“瘀熱”型慢性前列腺炎大鼠模型的兩種造模方法比較研究

樊 千李 明周玉春薛建國

（1.南京中醫藥大學附屬醫院，江蘇南京210029；2.南京中醫藥大學，江蘇南京210023）

“瘀熱”型慢性前列腺炎大鼠模型的兩種造模方法比較研究

樊 千1李 明2周玉春2薛建國2

（1.南京中醫藥大學附屬醫院，江蘇南京210029；2.南京中醫藥大學，江蘇南京210023）

目的：探索和評價更符合中醫“瘀熱”病機和癥候特點的慢性前列腺炎大鼠模型的造模方法。方法：30只雄性SD大鼠按體重隨機分為角干組、內干組和模擬組，每組10只。角干組于大鼠前列腺背葉注射角叉菜膠，背部皮下注射干酵母混懸液；內干組于大鼠前列腺背葉注射內毒素，背部皮下注射干酵母混懸液；模擬組于同樣部位注射等量生理鹽水。造模后分別觀察各組大鼠體溫、血液流變學指標變化，第7日取材觀察大鼠前列腺組織病理學變化。結果：與模擬組比較，角干組和內干組在造模后均出現體溫和血液流變學指標的明顯升高（P＜0.05）。角干組與內干組之間體溫差異不具有統計學意義（P＞0.05），但角干組全血黏度明顯高于內干組升高（P＜0.05）。角干組大鼠前列腺組織表現為大量炎細胞浸潤伴慢性肉芽腫性炎癥；內干組見少量炎細胞浸潤，間質中散在成纖維細胞；模擬組大鼠前列腺組織中腺腔形態尚規則，未見炎細胞浸潤。結論：角叉菜膠聯合干酵母混懸液注射所制作的慢性前列腺炎大鼠模型更符合中醫“瘀熱”病機和臨床癥候特點，同時簡單、便于操作，可用于慢性前列腺炎基礎研究、瘀熱病機理論及臨床藥理學研究等。

慢性前列腺炎 瘀熱 動物疾病模型 SD大鼠 血液流變學 前列腺 病理學

慢性前列腺炎屬中醫學“精濁”范疇，其發病機制尚不清楚。國醫大師周仲瑛教授根據其多年臨證經驗提出“瘀熱”理論，認為瘀熱互結證不僅見于外感熱病，亦存在于多種疾病的發展過程中[1]。瘀熱病機在精濁的發病過程中亦起到了關鍵的作用，或外感邪熱入里，或內傷久病，致火熱毒邪夾痰、夾濕壅滯血分，搏血為瘀，導致下焦精室蓄血，局部經絡不暢，血脈瘀滯，瘀熱相搏，膠結難化，使病情纏綿難愈，病機演變亦變化多端[2]。因此，研究建立符合中醫“瘀熱”病機特點的慢性前列腺炎大鼠模型，對慢性前列腺炎的基礎研究、中醫瘀熱理論研究和臨床中藥篩選、遣方用藥均具有重要意義。本研究旨在通過對中醫瘀熱表征、血液流變學指標以及組織病理學方面的評價，對兩種造模方法進行比較，以探索更符合中醫“瘀熱”病機和臨床癥候特點的慢性前列腺炎大鼠模型的制作方法。

1 實驗材料

1.1 動物 雄性健康SD大鼠30只，體重180～220g，購于南京中醫藥大學 SPF級動物實驗室[SCXK（浙）2008-0033]，直腸溫度37.0～38.5℃。

1.2 試劑與儀器 角叉菜膠:規格100g，上海藍技科技有限公司，批號:680525。大腸桿菌內毒素:規格10mg（分裝），sigma，批號:L-2880。干酵母:安琪酵母股份有限公司。福爾馬林液:規格200mL，無錫市江原實業技貿總公司，批號:20130618。生理鹽水:規格500mL/4.5g，南京小營藥業集團有限公司，批號:2011090902。碘伏消毒液:規格500mL，上海利康消毒高科技有限公司，批號:310502a。電子天平:型號MP1002，上海精密儀器儀表有限公司。麥克大夫電子體溫計:北京天天聯眾科技有限公司（型號MT1671）。4-0可吸收縫線:美國強生公司（型號WW9918）。

2 實驗方法

2.1 分組與處理 雄性SD大鼠30只，適應性飼養1周后按體重隨機分為角干組、內干組和模擬組，每組10只。各組大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.3mL/100g）進行麻醉，待麻醉完全后，橡皮筋固定四肢，松緊適中，腹部備皮，碘伏消毒，沿大鼠腹中線（恥骨上方1cm處）逐層縱向切開約1.5cm，游離肌肉、腹膜，進入腹腔后，分離前列腺及周圍組織器官，充分暴露前列腺組織，1mL注射器于前列腺背葉進針。角干組注射角叉菜膠，劑量為5mg/100g；內干組注射大腸桿菌內毒素，劑量為5μg/100g；模擬組注射等體積生理鹽水。送復前列腺后逐層縫合腹腔，角干組、內干組大鼠背部皮下注射20%干酵母混懸液，劑量為1mL/100g，模擬組同樣部位注射等量生理鹽水。

2.2 瘀熱表征及實驗室檢測 造模成功后觀察各組大鼠飲水、攝食及活動情況，造模后1、3、7日上午9時使用電子體溫計測量大鼠肛溫；第7日大鼠腹尾靜脈采血3mL置于肝素抗凝管中，送南京中醫藥大學附屬醫院檢驗科檢測血液流變學各項指標（高切、中切、低切全血黏度值和紅細胞壓積、紅細胞聚集指數）。

2.3 組織病理學檢測 第7日取血后大鼠麻醉處死，取前列腺組織觀察大體情況，經10%甲醛固定，HE染色，100倍光鏡下觀察前列腺組織形態學變化，比較各組大鼠前列腺病變范圍、腺腔形態、淋巴細胞浸潤程度、間質增生情況。

2.4 統計學方法 所有數據采用SPSS17.0軟件進行統計分析，計量資料以（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用Student-Newman-Keuls檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 各組大鼠瘀熱表征比較 造模后角干組大鼠出現明顯的瘀熱表征，表現為舌色紅紫，尾部出現瘀斑，同時肛溫逐漸升高；內干組大鼠出現肛溫升高，但是瘀熱表征不明顯（僅有部分大鼠出現舌色紅紫，未見尾部明顯瘀斑）。模擬組大鼠觀測其舌色正常，尾部未見瘀斑出現，體溫未見明顯升高。與模擬組比較，角干組、內干組大鼠肛溫明顯升高（P＜0.05），但角干組與內干組組間比較肛溫差異不具有統計學意義（P＞0.05），見表1。

3.2 各組大鼠血液流變學指標變化情況 見表2。角干組、內干組大鼠全血黏度 （低切、中切、高切）、紅細胞壓積、紅細胞聚集指數均較模擬組顯著升高（P＜0.05）。角干組與內干組比較，全血黏度指標差異顯著（P＜0.05），紅細胞壓積和紅細胞聚集指數差異不具有統計學意義（P＞0.05）。

3.3 各組大鼠前列腺組織病理學比較 造模后第7日角干組大鼠前列腺組織內可見上皮及腺腔形態不規則，大量炎細胞浸潤，伴有慢性肉芽腫性炎癥出現。內干組大鼠前列腺組織內可見上皮細胞及腺腔形態較規則，間質亦可見少量成纖維細胞，有少量炎細胞浸潤。模擬組大鼠前列腺組織內見上皮細胞為立方或柱狀，雖然腺腔形態不一，但尚有規則，間質中可見少量成纖維細胞，未見炎細胞浸潤。見圖1。

4 討論

表1 各組大鼠造模后第1、3、7日肛溫比較

表2 各組大鼠造模后第7日血液流變學指標比較

圖1 各組大鼠前列腺組織病理圖片（HE，×100）

中醫認為精濁以腎虛為本，濕熱為標，瘀血為變。但臨床中精濁癥狀往往繁雜，病程遷延難愈，究其原因常為多種病理因素互相膠結導致，而瘀熱病機更符合精濁臨床致病過程和病機特點[2]。

目前構建中醫瘀熱癥候的動物模型方法較少，也缺乏公認的瘀熱癥候動物模型的判定標準，現有文獻中判定標準以動物模型表征及微循環實驗室檢查（血液流變學、凝血功能等）為主[3]。為了更好地模擬瘀熱病機在慢性前列腺炎致病過程中的特點并且探索符合中醫瘀熱臨床癥候的大鼠模型，本研究對角叉菜膠注射液聯合活性干酵母混懸液和大腸桿菌內毒素聯合活性干酵母混懸液這兩種造模方法進行了對比研究。目前制作中醫熱毒血瘀證模型采用較多的方法仍為細菌內毒素[4-5]，而角叉菜膠是為海藻中所提取的硫酸多糖類物質，用于組織炎癥和發熱模型的制備，單用角叉菜膠致“瘀”的作用相對較強，其制作的大鼠模型可以表現為舌質紫紅、尾部瘀斑[6]。活性酵母菌混懸液是制作炎癥反應介導的發熱模型的常用材料，其致“熱”作用明顯[7]。因此，從造模角度來看將角叉菜膠聯合活性干酵母混懸液作為致病因素更為符合中醫瘀熱病機理論特點和臨床癥候表現。

本研究從大鼠模型瘀熱表征、實驗室（血液流變學）指標和前列腺組織病理學三方面對兩種造模方法進行了探索比較。從瘀熱表征比較，內干組大鼠模型僅表現為體溫異常，部分出現舌質紅紫，未見明顯尾部瘀斑；角干組大鼠模型表現為舌質紅紫、尾部瘀斑，同時伴隨體溫升高等異常表現。從實驗室（血液流變學）指標比較，兩組大鼠模型均表現為血液黏稠度增高，但角干組升高更加明顯。從大鼠模型前列腺組織病理學比較，內干組大鼠模型前列腺僅有少量慢性炎細胞浸潤，而角干組前列腺腺體內出現大量炎細胞浸潤伴隨慢性肉芽組織增生的異常反應。

綜上，角叉菜膠聯合干酵母混懸液和大腸桿菌內毒素聯合干酵母混懸液兩種方法均可制作瘀熱型慢性前列腺炎大鼠模型，但相比而言角叉菜膠聯合干酵母混懸液所制作的大鼠模型更符合中醫“瘀熱”病機理論特點，瘀熱臨床癥候明顯，實驗室指標及組織病理學證據充足，同時該模型制作簡單、便于操作，可更好地用于慢性前列腺炎的基礎研究、中醫瘀熱理論和臨床有效中藥篩選等多方面的研究。但國內外對于瘀熱型慢性前列腺炎大鼠模型的相關研究仍較少，是否有更優化的造模方法還有待進一步的探索研究。在今后研究中我們將嘗試從炎癥信號通路及表觀遺傳學機制等方面著手，以本研究的大鼠模型為基礎，從分子生物學方向進一步探尋慢性前列腺炎的發病機制，嘗試從微觀分子機制闡述宏觀中醫瘀熱本質。

[1] 周仲瑛.論瘀熱.南京中醫藥大學學報，2006，22（5）：273

[2] 薛建國，樊千.從“瘀熱”論慢性盆腔疼痛綜合征的發病機制.江蘇中醫藥，2012，44（12）：6

[3] 杜正彩，鄧家剛，郝二偉.瘀熱互結證模型大鼠中醫表征指標量化研究.中華中醫藥雜志，2012，27（2）：345

[4] 楊進，陸平成.家兔“熱毒血瘀證”系列動物模型的試制.南京中醫藥大學學報，1995，11（2）：70

[5] 許立，蔣寶平，過偉峰，等.實驗性淤熱證大鼠模型的初步研究.時珍國醫國藥，2008，19（12）：2896

[6] 魏陵博，彭敏，戎冬梅，等.通心絡膠囊對角叉菜膠所致大鼠血栓形成的影響.中西醫結合心腦血管病雜志，2006，4（9）：785

[7] 陳秋紅，周小梅，多杰，等.青鵬膠囊解熱鎮痛及抗炎作用實驗研究.山東中醫雜志，2006，25（6）：407

R697.33

A

1672-397X（2015）03-0077-03

樊千（1985-），男，醫學碩士，住院中醫師，從事中醫外科學及男科學方向的科研、臨床及教學工作。superjust@126.com

2015-01-04

編輯：吳 寧

江蘇省中醫藥局科技項目立項計劃資助課題（LZ13017）