聯(lián)合檢測(cè)腫瘤抗原199、腫瘤抗原242及D-二聚體對(duì)胰腺癌早期診斷的意義

金鑫遼寧省本溪市中心醫(yī)：檢驗(yàn)科，遼寧本溪117000

聯(lián)合檢測(cè)腫瘤抗原199、腫瘤抗原242及D-二聚體對(duì)胰腺癌早期診斷的意義

金鑫
遼寧省本溪市中心醫(yī)：檢驗(yàn)科，遼寧本溪117000

目的探討腫瘤抗原199（CA199）、腫瘤抗原242（CA242）、D-二聚體聯(lián)合檢測(cè)在胰腺癌診斷中的臨床意義。方法選取本溪市中心醫(yī)：2009年1月～2014年12月收治的胰腺癌患者58例和2014年2～6月于體檢中心體檢健康成人60例分別作為胰腺癌組和對(duì)照組，兩組分別采用電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行血清CA199、CA242檢測(cè)，免疫比濁法進(jìn)行血漿D-二聚體檢測(cè)，并比較兩組試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果胰腺癌組血清CA199［（229.5±121.2）kU/L］、CA242［（60.2±23.9）kU/L］、血漿D-二聚體［（2.95±1.42）mg/L］水平，與對(duì)照組血清CA199［（19.2±9.2）kU/L］、CA242［（10.9±6.5）kU/L］、血漿D-二聚體［（0.45±0.22）mg/L］比較，檢測(cè)值均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=3.452、3.024、3.592；P=0.002、0.002、0.001）。三項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)（CA199+CA242+D-二聚體）的敏感度和特異度分別為95.4%和96.9%，高于任意兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)及單一項(xiàng)檢測(cè)的敏感度和特異度，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論腫瘤抗原CA199、CA242及D-二聚體聯(lián)合檢測(cè)可提高胰腺癌診斷的敏感度和特異度，為臨床診斷提供更為早期和準(zhǔn)確的依據(jù)。

胰腺癌；糖類抗原；腫瘤相關(guān)；D-二聚體

胰腺癌發(fā)病率近年來呈逐步上升趨勢(shì)，是目前癌癥預(yù)后最差的惡性腫瘤之一。胰腺癌早期診斷困難，發(fā)病時(shí)多已到疾病晚期，5年總生存率不到5%［1］。胰腺癌在我國惡性腫瘤發(fā)病率中排列為第7位，病死率在第6位，且逐年升高［2-3］。在世界普通癌癥中，男性患胰腺癌居世界第4位，女性居第5位，而且預(yù)后效果差［4］。胰腺癌高發(fā)病于40歲以上人群，發(fā)病率男性高于女性，男女之比為1.5～2∶1，男性患者遠(yuǎn)較絕經(jīng)前的婦女多見，絕經(jīng)后婦女的發(fā)病率與男性相仿。胰腺癌發(fā)病原因尚不明確，可能與糖尿病、胰腺炎、吸煙、飲食和致癌物質(zhì)有關(guān)。胰腺癌首選的治療仍是手術(shù)切除，但多年來其死亡率和生存率一直沒有明顯改觀，手術(shù)治療切除率只有20%左右［5］，1年生存率仍很低（小于20%）。胰腺癌如若能早期診斷并行胰十二指胰腺切除術(shù)，術(shù)后5年的患者生存率可提高至46%［6］。因此，在臨床工作中，提高對(duì)胰腺癌的警惕性，監(jiān)測(cè)高危人群，是提高胰腺癌早期診斷率的前提，做到早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷對(duì)胰腺癌的治療與控制具有重要臨床意義。由于目前用于胰腺癌臨床檢測(cè)主要手段為腫瘤抗原和分子生物學(xué)檢測(cè)，檢測(cè)敏感度和特異性都還有待進(jìn)一步提高，對(duì)胰腺癌的聯(lián)合檢測(cè)以提高其檢測(cè)敏感度和特異性就顯得尤為重要。本研究旨在探討腫瘤抗原199（carbohydrate antigen199，CA199）、腫瘤抗原242（carbohydrate antigen 242，CA242）、D-二聚體（D-dimer，D-D）三者聯(lián)合檢測(cè)在胰腺癌早期診斷中的臨床意義，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)照組60例，為遼寧省本溪市中心醫(yī)：（以下簡稱“我：”）體檢中心2014年2～6月的健康體檢者，其中，男30例，女30例，年齡45～79歲，平均（62.0±17.0）歲。胰腺癌組58例，為我：2009年1月～2014年12月的住：胰腺癌患者，男32例，女26例，年齡44～88歲，平均（51.4±27.2）歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：胰腺癌患者均為經(jīng)過病理診斷或細(xì)胞學(xué)檢查確診，其中，胰頭癌46例，全胰癌1例，胰體癌9例，胰尾癌2例，胰體癌9例，全胰癌1例。本研究經(jīng)我：倫理委員會(huì)通過，受檢者本人或者家屬同意參與本研究療并且簽屬知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有深靜脈血栓、感染、高血壓、糖尿病、肝炎、冠心病、深靜脈血栓栓塞癥及腦梗死等疾病；②近期服用過糖皮質(zhì)激素等；③阻塞性黃疸性疾病；④6個(gè)月內(nèi)曾接受過抗凝治療。胰腺癌組與對(duì)照組性別、年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有受檢者均于清晨7∶00空腹抽取靜脈血5 mL，標(biāo)本經(jīng)靜置自然凝固后，使用四川瑞麗公司離心機(jī)經(jīng)相對(duì)離心力3500 r/min離心15 min后分離血清和血漿。血清用于腫瘤抗原CA199、CA242檢測(cè)分析；血漿用于D-D檢測(cè)分析。不能及時(shí)檢測(cè)標(biāo)本采用低溫（-70℃）冰箱冷凍保存。標(biāo)本采集制備和保存嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程（第3版）》中規(guī)定的操作流程完成。腫瘤抗原CA199、CA242檢測(cè)所用儀器為瑞士Roche公司Elecsys 601電化學(xué)發(fā)光分析儀，以電化學(xué)發(fā)光法進(jìn)行檢測(cè)，其原理是檢測(cè)在電極表面發(fā)生的特異性化學(xué)反應(yīng)引起的電化學(xué)變化，從而計(jì)算出參與反應(yīng)物質(zhì)的濃度。腫瘤抗原CA199、CA242檢測(cè)采用電化學(xué)分析中的雙抗體夾心法，反應(yīng)中的生物素標(biāo)記的抗體和標(biāo)本中的抗原形成抗原抗體復(fù)合物，與三聯(lián)喲啶釕標(biāo)記的第二抗體結(jié)合，形成雙抗夾心復(fù)合物，再與親合素化的磁性微粒體結(jié)合，在堿性的條件下與三丙胺反應(yīng)，磁性微粒由于被電極板吸引而留存在電極上，在陽性電壓電場(chǎng)的作用下，復(fù)合物上的三聯(lián)喲啶釕與三丙胺發(fā)生氧化還原反應(yīng)，三聯(lián)喲啶釕與三丙胺這兩種電化學(xué)活性物質(zhì)可同時(shí)發(fā)生氧化反應(yīng)失去電子，并且在由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)的過程中釋放出光子，在電極表面此過程反復(fù)進(jìn)行，從而放大檢測(cè)的光信號(hào)，計(jì)算出標(biāo)本中腫瘤抗原CA199、CA242的濃度。所有操作均按瑞士Roche公司Elecsys 601電化學(xué)發(fā)光分析儀所帶說明書嚴(yán)格執(zhí)行，室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)控符合要求。實(shí)驗(yàn)選取的標(biāo)準(zhǔn)液和質(zhì)控液均使用瑞士Roche公司產(chǎn)品。D-D檢測(cè)所用儀器為美國貝克曼ACL-TOP全自動(dòng)血凝分析儀，以免疫比濁法進(jìn)行檢測(cè)。基于散射比濁法的原理，利用抗原抗體復(fù)合物（免疫沉淀反應(yīng)）對(duì)光散射的特性進(jìn)行檢測(cè)，散射光的強(qiáng)度和形成復(fù)合物的量成正比，并且通過光電技術(shù)檢測(cè)散射光信號(hào)，并對(duì)散射光信號(hào)變化進(jìn)行計(jì)算，從而計(jì)算出反應(yīng)體系中D-D含量。所有操作均按美國貝克曼ACL-TOP全自動(dòng)血凝分析儀所帶說明書嚴(yán)格執(zhí)行，室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)控符合要求。實(shí)驗(yàn)選取的標(biāo)準(zhǔn)液和質(zhì)控液均使用美國貝克曼公司產(chǎn)品。

1.3 結(jié)果判定

陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：CA199＞37 kU/L、CA242＞20 kU/L、D-D＞0.55 mg/L。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)三種檢測(cè)指標(biāo)CA199、CA242及D-D單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)的診斷價(jià)值采用敏感度、特異度表示。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組與胰腺癌組CA199、CA242及D-D水平比較

與對(duì)照組相比，胰腺癌組CAl99、CA242及D-D水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

2.2 CA199、CA242及D-D單項(xiàng)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)胰腺癌的敏感度和特異度

CA199、CA242及D-D聯(lián)合檢測(cè)胰腺癌的敏感度和特異度均高于任意兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)和單項(xiàng)檢測(cè)的結(jié)果，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這對(duì)胰腺癌早期診斷具有重要的臨床意義。見表2。

表1 對(duì)照組與胰腺癌組CA199、CA242及D-D水平比較（x±s）

表2 CA199、CA242、D-D單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)的敏感度和特異度（%）

3 討論

隨著腫瘤診斷技術(shù)的不斷進(jìn)步，胰腺癌診斷的篩查內(nèi)容亦有明顯進(jìn)展，為早期診斷胰腺癌提供了更大的幫助，但是各項(xiàng)檢測(cè)項(xiàng)目又有著各自的優(yōu)點(diǎn)與不足，同時(shí)不同腫瘤標(biāo)志物診斷價(jià)值有一定差異，臨床上使用頻率和應(yīng)用價(jià)值亦需進(jìn)一步研究，但將不同標(biāo)志物聯(lián)合診斷將大大提高診斷陽性率逐漸成為共識(shí)，對(duì)診斷胰腺癌有很大幫助［7］。臨床上檢測(cè)胰腺癌最為常用的為CA199，其次為CA242，本研究結(jié)合D-D檢測(cè)旨在針對(duì)腫瘤標(biāo)志物CA199、CA242在對(duì)胰腺癌診斷敏感度和特異度上的不足，以提高早期診斷胰腺癌的敏感度和特異度。

本研究檢測(cè)CA199、CA242、D-D水平和CA199、CA242及D-D單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)的敏感度和特異度兩項(xiàng)結(jié)果。其中，分析對(duì)照組和胰腺癌組CA199、CA242和D-D水平可知，胰腺癌組血清CA199、CA242和DD水平均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這表明上述指標(biāo)的異常升高可判斷初期胰腺癌或癌前病變的產(chǎn)生，提示血清腫瘤標(biāo)志物CA199、CA242和D-D水平與胰腺癌的產(chǎn)生和發(fā)展密切相關(guān)。

CA199是一種能與結(jié)腸癌細(xì)胞免疫小鼠所得單克隆抗體反應(yīng)的黏蛋白型的糖類蛋白抗體，是迄今胰腺癌診斷敏感性最高、臨床應(yīng)用最廣泛的腫瘤標(biāo)志物［8］，與胰腺癌分期呈明顯正相關(guān)，對(duì)胰腺癌的診斷、病情監(jiān)測(cè)有較大價(jià)值，但特異性不強(qiáng)［9］。CA199還可以監(jiān)測(cè)腫瘤復(fù)發(fā)，術(shù)前CA199水平對(duì)預(yù)后也有一定的價(jià)值［10］。但由于CA199是一種唾液酸Lewis-a血型抗原，其只在Le（a-b+）、Le（a+b-）分型中表達(dá)，Le（a-b-）占人群5%～10%，這就限制了CA199的廣泛應(yīng)用［11］。CA199診斷胰腺癌的敏感度是70%～90%，特異度是68%～91%，與本文研究相符。

CA242是由Lind等發(fā)現(xiàn)的一種唾液酸化的黏糖蛋白類消化道腫瘤相關(guān)抗原，與胰腺癌密切相關(guān)。有報(bào)道提示其與組織學(xué)類型及腫瘤部位和細(xì)胞分化程度無明顯相關(guān)性［12］。國外學(xué)者通過研究得出胰腺癌患者中75%的患者CA242水平有明顯升高，以CA242水平20 kU/L作為診斷標(biāo)準(zhǔn)，與本文研究所得CA242陽性率74.2%相近。國內(nèi)很多研究表明，以CA199、CA242等腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合診斷可明顯提高診斷的敏感度和特異度［13-14］，輔助臨床更早期診斷胰腺癌。

D-D是交聯(lián)纖維蛋白的降解產(chǎn)物，它是繼發(fā)性纖溶的特異性指標(biāo)，其增高可提示存在活動(dòng)性血栓栓塞或彌漫性血管內(nèi)凝血［15］，臨床上多用于肺栓塞和深靜脈栓塞癥等的診斷。近年來D-D與惡性腫瘤間的關(guān)聯(lián)越來與受到重視，有研究表明，在惡性腫瘤中的D-D含量多有升高，并且可以作為腫瘤預(yù)后的獨(dú)立預(yù)后指標(biāo)［16］，表明血漿D-D的水平與腫瘤細(xì)胞本身有關(guān)［17］。Sun等［18］研究發(fā)現(xiàn)，血漿D-D水平是不伴靜脈血栓栓塞的胰腺癌患者潛在的預(yù)后指標(biāo)，可作為胰腺癌輔助定性及預(yù)后判斷的指標(biāo)，但因其特異性較低，作為胰腺癌篩查指標(biāo)很少使用。本研究為提高胰腺癌的診斷特異度和敏感度，使用血漿D-D結(jié)合血清CA199、CA242聯(lián)合檢測(cè)，結(jié)果顯示，CA199、CA242及D-D聯(lián)合檢測(cè)胰腺癌的敏感度和特異度均高于任意兩項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)和單項(xiàng)檢測(cè)的結(jié)果，敏感度和特異度分別為95.4%和96.9%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），對(duì)胰腺癌早期診斷的敏感度和特異度有了很大提升。

胰腺癌作為“癌中之王”，分化差、預(yù)后差、病情多變、進(jìn)展較快，即使以規(guī)范化的治療手段，其治療效果仍不理想［19］，使得尋找胰腺癌的早期診斷方法成為當(dāng)今研究的一大熱點(diǎn)，從而提高胰腺癌手術(shù)切除率，提高總體治療效果，改善遠(yuǎn)期預(yù)后。聯(lián)合檢測(cè)成為提高胰腺癌診斷敏感度和特異度的重要選擇［20］，對(duì)腫瘤標(biāo)志物的選擇、凝血因子的應(yīng)用以及基因片段研究，為將來聯(lián)合檢測(cè)胰腺癌提供了更多的發(fā)展方向和選擇，為早期診斷胰腺癌提供更大的幫助。

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Diagnostic value of combined detection of tumor antigen 199,tumor antigen 242 and D-dimer levels in patients with pancreatic cancer

JIN Xin
Department of Clinical Laboratory,Benxi Center Hospital,Liaoning Province,Benxi117000,China

ObjectiveTo discuss the value of combined detection of tumor markers CA199,CA242 and D-dimer levels in diagnosis of patients with pancreatic cancer.Methods58 patients with pancreatic cancer(pancreatic cancer group) in Benxi Center Hospital from January 2009 to December 2014 and 60 healthy volunteers(control group)from February to June 2014 were selected.The serum levels of CA199 and CA242 were detected by electrochemiluminescence and the plasma level of D-dimer was detected by immunoturbidimetry.The detection results were compared.ResultsThe levels of CA199［(229.5±121.2)kU/L］,CA242［(60.2±23.9)kU/L］and D-dimer［(2.95±1.42)mg/L］in the pancreatic cancer group were significantly higher than those of control group［(19.2±9.2)kU/L,(10.9±6.5)kU/L,(0.45±0.22)mg/L;t= 3.452,3.024,3.592;P=0.002,0.002,0.001］.The sensitivity(95.4%)and specificity(96.9%)of CA199+CA242+D-dimer were the highest in those of any single items determination and in combination(P＜0.05).ConclusionWith combined determination of CA199,CA242 and D-dimer can enhance the diagnostic sensitivity and specificity of pancreatic cancer, which is clinically valuable for early diagnostic of pancreatic cancer.

Pancreatic cancer;Carbohydrate antigen;Tumor related;D-dimer

R735.04

A

1673-7210（2015）07（a）-0136-04

2015-03-23本文編輯：程銘）

遼寧省本溪市中心醫(yī)：科研項(xiàng)目（倫審［2015］3號(hào)）。