益氣化瘀方抗炎止血鎮痛作用的藥效學研究

曾 晶 李子奎 王 樂

（湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南長沙410007）

益氣化瘀方抗炎止血鎮痛作用的藥效學研究

曾 晶 李子奎 王 樂

（湖南中醫藥大學第一附屬醫院，湖南長沙410007）

目的：研究益氣化瘀方抗炎、止血、鎮痛作用。方法：通過二甲苯致小鼠耳腫脹模型、小鼠凝血與斷尾止血模型、小鼠熱板模型與醋酸致小鼠扭體模型，評價益氣化瘀方鎮痛、止血、抗炎的藥效學作用。結果：與空白組比較，益氣化瘀方各劑量均能明顯降低二甲苯致炎小鼠的耳腫脹度（P＜0.05），能明顯縮短小鼠凝血時間（P＜0.01）和出血時間（P＜0.01），明顯減少小鼠扭體次數（P＜0.01），顯著抑制小鼠出現的疼痛反應（P＜0.05）。益氣化瘀方抗炎作用與阿司匹林相似（P＞0.05）；益氣化瘀方中、高劑量止血作用與氨基己酸、三七粉相當（P＞0.05）；益氣化瘀方鎮痛作用和阿司匹林比較仍有顯著差異（P＜0.05）。結論：益氣化瘀方具有較好的抗炎、止血、鎮痛作用。

益氣化瘀方 耳郭腫脹度 凝血時間 出血時間 扭體次數 痛閾 小鼠

產后子宮內膜慢性炎癥可能是導致產后復舊不全的主要原因[2]。益氣化瘀方是第四批全國老中醫藥專家學術經驗繼承工作指導老師尤昭玲教授臨床治療子宮復舊不全的常用有效方。臨床研究顯示，益氣化瘀方對產后子宮復舊不全表現為產后腹痛、產后惡露不絕、產后身痛等療效顯著[3]。結合產后多虛多瘀的病機特點，本研究擬從抗炎、止血、鎮痛藥效作用三個方面，探討益氣化瘀方的作用效果，為益氣化瘀方的進一步開發利用提供理論依據，現將結果報道如下。

1 實驗材料

1.1 實驗動物 BALB/C清潔級小鼠，雌雄兼備，體重18～22g，由湖南斯萊克景達實驗動物有限公司提供。許可證號:SCXK（湘）2011-0003，飼養于SPF實驗室。

1.2 實驗藥物 益氣化瘀方（黨參8g，蒲黃5g，黃芪5g，馬鞭草5g，鹿銜草8g，茜草5g，狗脊5g，續斷5g，烏藥5g，甘草1g），臨床用量為52g/d，湖南中醫藥大學藥學院提供，制備成濃度為4.43g（生藥）/g的浸膏，批號20140514。實驗用藥大、中、小劑量組含原藥材量分別為 6.76g/kg、13.52g/kg、27.04g/kg，實驗當日用白開水配制。阿司匹林腸溶片，非甾體抗炎藥，可用于鎮痛解熱、抗炎，選其為鎮痛、抗炎試驗的陽性對照藥，臨床用量4g/d，湖南湘藥制藥有限公司生產，批號:20130923。氨基己酸，具有止血作用，選其為凝血試驗、斷尾止血試驗的陽性對照藥，臨床用量6g/d，湖南制藥廠生產，批號:000908-2。三七粉，具有止血、散瘀、定痛作用，選其為凝血試驗、斷尾止血試驗的中藥陽性對照藥，湖南省醫藥公司生產，批號:20130709。

1.3 主要試劑 己烯雌酚注射液，2mg/mL，上海第九制藥廠生產，批號:00089777；醋酸，500mL，廣東汕頭市西隴化工廠生產，批號:0701291；二甲苯，國藥集體化學試劑有限公司生產，批號:F20090218。

1.4 主要儀器 梅特勒托利多十萬分之一電子天平AG205；湘儀天平儀器廠TP100型動物天平；上海星鉆秒表有限公司機械秒表；安徽正華生物儀器ZH-YLS-6B智能熱板儀。

2 實驗方法

2.1 凝血實驗 采用毛細玻管法。取BALB/C清潔級小鼠72只，雌雄各半，依據體重編號，按性別、體重分層，再用隨機數字表法隨機分成6組，即空白組（等體積生理鹽水）、氨基己酸組（0.78g/kg）、三七粉組（1.04g/kg）和益氣化瘀方低、中、高劑量組。每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續給藥3d。最后一次給藥后2h用直徑1mm的玻璃毛細管內眥后靜脈叢取血，毛細玻管內血栓至少大于5cm。每間隔30s折斷一段毛細玻管，觀察有無血凝絲出現。計算從毛細玻管采血到出現血凝絲的時間（s），即為凝血時間，比較各組間的凝血時間。

2.2 斷尾止血實驗 采用小鼠斷尾法。取BALB/C清潔級小鼠72只，雌雄各半，依據體重編號，按性別、體重分層，再用隨機排列表法隨機分成6組，即空白組（等體積生理鹽水）、氨基己酸組（0.78g/kg）、三七粉組（1.04g/kg）和益氣化瘀方低、中、高劑量組。每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續給藥3d。最后一次給藥后30min，距小鼠尾尖0.5cm處橫斷尾部，自血液自動流出后計時，間隔15s用濾紙吸去血滴，直至血流自然停止，計算出血時間，并進行組間比較。

2.3 扭體鎮痛實驗 BALB/C清潔級小鼠60只，雌雄各半，依據稱重編號，按性別、體重分層，再用隨機排列表法隨機分成5組，每組12只，即空白組（等體積生理鹽水）、阿司匹林組（0.195g/kg）和益氣化瘀方 低、中、高劑量組。每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續給藥3d。最后一次給藥后30min，腹腔注射0.3%醋酸0.2mL/只，觀察30min內各組動物醋酸引起的扭體次數和鎮痛百分率（%）。鎮痛百分率 （%）=（空白組扭體次數-用藥組扭體次數）/空白組扭體次數×100%。

2.4 熱板鎮痛實驗 清潔級BALB/C雌性小鼠60只，體重18～22g，依據體重編號，隨機分成5組，每組12只，即空白組（等體積生理鹽水）、阿司匹林組（0.195g/kg）和益氣化瘀方低、中、高劑量組。每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續給藥3d。第3次給藥后30、90、120min時測定痛閾值，超過60s仍無反應者以痛閾值為60s計算，并計算痛閾提高百分率。痛閾提高百分率（%）=（用藥后痛閾值-用藥前痛閾值）/用藥前痛閾值×100%。痛閾值測定方法:智能熱板儀溫度控制在（55±0.5）℃，于室溫下每次放入1只小鼠，用秒表記錄小鼠自放入至出現舔后足的時間（s）作為該鼠的痛閾值，間隔30min復測1次，2次平均值為痛閾值（給藥前痛閾均值不超過30s者為合格）。

2.5 對二甲苯所致小鼠耳腫抑腫實驗 清潔級BALB/C小鼠50只，雌雄各半，依據體重分層，隨機分成空白組（等體積生理鹽水）、阿司匹林組（0.195g/kg）和益氣化瘀方低、中、高劑量組。各組小鼠每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續給藥3d。最后一次給藥后30min，將二甲苯棉球接觸小鼠右耳5s，15min后處死動物。用6mm打孔器沿左右耳郭相同部位打孔取材，分別用AG205電子天平稱重，以兩耳片重量差值作為腫脹程度指標，比較藥物組與對照組間的差異，并求出抑腫率。抑腫率（%）=（對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/對照組平均腫脹度×100%。

2.6 統計學方法 分析數據使用SPSS18.0統計軟件包。計量資料用（±s）表示，符合正態性和方差齊性用單因素方差分析。P＜0.05表示差異有統計學意義。

3 實驗結果

3.1 各組小鼠凝血、出血時間比較 與空白組比較，益氣化瘀方低、中、高劑量組小鼠凝血時間明顯縮短（P＜0.01），其作用隨劑量的增加而增強。與氨基己酸比較，益氣化瘀方中、高劑量凝血作用與之相似（P＞0.05）。說明益氣化瘀方的止血效果明顯。與空白組比較，益氣化瘀方各劑量組出血時間明顯縮短（P＜0.01），低劑量作用次于氨基己酸（P＜0.05），中、高劑量作用與氨基己酸、三七粉相似，差異無統計學意義。說明益氣化瘀的止血效果明顯。見表1。

表1 各組小鼠凝血、出血時間比較（±s）

表1 各組小鼠凝血、出血時間比較（±s）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與氨基己酸組比較，▲P＜0.05。

組別 動物數（只）劑量（g/kg） 凝血時間（s） 出血時間（s）空白組12222.50±39.34 236.83±36.20氨基己酸組 12 0.78 172.50±36.46△△169.25±33.406△△三七粉組 12 1.04 155.00±45.83△△172.43±42.43△△益氣化瘀方低劑量組 12 1.54 175.00±44.00△△▲202.33±34.34△△▲益氣化瘀方中劑量組 12 4.62 147.50±45.15△△187.25±36.53△△益氣化瘀方高劑量組 12 13.86 132.50±32.51△△174.92±45.75△△

3.2 各組小鼠痛閾改變情況比較 與空白組比較，益氣化瘀方低、中、高劑量組小鼠扭體次數明顯減少（P＜0.01），其作用隨劑量的增加而加強。益氣化瘀方鎮痛作用明顯低于阿司匹林（P＜0.05）。見表2。

表2 各組小鼠痛閾改變情況比較（±s）

表2 各組小鼠痛閾改變情況比較（±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與阿司匹林組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組別 動物數（只）劑量（g/kg）給藥前痛閾（s）痛閾及提高百分率45min 90min 120min空白組 1021.1±3.00痛閾（s） 痛閾提高百分率（%） 痛閾（s）21.8±4.02 22.2±5.49痛閾提高百分率（%） 痛閾（s） 痛閾提高百分率（%）24.0±4.74阿司匹林組 10益氣化瘀方低劑量組 10 6.76 21.2±2.56 28.0±8.01△▲32.08 28.5±6.02△▲34.43 30.0±5.87△▲▲41.51益氣化瘀方中劑量組 10 13.52 21.15±2.54 27.7±6.80△▲30.97 29.0±7.90△▲37.16 30.8±7.97△▲45.63益氣化瘀方高劑量組 10 27.04 20.85±2.76 29.2±4.64△△▲40.05 34.5±7.29△△▲65.47 33.3±6.20△△▲59.71 0.195 20.3±2.9435.6±7.86△△75.37 37.1±8.41△△82.76 40.6±8.90△△100.00

3.3 各組小鼠扭體次數與鎮痛百分率比較 腹腔注射醋酸后可引起小鼠腹腔疼痛，出現扭體反應。給藥后各組均能顯著抑制小鼠出現的疼痛反應，和空白組比較差異顯著（P＜0.05，P＜0.01）。益氣化瘀方各劑量鎮痛作用與阿司匹林比較仍有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01）。說明益氣化瘀方有良好的鎮痛作用，但其作用有限，次于阿司匹林。見表3。

表3 各組小鼠扭體次數與鎮痛百分率比較（±s）

表3 各組小鼠扭體次數與鎮痛百分率比較（±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與阿司匹林組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

劑量（g/kg）組別 動物數（只）扭體法扭體次數 鎮痛率（%）空白組 12 35.08±5.316阿司匹林組 12 0.195 20.75±5.429△△40.85益氣化瘀方低劑量組 12 6.76 30.33±4.539△▲▲13.54▲▲益氣化瘀方中劑量組 12 13.52 26.67±6.919△△▲▲23.97▲益氣化瘀方高劑量組 12 27.04 25.25±7.899△△▲24.68▲

3.4 各組小鼠耳腫脹度比較 空白組小鼠右耳較左耳明顯紅腫，厚度增加。各給藥組小鼠右耳變化不明顯，動物兩側耳片差異明顯低于空白組兩側耳片差異（P＜0.05）。表明益氣化瘀方各劑量與阿司匹林均有較好的抑制炎癥作用，益氣化瘀方高劑量與阿司匹林抑腫作用比較，無統計學差異。見表4。

表4 各組小鼠耳腫脹程度比較（±s）

表4 各組小鼠耳腫脹程度比較（±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與阿司匹林組比較，▲P＜0.05。

組別 動物數劑量（g/kg）右耳重（mg）左耳重（mg）腫脹度（mg）空白組10抑腫率（%）13.86±2.4825.58±4.83 11.72±4.09—0.195 13.22±2.08 18.72±2.72 5.50±1.92△△益氣化瘀方低劑量組 10 4.29 13.39±4.13 22.35±4.48 8.86±2.01△24.38▲益氣化瘀方中劑量組 10 12.87 13.07±1.89 21.65±2.47 8.58±2.74△△26.77▲益氣化瘀方高劑量組 10 38.61 13.40±2.42 19.50±2.13 6.10±1.77△△47.90阿司匹林組 10 53.09

4 討論

產時用力耗氣，元氣損傷，瘀血內阻，產后病機多虛多瘀，氣虛血瘀為產后病發生的首要病機。產后瘀血不去，新血難生，瘀阻胞中，導致惡露淋漓不盡，“不通則痛”；或氣虛不能統攝血液，失血過多，胞宮胞脈失養，“不榮則痛”。產后子宮復舊不全臨床以虛、血、痛為主要表現，益氣化瘀為首要治療大法。益氣化瘀方由黨參、黃芪、蒲黃炭等10味藥物組成，能益氣止血、化瘀止痛，臨床主要用于人流、藥流后或產后氣虛血瘀所致的子宮復舊不全，表現為陰道出血淋漓不斷、腹痛等。現代醫學認為，產后子宮內膜炎癥是導致產后子宮復舊不全的主要原因。治療時首先是止血、加強宮縮、抗炎鎮痛，其次為增強機體自身的機能狀態。益氣化瘀方臨床療效確切，我們推測益氣化瘀方具有促進子宮內膜修復，止血、抗炎、鎮痛作用，故通過本研究予以證實。

益氣化瘀方以黨參、蒲黃為君藥，黨參補中益氣，生津和胃，補氣“無剛燥之弊”；蒲黃涼血止血，活血消瘀，性平則無寒熱，止血而不留瘀。二藥合用，補而不滯，行而能止，共奏益氣化瘀之功。黃芪、馬鞭草、茜草為臣。黃芪大補元氣，扶正固本；馬鞭草活血散瘀，清熱解毒，利水消腫；茜草既能涼血止血，又能活血行血，祛瘀生新。狗脊、鹿銜草、續斷、臺烏藥為佐。狗脊補肝腎，強腰膝，溫補固攝；鹿銜草補肝腎、強筋骨，能收斂止血；續斷補肝腎，強筋骨，續折傷，止崩漏。三藥合用，既可補肝腎強筋骨，又可續傷止血。加入臺烏藥通理上下諸氣，治療少腹疼痛。

二甲苯是一種化學致炎劑，通過炎癥介質的釋放，增加毛細血管的通透性和炎癥細胞的浸潤，造成耳部急性滲出性炎性水腫[4]。益氣化瘀方能減輕二甲苯引起的小鼠耳腫脹，具有較好的抗炎作用。結合藥理學研究提示:方中蒲黃炭、黃芪、馬鞭草、茜草、鹿銜草、烏藥具有抗炎作用。其中蒲黃炭改善微循環，通過促進重吸收和降低毛細血管的通透性達到抗炎目的，同時能促進血液凝固[5]。黃芪能提升機體免疫功能，增加白細胞，增強中性粒及巨噬細胞的吞噬和殺菌能力[6]。馬鞭草具有消炎止痛作用[7]。茜草具有抗菌作用[8]。鹿銜草能抗菌，促進免疫功能。烏藥抗菌、鎮痛消炎[9]。

血液凝固在人體止血機制中起重要作用，活血化瘀中藥具有擴血管，降低血液黏度，激活凝血系統，改善微循環的作用[10]。益氣化瘀方中黨參、馬鞭草、續斷、茜草、狗脊均具有止血作用。其中黨參能提高機體免疫功能，改善血管壁功能抑制血小板聚集和黏附，改善血液流變學，增加血液流速，防止血栓形成[11]。馬鞭草、茜草促進泌乳，提高子宮平滑肌興奮性，促進子宮縮復止血[7-8]。續斷能止血、鎮痛。狗脊對組織損傷出血有肯定的快速止血作用[12]。

篩選鎮痛藥的常用致痛方法概括有物理法（熱刺激小鼠足部產生痛反應）和化學法（化學物質腹腔注射，刺激腹膜引起持久的疼痛反應）。益氣化瘀方能抑制由醋酸引起的小鼠扭體反應，提高小鼠的耐熱能力，具有較好的鎮痛作用。我們推測，藥物可能通過抗炎，抑制炎癥細胞浸潤達到鎮痛作用。

本研究結果表明，益氣化瘀方確實具有一定的抗炎、止血、鎮痛作用，然而作為中藥復方成分，進一步明確其有效成分，將其推廣應用是我們今后研究的重點。

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R289.53

A

1672-397X（2015）03-0074-04分娩后，宮頸外口如袖口狀未完全閉合，胎盤剝離面開放，子宮內膜創面尚未修復，此時病原體容易逆行感染導致子宮內膜炎，影響子宮復舊，表現為產后反復發作盆腹腔疼痛、子宮出血淋漓不斷[1]。

曾晶（1982-），女，博士，主治醫師，研究方向：中西醫結合治療婦產科月經病、產后病。841825639@qq.com

2014-12-27

編輯：吳 寧

國家自然科學青年基金項目（81202848）；湖南省自然科學基金項目（14JJ3121）