；取同一供試品溶液（產(chǎn)地：山東樂陵），連續(xù)測定6次，其吸收值的RSD為0.55%，說明精密度良好；取同一桑葚樣品（產(chǎn)地：山東樂陵），平行制備6份供試品溶液，并按測定項下方法測定，其吸收值RSD為1.92%，表明方法重復(fù)性良好。

采用加樣回收法，取已知含量的桑葚樣品（產(chǎn)地：山東樂陵），共9份，按80%，100%，120%分別加入蘆丁對照品，各3份，按上述方法測定3種濃度的平均回收率及RSD值，如表1所示。

2.3 樣品測定

精密量取供試品溶液12.0 mL，定容至50 mL（同時設(shè)去離子水為空白對照），同上法測定吸收度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各樣品中總黃酮（以蘆丁計）的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

總黃酮是評價桑葚藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)，以蘆丁為對照品的比色法是測定總黃酮含量的經(jīng)典方法[7]。本文建立了桑葚藥材中總黃酮含量測定的方法，方法簡便、準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好，該方法可用于桑葚及其相關(guān)制劑中總黃酮含量的分析測定。根據(jù)文獻(xiàn)方法[8，9]，比較了60%、70%、80%、90%乙醇等不同提取溶劑，結(jié)果表明，以70%乙醇提取黃酮總含量較高，干擾雜質(zhì)少，故確定用70%乙醇作為提取溶劑。中藥材中有效成分的含量受地質(zhì)、環(huán)境、氣候的影響。本試驗結(jié)果表明，產(chǎn)地不同的桑葚中總黃酮具有較大差異，即在桑葚制劑的制備過程中，有必要對所不同產(chǎn)地、不同批次、不同采收季節(jié)的桑葚原藥材中總黃酮的含量進(jìn)行監(jiān)測，防止因藥材中總黃酮含量的變化導(dǎo)致桑葚制劑中總黃酮含量的大幅波動，以保證制劑質(zhì)量的穩(wěn)定性。

參考文獻(xiàn)：

[1] 李冬香，陳清西.桑葚功能成份及其開發(fā)利用研究進(jìn)展[J].中國農(nóng)學(xué)通報，2009，25（24）：293-297.

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（責(zé)任編輯 周有祥）