應用木腐菌處理松材線蟲病疫木伐樁的研究

鄧習金 劉 暉 羅惠文 黃燕洪

（1.贛州市森林防火指揮部辦公室，江西 贛州341000；2.贛州市峰山森林公園管理處，江西 贛州341000；

3.贛州市林業有害生物防治檢疫局，江西 贛州341000）

松材線蟲病病死樹的疫木伐樁中含有松材線蟲（Bursaphelenchus xylophilus(Steinerffamp;Buhrer)Nickle）（pine wilt nematode,PWN)和松褐天牛幼蟲，也是松材線蟲病重要侵染源之一[1]。然而，目前生產上大多關注的是病木的處理，即在發病當年的秋冬季清理病木,集中進行藥劑熏蒸等處理，以消滅病木中的松褐天牛幼蟲和減少疫木中所含松材線蟲數量，而往往忽視了對伐樁的除害處理[2]。要保證松材線蟲病除治質量就必須對伐樁進行有效的除害[3-4]。但伐樁是松材線蟲病除治中的難點，目前松材線蟲病疫木伐樁的除害處理技術措施主要有：利用生防真菌（包括木腐菌）的生物防治措施，直接挖樹樁燒毀、剝皮挖蟲和覆土處理等物理機械措施，以及藥物熏蒸、藥物灌注和生石灰處理等化學措施[2]。

木材腐朽就是木材細胞壁被真菌分解時所引起的木材糟爛和解體的現象，能分解木材細胞壁的真菌為木材腐朽菌，簡稱木腐菌[5]。應用在疫木伐樁上的產毒真菌多為木腐菌，利用木腐菌對松材線蟲的抑殺作用及對木材的分解、腐爛作用，在疫木早期被伐倒后，其它腐生菌尚未大量在伐樁上定殖時,人工接種木腐菌使其在伐樁上定殖生長，解決即消滅疫木伐樁上的松材線蟲問題[6]。利用木腐菌、食用真菌接種處理松材線蟲病疫木伐樁是一項環保、有效的伐樁處理技術[7]。將松材線蟲病疫木伐樁作為木腐菌、食用真菌的栽培材料,能夠給疫區帶來良好的社會和經濟效益[8]，這一處理技術值得在松材線蟲病疫區推廣應用。

1 材料與方法

1.1 試驗地概況

峰山國家森林公園在原省級森林公園的基礎上擴建，位于贛州中心城區的東南角。公園總面積20735.2公頃，其中林業用地面積17323.7公頃。馬尾松是森林公園的主要植物。森林公園的馬尾松大部分是1986～1990年飛播造林后經過長時間的封山育林形成的，以馬尾松純林為主，面積約3333.3公頃，主要位于龍村村、流坑村、南田村、火燃村、東風村、雙橋村等。近幾年，該區域馬尾松林陸續受到松材線蟲病入侵和危害。

1.2 試驗材料

試驗菌種：從野外分離培養并保存于本實驗室的菌種見表1.斜面菌種在4℃冰箱中保藏。

松材線蟲：從上述試驗地的疫木中分離得到，并接種在長滿盤多毛孢(Pestalotias sp.)的玉米粒培養基上，于25℃條件下培養12 d后獲得大量松材線蟲，放置于4℃冰箱中保存備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 木腐菌的篩選

將以上保存的真菌在PDA培養基上生長良好的木腐菌菌種，切取直徑為5 mm的同質等量菌絲塊(帶有瓊脂培養基)，分別接入到PDA平板培養基的中間部位。接種后的培養基置于25℃溫箱中培養12 d，使菌種長滿或基本長滿平板。

將松材線蟲接入上述菌株的木腐菌菌落上，每皿接種1 000條，每菌株接種3皿，置于恒溫培養箱中，25℃培養12d，以貝爾曼漏斗法對線蟲進行分離并計數。

1.3.2 優良菌株的擴大培養

將上述篩選出的優良菌株置于液體培養基（成分為：玉米粉3g，蛋白胨1.5g，MgSO4·7H2O 0.05g，KH2PO40.1g，水100mL)內恒溫27℃振蕩培養7d。

1.3.3 伐樁接種木腐菌

選擇晴天午后或陰天進行接種，根據各個木腐菌的栽培特點在伐樁上進行接種，接種時將事先準備好的接種材料涂抹在伐樁表面，然后蓋上透氣薄膜以利保濕，一袋接種材料接種4～5個伐樁。每株木腐菌接種處理25個伐樁。接菌處理時間為70d。

1.4 數據分析

所有數據運用SPSS 13.0軟件進行方差分析、新復極差法差異顯著性檢驗及多重比較。

2 結果與分析

2.1 木腐菌對松材線蟲的抑制作用

將松材線蟲接入13種木腐菌菌落上培養10d后分離的松材線蟲數量見表1。由表1可見，從虎掌菌、松生擬層孔菌、粗皮側耳、硫磺菌、茯苓和靈芝等菌落上完全沒有分離到松材線蟲，說明這6個菌的菌落完全抑制了松材線蟲的數量增加；從繡球菌、黑木耳、潔麗香菇、樺褶孔菌和密粘褶菌等菌落上只分離到少量的松材線蟲，說明這5個菌對松材線蟲的數量增加也有明顯抑制作用；裂褶菌和雜色云芝的菌落上分離到大量的松材線蟲，而且其數量與其他各處理分離的松材線蟲數量存在明顯差異（P≤0.05），說明這2種菌對松材線蟲的生長與繁殖沒有抑制作用。

表1 松材線蟲在木腐菌菌落上培養10d的數量Tab.1 Number of B.xylophilus on wood decaying fungiin 10d

2.2.1 對伐樁樣品重量的影響

野外試驗所選的木腐菌為虎掌菌、松生擬層孔菌、粗皮側耳、硫磺菌和茯苓，接菌處理70d后93個接菌伐樁樣品及24個對照伐樁樣品的重量及不同木腐菌對伐樁樣品重量的影響顯著性檢驗結果見表2。由表2知，接菌處理后的伐樁樣品重量均比對照伐樁樣品重量低，在伐樁上接種粗皮側耳菌、虎掌菌、松生擬層孔菌、硫磺菌和茯苓菌處理伐樁70d后伐樁樣品平均重量均比對照伐樁樣品平均重量輕；接種硫磺菌處理伐樁70d后伐樁樣品的重量與對照伐樁樣品的重量差異顯著，接種另外4個菌處理伐樁70d后伐樁樣品的重量與對照伐樁樣品的重量差異不顯著。

2.2 木腐菌對松材線蟲病疫木伐樁的作用

表2 伐樁樣品重量及顯著性檢驗(t檢驗)Tab.2 The weight of samples from stumps and Samples T Test

2.2.2 伐樁樣品中松材線蟲的數量

在松材線蟲病疫木伐樁上接菌處理70d后，定量（30g）分離伐樁樣品中松材線蟲數量及不同木腐菌對伐樁中松材線蟲數量的影響顯著性檢驗結果見表3。由表3可見，在野外接種試驗的各個伐樁中都分離到一定數量的松材線蟲，其中接種硫磺菌處理伐樁70d后從伐樁樣品中分離到的松材線蟲數量最少，僅為897.9條，與對照相比較差異顯著。接種松生擬層孔菌和獲苓菌處理后從伐樁中分離到的松材線蟲數量比對照還多（但差異不顯著），分別為2534.6條和2616.2條，而對照伐樁中分離到的松材線蟲為2428.3條。

2.2.3 伐樁中松材線蟲數量和伐樁樣品重量的相關性分析

在松材線蟲病疫木伐樁上接菌處理70d后，對每個伐樁內分離到的松材線蟲數量和伐樁樣品重量作線性相關分析（見圖1），得出兩者之間的相關系數為0.5786，該結果表明伐樁內松材線蟲數量與伐樁樣品重量呈正相關關系（y=4113.2x-6676.9），其相關性達到了顯著水平，說明伐樁受木腐菌侵染被其分解后對伐樁內的松材線蟲數量有顯著的影響。

表3 伐樁樣品中松材線蟲的數量及顯著性檢驗(t檢驗)Tab.3 The number of PWN isolated from stumps and Samples T Test

圖1 伐樁中松材線蟲數量和伐樁樣品重量的相關性Fig.1 The correlation of the PWN number and the weight of samples from stumps

3 結論與討論

據報道，某些真菌對松材線蟲的生長和繁殖具有較強的抑制作用[9-11]。線蟲生防真菌，根據其侵害線蟲的習性，可分為捕食真菌、內寄生真菌和產毒真菌，前2類是利用其生物活體對線蟲進行防治，產毒真菌是以其代謝產物毒殺線蟲[9-11]。向紅瓊等(2000)報道，粗皮側耳對線蟲致病的實質是殺主寄生，菌絲分泌的毒素首先將線蟲擊倒并殺死，然后菌絲從線蟲體孔侵入，或靠酶和機械力的作用從表皮侵入，最后消解、吸收和利用線蟲[12]。

本試驗發現，試驗所用的13種木腐菌（含食用菌）除裂褶菌和雜色云芝菌外,其它所用菌均能夠很好地抑制松材線蟲的繁殖。其中虎掌菌、松生擬層孔菌、粗皮側耳、硫磺菌、茯苓和靈芝對松材線蟲的繁殖有很強的抑制作用，松材線蟲在其菌落上完全不能存活,可見本試驗所用的木腐菌對松材線蟲具有比較強的抑殺作用。

對本次試驗中各個處理伐樁樣品的重量分析表明，接菌處理的伐樁樣品重量比對照伐樁樣品重量輕，說明接菌處理70d后，5個木腐菌都分別對疫木伐樁起到了一定的分解作用。但在野外試驗過程中，由于定殖競爭力的存在導致各個木腐菌在伐樁上的定殖能力出現差異，從而造成了各個木腐菌對伐樁分解能力的差異。

對每個伐樁內分離到的松材線蟲數量和伐樁樣品重量作相關分析結果表明，木腐菌對伐樁的分解能力越強則該菌株對伐樁內的松材線蟲的抑殺作用也越強。由此可見，接種木腐菌處理松材線蟲病疫木伐樁效果的好壞在于所接種木腐菌對伐樁分解能力的強弱，而木腐菌在野外試驗條件下對伐樁的分解能力強弱取決于該菌株在伐樁上定殖能力的強弱，定殖能力強的木腐菌能夠很好地在伐樁上定殖，進而對伐樁進行分解同時有效地作用于伐樁內的松材線蟲。如硫磺菌處理的伐樁樣品質量減少最多、所含線蟲數最少，說明其對疫木伐樁具有較強的分解力和定殖力以及對線蟲的抑殺作用。

本試驗所用的5個木腐菌菌株都具有一定的藥用或食用價值，該5個菌株在田間試驗中都表現出對伐樁具有不同的分解能力。可見利用木腐菌、食用真菌接種處理松材線蟲病疫木伐樁是一項環保、有效的伐樁處理技術，值得推廣應用[8]。

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