江蘇某規模豬場豬繁殖與呼吸綜合征血清抗體監測及分析

管遠紅 王海燕 傅宏慶 王健程漢 曹斌 王濤

摘要：2011年7月至2013年6月間按照流行病學抽樣的方法對江蘇省某規模豬場進行PRRS血清監測。每月14日或15日分別采集空懷母豬、保育豬、育肥豬的血清樣品，共2089份，應用商品化IDEXX公司的ELISA試劑盒對PRRS抗體進行血清學監測。結果表明，無論是空懷母豬、育肥豬還是保育豬，抗體陽性率均較高，其中空懷母豬比保育豬和育肥豬的抗體水平更高。血清學監測結果表明，該豬場免疫程序合理，疫苗免疫效果好，免疫后抗體水平較高，且補免及時。

關鍵詞：豬繁殖與呼吸綜合征；血清學調查；抗體檢測；ELISA

中圖分類號：S852.5文獻標志碼：A 文章編號：1002-1302（2014）11-0237-02

豬繁殖與呼吸綜合征（porcinereproductiveandrespiratorysyndrome，PRRS）主要引起懷孕母豬后期流產、產死胎和木乃伊胎，仔豬呼吸道癥狀和斷奶前死亡率升高等。該病最早于1987年在美國被發現，隨后迅速蔓延全球各養豬業發達的國家和地區（北美洲，1987年；歐洲，1990年；亞洲，1991年）。該病毒于1991年由荷蘭Lelystad中央獸醫研究所在豬肺泡巨噬細胞中首次分離得到，并命名為Lelystad病毒（PRRSV歐洲型代表株），1992年美國研究人員在CL2621細胞上也分離到PRRSV（美洲型代表株VR2332）。我國于1996年由郭寶清首次分離報道該病毒，并證明為美洲型PRRSV感染所致[1-2]。為明確使用PRRS疫苗的種豬場血清抗體消除規律，以便更好地免疫控制PRRS的感染，本試驗用商品化的ELISA試劑盒對江蘇某規模豬場不同日齡豬群進行了PRRS疫苗免疫后的血清學監測，現將結果報道如下。

1材料與方法

1.1材料

被檢血清樣品采自江蘇省某自繁自養規模豬場不同生長階段的免疫豬群；豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體ELISA檢測試劑盒購自IDEXX公司（lot：40959-W531）；其他試劑均為國產分析純試劑。

1.2確定樣本采集數量

收集該規模豬場的資料，尤其是不同生長期豬群體的大小和群體的變動情況。為準確了解豬群中PRRS抗體水平，根據統計學、流行病學確定試驗樣本抽樣數為30份，在抽樣的過程中考慮實際操作的可行性，對部分樣本量進行了調整。

1.3免疫程序

商品豬在4周齡時注射高致病性豬藍耳弱毒苗1頭份，母豬每年免疫3次。

1.4血清的分離

前腔靜脈無菌采集豬血2mL，分離血清-70℃保存。

1.5血清中PRRS特異性抗體的檢測

使用IDEXX公司ELISA檢測試劑盒測定PRRS抗體水平，具體操作按照說明書進行，測定650nm處吸光度D650nm。

結果統計和判斷：陽性對照平均值減去陰性對照平均值≥0.015，且陰性對照平均值<0.015，試驗數據有效。陰陽性判斷：計算樣本D值與陽性對照平均值之比（S/P），S/P≥0.4判為陽性，S/P<0.4判為陰性。

2結果與分析

2.1樣本數量的確定

按照統計學的方法計算出的樣本數進行采集，共采集血樣2089份（表1），制備血清，-70℃保存備用。

2.2樣品檢測

使用IDEXX公司ELISA檢測試劑盒對2089份不同時期、不同階段豬群中血清樣品的PRRS抗體水平進行測定，結果（圖1、圖2、圖3）發現，總的陽性率很高，平均達90%以上。保育豬的PRRS抗體陽性率在85.7%～100%之間，育肥豬的PRRS抗體陽性率在76.7%～96.4%之間、空懷母豬的PRRS抗體陽性率96.3%～100%。其中，育肥豬PRRS抗體陽性率相對較低，且整齊度也較差；空懷母豬的PRRS抗體陽性率較高，陽性值也較高，整齊度好（數據未顯示）。

3小結和討論

自從PRRS出現以來，國內外建立了許多PRRS抗體檢測方法和檢測試劑盒[3-8]，并對其進行了評價，其中IDEXX公司生產的PRRS抗體檢測試劑盒應用最廣泛，因此筆者選

擇了可信度相對較高的IDEXX公司生產的試劑盒。大量的研究結果表明，PRRS自傳入我國后在國內的蔓延范圍非常廣泛，包括國內的土種豬感染率都很高[9-12]。在我國自繁自養的種豬群中類似調查還比較少，也沒有連續的監測。

本研究共采集了江蘇省某規模豬場不同類型的豬血清2089份，應用ELISA法檢測PRRS抗體，結果發現抗體陽性率很高，在90%以上，不同種類豬群之間沒有明顯差異，不同時間差異也不明顯，偶爾出現抗體水平稍低的月份。其中空懷母豬的抗體水平比保育豬和育肥豬更高。結果表明，該豬場免疫程序合理，免疫后抗體水平較高，且補免及時。

在采樣過程中，樣本數量雖然可以通過統計學、流行病學方法，按照一定的置信度和群體大小來確定，然而在實際操作過程中非常困難，一些不可預測因素影響，如動物在生產環節中的不同階段、采樣隨機性和可實現性、動物捕捉的難度等都會有一定的影響。例如，本試驗最初設計對種公豬進行血清采樣，但是由于種公豬的種用特征、性情暴躁、獠牙對操作者的危險性等評價，最終決定放棄，而僅對部分精液進行了采集和檢測（數據未發表）。流行病學調查在實際操作中會有很多因素影響采樣量和置信度，應予以校正或者評價。

在養豬生產實踐中，PRRS疫苗免疫后的效果評價非常重要，以此作為參考進行免疫程序的制定和修訂，能更好地控制PRRS的感染。但是，由于IDEXX公司的商品化試劑盒成本非常高，很多養殖戶和養殖企業無法負擔高昂的檢測和監測成本，因此加強國產試劑盒的研發和應用勢在必行。

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