DPPH 法評價大黃提取物的抗氧化活性

閆海燕

(寶雞文理學(xué)院 陜西省植物化學(xué)重點實驗室，陜西 寶雞 721013)

研究表明，自由基與人體許多疾病的發(fā)生都有著密切的關(guān)系。在正常的生理狀態(tài)下，體內(nèi)自由基會不斷產(chǎn)生，并不斷地被清除，使之維持在一個正常的生理水平上，過多或過少都會給人體造成損傷。因此，研究自由基的檢測方法具有十分重要的意義。大黃是我國傳統(tǒng)中藥材之一，具有多種藥用功效，隨著大黃研究的不斷深入，從中挖掘抗氧化藥物很有希望［1］。

本實驗采用DPPH 自由基清除法對大黃進(jìn)行了抗氧化能力的測定，為進(jìn)一步研究其抗氧化活性及開發(fā)利用提供參考。

1 實驗部分

1.1 材料與儀器

大黃，寶雞方晟藥業(yè)公司;1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)，Sigma 公司;甲醇，色譜純。

CP225D 電子天平;XS2 酶標(biāo)儀;R-1002 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;KQ5200E 型數(shù)控超聲波清洗器。

1.2 大黃抗氧化成分的提取［2］

準(zhǔn)確稱取0.5 g 大黃藥材，加入50 mL 溶劑，超聲提取，減壓回收得大黃粗提物。用甲醇溶解，定容于10 mL 容量瓶中，備用。

1.3 抗氧化性能測試

1.3.1 DPPH 溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密稱取DPPH 0.021 2 g，加甲醇溶解，定容至50 mL量瓶中，得0.424 mg/mL 的儲備液。分別精密移取1，2，4，6，8 mL 于5 個10 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。以甲醇為參比，在517 nm 波長處測定各溶液的吸光度。根據(jù)吸光度和質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程為Y = 0. 998 1X +0.031 8 (r=0.999 1)，DPPH 在質(zhì)量濃度為0.042 4～0.339 2 mg/mL 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.3.2 自由基清除率的測定稱取DPPH 標(biāo)準(zhǔn)品8 mg，甲醇溶解定容至100 mL，得質(zhì)量濃度為0.08 mg/mL的DPPH 溶液。在96 孔板中，每孔分別加入100 μL 不同濃度的樣品溶液和等體積的DPPH 溶液，室溫避光靜置30 min，于517 nm 波長處測定吸光度Ai;同時測100 μL 甲醇與100 μL DPPH 混合后吸光度Ao;100 μL 樣品液加100 μL 甲醇混合后吸光度Aj。……