不同炮制品瑞香狼毒藥材急性毒性試驗研究

胡 爽，劉 峰，陳美言

(1.沈陽工學院生命工程學院，遼寧撫順 113122；2.遼寧格林生物藥業集團有限公司，遼寧沈陽 110000 ；3.中國醫科大學基礎醫學院，遼寧沈陽 110000 )

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不同炮制品瑞香狼毒藥材急性毒性試驗研究

胡 爽1，劉 峰2，陳美言3

(1.沈陽工學院生命工程學院，遼寧撫順 113122；2.遼寧格林生物藥業集團有限公司，遼寧沈陽 110000 ；3.中國醫科大學基礎醫學院，遼寧沈陽 110000 )

[目的]通過對瑞香狼毒藥材急性毒性試驗的研究，對瑞香狼毒生品、醋制品和姜礬制品的急性毒性進行比較，為瑞香狼毒炮制工藝的規范化和臨床用藥安全提供試驗依據。[方法]按照經典急性毒性試驗方法，各組試驗連續觀察10 d，計算各組動物死亡數，采用Bliss法計算小鼠的LD50及其95%的可信限。[結果]瑞香狼毒生品LD50=547.56 mg/kg，其95%的可信限為476.86～625.58 mg/kg；醋制品LD50=689.23 mg/kg，其95%的可信限為546.96～817.22 mg/kg；姜礬制品LD50=976.89 mg/kg，其95%的可信限為826.95～1 134.50 mg/kg。[結論]瑞香狼毒生品經炮制后毒性有所降低，毒性由小到大的排列順序為姜礬制品<醋制品<生品。

瑞香狼毒；炮制品；急性毒性試驗

瑞香狼毒其主要的活性成分有黃酮類、二萜類、香豆素類以及木脂素類化合物[1]。文獻資料報道瑞香狼毒中黃酮類和二萜原酸酯類具有較強的體內和體外抗腫瘤作用，同時也是瑞香狼毒的主要有毒成分[2]。所以，采用適當的炮制方法可以避免有效成分的損失，降低毒性。筆者通過對瑞香狼毒藥材急性毒性試驗的研究，計算急性毒性參數，對生品、醋制品和姜礬制品的毒性進行比較，為瑞香狼毒炮制工藝的規范化和臨床用藥安全提供試驗依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物清潔級昆明種小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，由大連醫科大學實驗動物中心提供，使用許可證號SCXK(遼)2013-0002。

1.2 試驗藥品瑞香狼毒藥材購自于內蒙古，經遼寧中醫藥大學王冰教授鑒定為正品藥材。瑞香狼毒生品、醋制品和姜礬制品的樣品液均自制。

1.3 樣品液的制備精密稱取瑞香狼毒生品、醋制品和姜礬制品的粉末各(過60目篩)50 g，分別加入95%乙醇500 ml，加熱回流1 h，過濾，濾液濃縮，蒸干，得干膏，用30%的1，2-丙二醇為溶劑，超聲溶解備用。

1.4 主要儀器與設備電子分析天平(D432810821)；腹腔注射器等。

1.5 劑量與分組通過預試驗所得到的全死劑量和全不死劑量，設定給藥劑量，組距=0.8。同時設立溶媒對照組，即30%的1，2-丙二醇組，以觀察溶劑是否對小鼠產生影響。給藥劑量分組情況如表1所示。

表1 不同炮制品瑞香狼毒樣品液經腹腔注射給藥劑量分組情況

1.6 急性毒性測定生品組、醋制品組和姜礬制品組中清潔級小鼠各50只，體重18～22 g，雌雄各半，按體重隨機分為5組，每組10只。試驗前禁食(不禁水)12 h，采用腹腔注射法，注射劑量0.2 ml/10g。各組連續觀察10 d，計算各組動物死亡數，采用Bliss法計算小鼠的LD50及其95%的可信限。

2 結果與分析

2.1 瑞香狼毒生品組急性毒性試驗由表2可見，按瑞香狼毒生品組劑量等級1組給藥后，小鼠明顯出現活動困難、呼吸急促，死亡時間短暫，最短時間約3 min，其余小鼠30 min內全部死亡；劑量等級5組給藥，小鼠死亡率明顯下降，僅有1只小鼠死亡；其他等級給藥，小鼠明顯活動困難，呼吸急促、步態不穩。死亡率按照用藥劑量的降低有所升高。給藥24 h后，未亡小鼠飲食飲水逐漸恢復正常，存活小鼠產生的毒性反應隨時間慢慢恢復。空白對照組和溶媒對照組未見有小鼠異常反應和死亡。

表2 瑞香狼毒生品樣品液經腹腔注射給藥后小鼠急性毒性試驗結果

劑量∥mg/kg動物數∥只死亡動物數∥只死亡率∥%900101010072010880576105504611033036910110溶媒對照組1000空白對照組1000

2.2 瑞香狼毒醋制品組急性毒性試驗表3顯示，按瑞香狼毒醋制品組劑量等級1組給藥后，小鼠同樣出現活動困難、呼吸急促，但死亡時間延長，在12 h內陸續死亡，僅有1只小鼠存活；劑量等級5組給藥，小鼠死亡率下降，僅有2只小鼠死亡；其他等級給藥，小鼠肌肉痙攣明顯，靜伏少動，死亡時間延長至48 h。空白對照組和溶媒對照組未見有小鼠異常反應和死亡。

2.3 瑞香狼毒姜礬制品組急性毒性試驗按瑞香狼毒姜礬制品組劑量等級1組給藥后，小鼠死亡時間延長至48 h內陸續死亡，1只小鼠存活；劑量等級5組給藥，小鼠死亡率下降，僅有1只小鼠死亡；其他等級給藥，死亡時間延長至60 h。

空白對照組和溶媒對照組未見有小鼠異常反應和死亡(表4)。

表3 瑞香狼毒醋制樣品液經腹腔注射給藥后小鼠急性毒性試驗結果

劑量∥mg/kg動物數∥只死亡動物數∥只死亡率∥%12001099096010880768106606141044049210220溶媒對照組1000空白對照組1000

表4 瑞香狼毒姜礬制品樣品液經腹腔注射給藥后小鼠急性毒性試驗結果

劑量∥mg/kg動物數∥只死亡動物數∥只死亡率∥%1600109901280108801024106608191033065510110溶媒對照組1000空白對照組1000

2.4 LD50及其可信限由表5可知，生品LD50=547.56 mg/kg，其95%的可信限為476.86～625.58 mg/kg；醋制品LD50=689.23 mg/kg，其95%的可信限為546.96～817.22mg/kg；姜礬制品LD50=976.89 mg/kg，其95%的可信限為826.95～1 134.50 mg/kg。

表5 瑞香狼毒不同炮制品急性毒性試驗LD50的測定結果

3 小結與討論

試驗結果表明瑞香狼毒經炮制后毒性有所降低，毒性由小到大的排列順序為姜礬制品<醋制品<生品，說明瑞香狼毒經姜礬制后毒性降低的程度優于醋制，確實達到了降低毒性，提高用藥安全性的作用。

現今文獻報道中，對瑞香狼毒生品的藥效藥理、毒性試驗報道的較多，而其醋制品和姜礬制品方面的文獻報道較少。該試驗將其生品和炮制品在急性毒性方面的不同進行研究，通過三者的LD50及LD50的可信限，比較三者毒性強弱順序，對進一步了解炮制作用、闡明炮制機理具有重要意義。

[1] 王敏.瑞香狼毒總黃酮提取物的抗腫瘤作用[J].中國中藥雜志，2005，30(8)：603-606.

[2] 湯亞杰，徐小玲，李冬生，等.瑞香狼毒化學成分與抗腫瘤作用研究進展[J].中成藥，2008，30(7)：21-23.

胡爽(1985-)，女，遼寧錦州人，講師，碩士，從事中藥制劑分析方面研究。

2015-02-12

S 567

A

0517-6611(2015)09-072-01