血清VEGF、OPN 濃度與進展期胃癌術后復發關系的臨床研究*

尹小平，黎蔚浩，朱棟良，王代宏，王 偉，王芳元

(咸寧市中心醫院肝膽胰胃腸外科，湖北 咸寧 437100)

胃癌是我國最常見的消化道惡性腫瘤，臨床所見多為進展期，手術后復發率高。盡管術后輔助化療有了較大進展，但進展期胃癌術后2 年內復發率仍超過50%［1］，5 年生存率僅為30%～40%［2］。因此，進展期胃癌術后復發是臨床面臨的難題，如何盡早診斷復發一直是臨床研究的熱點。本研究主要通過動態監測進展期胃癌患者血清VEGF、OPN 濃度，來研究其作為進展期胃癌術后復發診斷的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集2010 年3 月至2011 年3 月在我院就診的進展期胃癌患者40例。其中男22例，女18例，年齡30～81 歲，平均56.3 歲。患者術前均胃鏡活檢確診、術中行根治性手術(D2)、術后經病理分期。所有患者在術后2 周開始接受常規化療。受檢者均排除其他惡性腫瘤及嚴重心血管、骨骼系統疾病，術前均未接受過放化療。術后復發患者均經胃鏡、CT、磁共振或PET/CT 確定證實。

1.2 標本采集 術前3d、術后1 月及以后每3 月抽取5ml 清晨空腹靜脈血，所取標本注入無抗凝管，離心(2000rpm，10min)，吸取血清100μl 體積分裝，-80℃冷凍備用，同期檢測CEA、CA199。

1.3 檢測方法及試劑 VEGF 采用酶聯免疫吸附測定(ELISA)方法檢測，試劑盒由深圳晶美生物有限公司提供，最低敏感濃度為46.9pg/ml，變異系數小于5.0%。OPN 應用酶聯免疫吸附測定(ELISA)檢測，鼠抗人OPN 單抗(100μl，1mg/ml，CHEMICON 公 司)，兔抗人OPN多抗(100μl，CHEMICON 公司)，OPN 標準品1mg(CHEMICON公司)，生物素化羊抗兔IgG(H+L)(1.5mg/100μl，北京中山生物技術有限公司)，親和素-辣根過氧化酶復合物(Avidin HRP)(200μl，華美公司)。所有操作嚴格按照說明書檢測。CEA、CA199 由本醫院檢驗室常規檢查。

1.4 標準 以健康體檢組(本課題前期研究成果VEGF(69.8 ±18.1)pg/ml，OPN(20.3 ±6.2)ng/ml)，VEGF、OPNX ± 2s 作為上下警戒值，血清VEGF、OPN的上界水平分別為106.0pg/ml、32.7ng/ml。胃癌分期采用1988 年國際抗癌聯盟的PTNM 分期，P 為術后病理證實，T 指腫瘤本身侵潤程度，N 指區域淋巴結轉移，M 指遠處轉移。

1.5 統計學方法 使用SPSS 13.0 軟件分析所有數據。計數資料采用卡方檢驗或Fisher 確切檢驗法，計量資料用t 檢驗，兩變量之間的關系采用Pearson 相關分析。P ＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 手術前后患者血清VEGF、OPN 水平比較術前患者血清VEGF、OPN 濃度分別為(172.3 ±45.4)pg/ml、(50.4 ±10.3)ng/ml，陽性率分別為67.5%、77.5%，術后1 月其濃度分別為(75.8 ±21.7)pg/ml、(24.8 ±9.9)ng/ml，陽性率分別為20%、17.5%，術后患者血清VEGF、OPN 濃度及陽性率明顯下降，差異有統計學意義(P ＜0.05)。同時術前及術后VEGF、OPN 陽性率分別與CEA、A199 相比明顯較高，其差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表1。

表1 手術前后VEGF、OPN 對比()

表1 手術前后VEGF、OPN 對比()

與術前相比，* P ＜0.05

2.2 血清VEGF、OPN 水平與術后復發的關系9例術后復發患者與未復發患者術前及術后1 月血清VEGF、OPN 濃度、陽性率對比其差異有統計學意義(P ＜0.01);復發患者經其他輔助檢查確診復發時其血清VEGF、OPN 濃度及陽性率與術后1 月對比，其差異有統計學意義(P ＜0.01)。見表2。

表2 血清OPN、VEGF 水平與術后復發關系()

表2 血清OPN、VEGF 水平與術后復發關系()

與術后未復發患者比較，* P ＜0.01;與術后1 月比較，#P ＜0.01

2.3 復發患者血清OPN、VEGF 與CEA、CA199比較 復發患者術前、術后1 月及影像學確診復發時，OPN、VEGF 陽性率分別單獨與CEA、CA199對比，OPN、VEGF 陽性率高于CEA、CA199，其差異有統計學意義(P ＜0.05);OPN 與VEGF 聯合檢測陽性率亦高于CEA 與CA199 的聯合，且差異有統計學意義(P ＜0.05)。見表3。

表3 復發患者血清OPN、VEGF 與CEA、CA199 比較［n=9，n(%)］

2.4 復發患者血清VEGF、OPN 升高時間與其他輔助檢查確診時間比較 復發患者血清VEGF、OPN升高表現陽性的平均時間分別為(155.4 ±47.4)d、(163.9±45.9)d，血清CEA、CA199 升高表現陽性的平均時間分別為(190.2 ±51.6)d、(200.0 ±58.4)d，經胃鏡或影像學檢查發現復發的平均時間為(228.2±61.3)d，三者相比VEGF、OPN 表現陽性的平均時間較短，其差異有統計學意義(P ＜0.05)。

3 討論

研究表明，腫瘤轉移及復發與腫瘤微血管形成密切相關，腫瘤細胞可生成多種促血管生成因子以誘導血管生成，其中作用最為突出的是血管內皮生長因子［3］。Maehara 等［4］報道VEGF 在胃癌中呈高表達，其血清濃度與腫瘤的復發和轉移及預后密切相關。骨橋蛋白(OPN)是一種分泌型鈣結合磷酸化糖蛋白，胃黏膜及粘液細胞中的粘蛋白顆粒和酶原顆粒可以分泌少量OPN，在機體中以游離狀態和結合狀態存在［5］。有研究提示OPN 促進細胞增殖、移行的能力，重塑細胞外基質，在降低細胞粘附中發揮重要作用，并與許多血管因子相互作用，從而促進腫瘤的侵襲、轉移及復發［6］。

本研究發現胃癌患者根治性手術后其血清VEGF、OPN 濃度及陽性率明顯下降，與術前相比差異有統計學意義(P ＜0.05)，而術后9例轉移或復發患者血清VEGF、OPN 濃度及陽性率再次升高，與術后1 月對比差異有明顯統計學意義(P ＜0.01)，說明胃癌患者血清VEGF、OPN 主要來源于腫瘤本身，這與國外研究相同［7，8］。本組數據40例患者中有9例術后1 年內發生轉移或復發，經對比研究發現，術后復發患者其術前血清VEGF、OPN 濃度及陽性率明顯高于術后未復發患者，其差異有統計學意義(P ＜0.01)，提示VEGF、OPN 在胃癌的轉移復發中發揮著重要的作用。且患者血清VEGF、OPN 濃度升高表現陽性的時間明顯早于胃鏡、CT 等影像學檢查，其差異有統計學意義(P ＜0.05)。目前消化道腫瘤最常用的標記物檢測為CEA、CA199，其單獨檢測的敏感性為30.0%～38.9%，聯合檢測的陽性率為53.6%［9，10］。本研究發現VEGF、OPN 其單獨及聯合檢測術前(本課題前期研究結果)及術后復發陽性率高于CEA、CA199 及兩者的聯合，其表現陽性的時間亦早于CEA、CA199，其差異均有統計學意義(P ＜0.05)。

綜上所述，胃癌患者血清VEGF、OPN 主要由腫瘤組織分泌產生，其濃度的高低與患者預后直接相關，術后監測其血清濃度可以評估根治性手術的徹底性，也可更早預測和發現腫瘤的轉移與復發。

［1］顧香，李明.胃腸道腫瘤再手術［J］.臨床外科雜志，2004，24(7):392

［2］趙成功，趙久武，王仕琛.胃癌術后局部復發原因分析及對策［J］.中國實用外科志，2009，29(2):154

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［4］Maehara Y，Kabashima A，Koga T，et al.Vascular invasion and potential for tumor angiogenesis and metastasizing gastric carcinoma［J］.Surgery，2000，128(3):408

［5］Wai PY，Kuo PC.The Role of osteopontin in tumor metastasis［J］.J Surg Res，2004，121(2):228

［6］Rittling SR，Chambers AF.Role of osteopontin in tumour progression［J］.Br J Cancer，2004，90(10):1877

［7］Ohta M，Konno H，Tanaka T，et al.The significance ofcirculating vagcalar endothelial growth factor(VEGF)protein in gastric cancer［J］.Cancer Lett，2003，192(2):215

［8］Ue T，Yokozaki H，Kitadai Y，et al.Co-expression of osteopontin and CD44v9 in gastric cancer［J］.Int J Cancer，1998，79(2):127

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［10］吳和順，李楊.進展期胃癌手術前后血清CEA、CA199水平變化臨床價值的探討［J］.中華綜合臨床醫學，2004，6(2):10