不同煎煮時間大黃水提取液對幼年大鼠子宮Bcl-2和Bax表達的影響

楊 宵，張樹峰，萬慧杰，趙盼盼，佟繼銘

（河北省中藥研究與開發重點實驗室/承德醫學院中藥研究所，河北承德 067000）

(基礎醫學欄目編輯:陳志宏)

大黃為常用中藥，主要活性成分是蒽醌類化合物，有瀉下攻積、利濕退黃等多種功效[1-2]。大黃臨床應用廣泛，能用于減脂減肥、排毒養顏，但國內外有報道稱長期服用大黃對肝臟、腎臟以及生殖系統均可造成不同程度的毒性[3]。本研究通過觀察幼年雌性大鼠子宮凋亡相關因子Bax和Bcl-2的表達情況，探討長期使用大黃對子宮細胞凋亡的影響及與煎煮時間的關系，以期為大黃的臨床安全用藥提供客觀依據。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物:雌性4周齡SD大鼠，體重60-70g，許可證號:SCXK(京)2009-0004，購自北京華阜康生物科技股份有限公司。

1.1.2 藥材與試劑:大黃(批號:20090902），安國市長安中藥材有限公司;兔抗Bcl-2多克隆抗體(批號:YE1116W)、兔抗Bax多克隆抗體(批號:990197W），北京博奧森生物科技有限公司;免疫組化試劑盒(批號:20120813），北京四正柏生物科技有限公司。

1.2 大黃水煎劑的制備 大黃藥材粉碎后，10倍水浸泡2h，煎煮兩次，每次煎煮10min/30min，合并煎煮液、過濾，40℃減壓濃縮至含生藥量0.4g/ml備用。

1.3 大鼠分組及給藥 70只雌性4周齡SD大鼠隨機分組，每組10只:空白對照(NC)組，水煎(RDA）10min 3個劑量組(0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg）和RDA 30min 3 個 劑 量組(0.5g/kg、1.0g/kg、2.0g/kg）。RDA各組大鼠連續灌胃給予相應劑量不同煎煮時間的大黃30d，NC組大鼠灌胃給予等體積的蒸餾水。

1.4 大鼠子宮Bcl-2和Bax表達的檢測 大鼠末次給藥后禁食不禁水，24h后麻醉處死，取子宮，10%甲醛固定后常規石蠟包埋，5μm厚連續切片。采用SP免疫組化法檢測大鼠子宮Bcl-2和Bax的表達情況，一抗1:100稀釋，用PBS代替一抗作為陰性對照，DAB顯色，蘇木素復染細胞核。……