CD133在食管鱗狀細胞癌中的表達及臨床意義＊

陜西省第二人民醫院胸外科 （西安710005） 王勇文 張 晉 馮 鋼

近年來腫瘤干細胞理論的提出，為腫瘤的研究提供了一個全新的方向。這類細胞具有自我更新及多向分化的潛能和特性，影響和促進了腫瘤的侵襲轉移，而其數量可能與腫瘤的分化程度及疾病預后具有一定的相關性。CD133作為腫瘤干細胞的標志物，已在多種惡性腫瘤組織中得到證實，但其與食管癌的侵襲、轉移及預后的關系國內外卻少有報道。本研究通過免疫組化方法，檢測CD133在食管鱗狀細胞癌組織中的表達情況，比較分析其與臨床病理參數之間的關系，探討CD133在食管鱗狀細胞癌中的臨床意義。

材料和方法

1 材料選擇 選擇食管鱗狀細胞癌石蠟切片40例（均來自西安交大醫學院第二醫院），患者術前未接受放化療治療，術后病理檢查為鱗狀細胞癌，男26例，女14例，年齡35～71歲，術后隨訪滿3年。患者均知情同意。兔抗人CD133多克隆抗體（產品編號bs-0395R）購于北京博奧森生物技術有限公司、兔抗人Ki67單克隆抗體購于丹麥Dako公司，生物素標記羊抗兔二抗、DAB顯色試劑盒購于北京中杉金橋生物技術公司。

2 實驗方法

2．1 HE染色：石蠟切片常規HE染色。

2．2 石蠟切片的CD133、Ki67免疫組化染色：石蠟切片常規脫蠟水化，置于0．01mol／L檸檬酸鹽緩沖液中，微波修復抗原20min，3%H2O2阻斷內源性過氧化酶，山羊血清封閉后滴加抗CD133、Ki67抗體（1∶100）4℃過夜，第2天取出，滴加生物素標記的二抗，DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。

2．3 結果判斷：DAB陽性染色為棕黃色，計數4個高倍視野下200個癌細胞中陽性細胞數量。由兩位病理醫生獨立觀察判斷。

3 統計學方法 使用SPSS 10．0統計學軟件進行兩兩比較的χ2檢驗，P＜0．05為有統計學差異。

結 果

1 CD133蛋白與食管鱗狀細胞癌、癌旁組織的關系 CD133陽性顆粒主要定位在細胞膜，呈散在簇狀分布；Ki67陽性顆粒定位于細胞核，40例食管鱗狀細胞癌組織中，CD133、Ki67陽性例數，見表1。

表1 CD133在食管鱗狀細胞癌組織、癌旁組織中的表達陽性例數（n）

2 CD133和臨床病理參數 結果顯示，不同年齡、性別患者間CD133陽性細胞表達比較有顯著性差異（P＜0．05）；不同腫瘤組織浸潤深度、淋巴結轉移、細胞分化程度患者間CD133陽性細胞表達率比較有顯著性差異（P＜0．05）。提示低分化食管鱗狀細胞癌中CD133的陽性表達高于高分化食管鱗狀細胞癌組織；腫瘤侵潤越深，CD133的表達也隨之升高；淋巴結有轉移的腫瘤病例其CD133的表達高于無淋巴結轉移的病例，見表2。

3 CD133陽性表達與Ki67表達比率的關系可見，食管癌腫瘤細胞中CD133陽性表達與Ki67陽性表達無統計學差異，見表3。

表2 CD133與臨床病理參數的關系

表3 CD133與ki67表達的相關性

4 CD133陽性的患者生存曲線 見圖7。

圖7 CD133陽性患者生存曲線

討 論

腫瘤干細胞（Cancer stem cells，CSC）是惡性腫瘤組織中能夠自我更新并產生異質性的細胞，其具有的干細胞特性是腫瘤生長、轉移的根源。人類急性粒細胞白血病、肺癌［1］、結腸癌［2］等多種腫瘤組織中也相繼發現存在有CSC，其具有的自我更新、分化的潛能，在腫瘤的復發和轉移中起著重要作用。研究證明，腫瘤干細胞對放化療不敏感，若能建立針對腫瘤干細胞的治療手段，可能提高惡性腫瘤的遠期治療效果。

CD133是在血液系統干細胞、前體細胞中發現的穿膜糖蛋白，后被認為也是腫瘤組織的干細胞標志物［3］。隨著對CD133的研究深入，已在多種惡性腫瘤組織中發現CD133分子的存在。Singh等［4］在腦腫瘤組織進行研究時，將100個CD133陽性細胞接種NOD／SCID小鼠即可形成腫瘤，且腫瘤表型與原發腫瘤相同，證明CD133＋細胞具有顯著增殖能力。在肝癌［5］、黑色素瘤［6］、及胰腺癌［7］的研究中發現 CD133陽性細胞的存在與腫瘤的轉移、復發相關；同時COX多因素分析提示，CD133的蛋白表達水平為影響患者生存率的獨立因素［9］。Ki67是近年來研究較多的一種與增殖細胞相關的核抗原，其與腫瘤的侵襲、浸潤、復發轉移傾向及預后均有密切的相關性。

本研究采用免疫組化法對食管癌及癌旁組織中CD133及Ki67的表達進行檢測發現，腫瘤組織中CD133的陽性表達例數（26例）明顯多于癌旁組織（2例），具有統計學意義（P＜0．01）；Ki67在腫瘤組織中的表達也明顯高于癌旁組織（P＜0．05），并且二者在食管鱗狀細胞癌組織中的的表達情況不具有明顯差異（P＞0．05）。對不同分化程度的食管鱗狀細胞癌組織中CD133的表達進行檢測，結果顯示低分化食管鱗狀細胞癌組織中CD133陽性表達率高于高分化組織（P＜0．05），而腫瘤侵潤程度及樣本淋巴結轉移情況也與CD133的表達呈正相關（P＝0．03，P＝0．025）。同時，生存曲線的結果也提示，CD133表達陽性的患者較陰性患者術后生存期短。

食管癌鱗狀細胞癌患者的長期生存率至今未得到明顯提高，腫瘤的侵襲和轉移是影響患者預后的不良因素。目前國內外有關CD133與食管癌臨床病理特征及預后關系的報道較少。本次研究結果提示，CD133陽性表達水平越高的食管癌組織，含有的腫瘤干細胞樣細胞越多，這種細胞通過自我更新及分化，可能使腫瘤細胞更易出現復發和轉移。因此，CD133可作為評價食管癌鱗狀細胞癌腫瘤生物學特性及判斷預后的一個指標，CD133陽性細胞可作為提高患者生存率的治療靶點。

［1］ Eramo A，Lotti F，Sette G，etal．Identification and expansion of the tumorigenic lung cancer stem cell population［J］．Cell Death Differ，2008，15：504–514．

［2］ O’Brien CA，Pollett A，Gallinger S，etal．A human colon cancer cell capable of initiating tumour growth in immunodeficient mice［J］．Nature，2007，445：106–110．

［3］ Mizrak D，Brittan M，Alison MR．CD133：molecule of the moment［J］．J Pathol，2008，214：3–9．

［4］ Singh SK，Clarke ID，Terasaki M，etal．Identification of a cancer stem cell in human brain tumors［J］．Cancer Res，2003，63：5821–5828．

［5］ Yin S，Li J，Hu C，etal．CD133positive hepatocellular carcinoma cells possess highcapacity for tumorigenicity［J］．Int J Cancer，2007，120：1444–1450．

［6］ Monzani E，Facchetti F，Galmozzi E，etal．Melanoma contains CD133 and ABCG2positive cells with enhanced tumourigenic potential［J］．Eur J Cancer，2007，43：935–946．

［7］ Maeda S，Shinchi H，Kurahara H，etal．CD133 expression is correlated with lymph node metastasis and vascular endothelial growth factor-C expression in pancreatic cancer［J］．Br J Cancer，2008，98：1389–1397．

［8］ Horst D，Kriegl L．CD133 expression is an independent prognostic marker for low survival in colorectal cancer［J］．Br J Cancer，2008，99：1285–1289．