荷移光譜法測定雞肉中左氧氟沙星殘留*

龐艷玲，孟德素

(菏澤學院化學化工系，山東菏澤，274015)

左氧氟沙星(LVFX)為化學合成的抗菌藥，是第四代喹諾酮類藥物，具有抗菌譜廣、抗菌作用強、使用安全等特點，是治療泌尿、呼吸道、胃腸系統細菌感染性疾病的首選藥物，目前測定分析方法主要是熒光法［1］、紫外分光光度法［2］、HPLC 法［3］、紫外吸收系數法［4］、紫外檢測法［5］、毛細管電泳法［6］、高效液相色譜法［7～8］、一階導數分光光度法［9］等。幾年來，部分養殖戶存在不合理甚至“濫用”左氧氟沙星的現象，由此形成了畜禽產品左氧氟沙星殘留超標的安全隱患。

荷移反應是基于電子給體和電子受體之間的電荷轉移形成荷移復合物的一類反應，由于荷移絡合物的形成，使吸收光譜發生較大幅度紅移，從而避開藥物制劑或體液中其他物質的干擾，使其選擇性顯著提高。本文研究了左氧氟沙星與茜素的荷移反應，確定了最佳反應條件，并對反應機理進行了初步探討。

1 儀器與試劑

TU-1810型紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限公司;紅外光譜儀，傅里葉紅外光譜儀-FTIR370;pHS-3型精密酸度計，上海雷磁儀器廠。

左氧氟沙星標準品，中國食品藥品檢定研究院含量97%;茜素，中國醫藥公司上海化學試劑采購供應站。

雞肉，市購。所用試劑若無特別說明均為分析純，試驗用水為去離子水。

2 實驗方法與結果

2.1 溶液配制

(1)茜素標準溶液溶液:準確稱取茜素13.0 mg溶于無水乙醇中，并定容至100 mL。

(2)左氧氟沙星標準溶液:準確稱取左氧氟沙星標準品10.3 mg，溶解并定容至100 mL。

(3)BR緩沖溶液的配制:在100 mL三酸混合液(磷酸、乙酸、硼酸，濃度均為0.04 mol/L)中，用0.2 mol/L NaOH溶液調至不同pH值的緩沖溶液。

(4)準確移取左氧氟沙星標準溶液2 mL于10 mL比色管中，加入1 mL茜素溶液并加水定容，搖勻后在室溫下放置10 min，以同種方法配制試劑空白作參比，在532 nm處測其吸光度。

2.2 實驗條件優化

2.2.1 吸收光譜

圖1 左氧氟沙星(1)、茜素(2)和絡合物(3)的可見吸收光譜圖Fig.1 The Vis spectra of LVFX(1)，Alizarin(2)and complex(3)

按照試驗方法配制溶液，在400～700 nm內分別掃描左氧氟沙星、茜素和配制溶液的吸收光譜(圖1)。左氧氟沙星在可見光區沒有吸收峰，茜素在435 nm處有最大吸收，左氧氟沙星和茜素生成的絡合物在532 nm處有最大吸收，最大吸收發生紅移且吸收強度增大。在532 nm處的吸光度與左氧氟沙星濃度成正比，據此擬定測定左氧氟沙星的分析方法，實驗證明該方法可行。

2.2.2 反應時間的影響

按照試驗方法配制溶液，在室溫下分別反應10、20、30、40、50、60 min 后，在 532 nm 處測其吸光度，結果表明，絡合物的吸光度不隨時間變化而變化。

2.2.3 反應溫度的影響

按照2.1(3)配制溶液，分別在20、25、30、35、40、45℃ 下保溫10 min后，冷卻至室溫，并在532 nm處測其吸光度。結果表明，溫度對絡合物的吸光度影響不大，本實驗選室溫反應即可。

2.2.4 試劑用量的影響

按照2.1(3)配制溶液，只改變左氧氟沙星用量分別為1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 時，測其吸光度。結果表明，LVFX用量為2 mL時反應可以完全進行。

2.2.5 酸堿度的影響

按照2.1(3)配制6份溶液，分別向其中加入不同pH的標準緩沖溶液，測其吸光度。結果表明，酸性和堿性溶液中吸光度降低，所以本實驗采用中性環境。

2.2.6 溶劑的影響

按照2.1(3)配制溶液，分別用不同溶劑溶解茜素，測定溶液吸光度。結果表明，溶劑對絡合物吸光度影響不大，考慮到實驗成本和環境效應，所以本實驗采用乙醇作溶劑。

2.2.7 溶劑比例的影響

按照2.1(3)配制溶液，分別改變水和乙醇的比例，測定溶液吸光度。結果表明，

溶劑比例對絡合物吸光度影響不大，所以本實驗采用加水定容即可。

2.2.8 方法重現性

按照2.1(3)配制6份溶液并測其吸光度。結果如表1所示。由表1可知，6次測定結果的RSD是1.35%。

表1 精密度的測定Table 1 The determination of precision

2.2 標準曲線的繪制

按照試驗方法配制溶液，對測得數據進行統計，處理得回歸方程為A=0.017 9c-0.011 3，相關系數是0.999 6，表觀摩爾吸光系數ε=6.47×103L/(mol·cm)，左氧氟沙星在1～50 mg/L符合比爾定律。

2.3 荷移絡合物組成及穩定常數的測定

利用等摩爾連續變換法測得左氧氟沙星與茜素作用生成的荷移絡合物的組成比為1∶1，絡合物表觀穩定常數為2.85×105。

2.4 反應機理的探討

用KBr壓片法分別測左氧氟沙星標準品、茜素固體與絡合物晶體的紅外光譜。比較光譜圖可知，左氧氟沙星哌嗪環上與—CH3相連的C-N伸縮振動峰由1 048.73 cm-1絡合后移至1 079.39 cm-1，波數增大，強度也顯著增大;4位酮基的振動峰由1 624.11 cm-1移至1619.17 cm-1，變化不大，其他特征峰位置和相對強度變化不大，表明電子給予體左氧氟沙星，是哌嗪環上與—CH3相連的N原子上的孤對電子發生了轉移。而作為電子受體的茜素，振動峰由1 632.81 cm-1移至1 619.71 cm-1，波數減小;其他峰的位置和強度變化不大，表明電子接受體左氧氟沙星，是中間的對苯醌環接受了電子。

左氧氟沙星中的氮原子上有一對孤對電子可作為n-π電子給予體，茜素是一平面缺電子體系，可作為電子接受體，左氧氟沙星與茜素作用形成n-π電荷轉移絡合物。根據荷移絡合物的組成和兩種反應物的結構推斷，此荷移反應的反應式為:

2.5 樣品分析和回收率

2.5.1 樣品的制備

市場隨機購買雞肉樣品，絞碎混勻，準確稱取混勻雞肉組織1.0 g于5 mL離心管中，加入4 mL乙腈和0.04 mL乙酸，高速勻漿提取30s，提取液以5 000 r/min離心5 min，上清液轉移至10 mL具塞比色管中，重復提取1次，合并提取液，加入2 mL正己烷渦旋震蕩脫脂，棄去正己烷層，吸取下層清液，反復用正已烷脫脂至溶液澄清，經0.22 μm濾膜過濾后待測定。

2.5.2 樣品含量的分析

用處理好的樣品，對雞肌肉組織中左氧氟沙星殘留進行測定，未測出氧氟沙星。為考察方法的可行性，做加標回收試驗。稱取1.0 g混勻后的雞肉組織，添加左氧氟沙星標準溶液進行回收率實驗，分別添加相當于5.0、10.0、2 0.0 mg/kg 3個水平，渦旋混勻，余下操作同雞肉樣品制備。每個添加水平平行做6份，計算其回收率和精密度，結果見表2。

表2 左氧氟沙星在雞肉中的回收率(n=6)Table 2 Recoveries of Lefx in chicken samples(n=6)

由表2可知，回收率在92.0% ～96.8%之間，相對標準偏差(RSD)小于5.6%，均符合藥物殘留分析的要求。在保證儀器檢出限和回收率穩定的前提下，雞肉組織中左氧氟沙星檢測方法的檢出限為1.0 mg/kg(按S/N=3計)。

3 結論

左氧氟沙星與茜素在水與乙醇的混合溶液中發生反應，生成絡合物的最大吸收波長為532 nm;表觀摩爾吸光系數是6.47×103L/mol·cm;藥物濃度在1～50 mg/L內符合比耳定律。應用擬定的方法測定雞肉組織中左氧氟沙星的含量，回收率在92.0%～96.8%，雞肉組織中左氧氟沙星檢測方法的檢出限為1.0 mg/kg(按S/N=3計)。所用儀器簡單，操作快速、簡便，可用于雞肉中左氧氟沙星含量的準確、快速測定。

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