HPLC法測定救心丸中人參皂苷Rg1的含量

曾艷 楊義平 王曉彬 何健 井文廣

(華佗國藥股份有限公司,安徽亳州 236803)

HPLC法測定救心丸中人參皂苷Rg1的含量

曾艷 楊義平 王曉彬 何健 井文廣

(華佗國藥股份有限公司,安徽亳州 236803)

目的:建立救心丸的中人參皂苷Rg1。方法:采用高效液相色譜法對人參皂苷Rg1進行了含量測定。結果:用高效液相色譜法對人參皂苷Rg1進行了含量測定,人參皂苷Rg1在0.17384～0.8692μg范圍內與峰面積有良好線性關系,回歸方程為Y=270985X-723.9(r=0.9996),平均回收率為100.7%,RSD=1.7%。結論:方法專屬性強,重現性好,回收率良好,可有效控制救心丸的產品質量。

救心丸 HPLC 人參皂苷Rg1含量測定

救心丸收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第十九冊,具有活血化瘀、化痰通絡的功能,由八味名貴藥材人工麝香、人工牛黃、珍珠、人參莖葉總皂苷、牛膽膏粉、冰片、蟾酥、三七膏粉組成。目前質量標準中尚無含量測定,僅有顯微、理化鑒別,為更好的控制產品質量,本實驗采用HPLC法對方中人參莖葉總皂苷、三七膏粉中人參皂苷Rg1進行了含量測定,能進一步控制產品質量。

1 試驗儀器與材料

儀器:LC-10ADvp高效液相色譜儀(日本島津)。依利特牌C18色譜柱(5μm,250mm×4.6mm ID);SCL-10Avp二極管陣列檢測器;756CRT紫外分光光度儀(上海分析儀器廠)。

試藥:人參皂苷Rg1對照品由中國食品藥品檢定研究院提供(批號110703-200726,供含量測定用);乙腈為色譜純(國藥集團化學試劑有限公司);水為二次蒸餾水;其余試劑為分析純。

2 方法與結果

參莖葉總皂苷雙陰性的空白制劑,制得陰性對照溶液,分別精密吸取陰性對照溶液、對照品溶液和供試品溶液注入液相色譜儀。結果陰性對照溶液中在人參皂苷Rg1色譜峰處無相應色譜峰出現,而供試品溶液中在人參皂苷Rg1峰處有峰出現,說明對人參皂苷Rg1的測定無干擾。

(3)對照品溶液的制備。精密稱取置人參皂苷Rg1對照品適量置量瓶中,加甲醇適量,加甲醇制成每1ml含0.04mg的溶液,即得。

(4)供試品的處理方法。取供試品20粒,精密稱定重量,研細,稱取樣品0.1g,置25ml量瓶中,加入甲醇適量,超聲提取30分鐘,放冷后用甲醇定容至刻度,搖勻。過濾,棄其初濾液,取其續濾液,即得。

(5)精密度考察。按所選定的供試品溶液的制備方法制備供試液,精密吸取同一供試品溶液10μl,重復進樣5次,注入液相色譜儀,測定人參皂苷Rg1峰面積值,結果見表1。

(1)色譜條件的確定。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈-0.05%磷酸溶液(20:80)為流動相;檢測波長為203nm;理論板數按人參皂苷Rg1峰計算應不低于4000。

(2)陰性干擾性檢查。按本制劑處方組成,制備不含三七膏粉,人

表1 精密度測定結果

表2 人參皂苷Rg1線性關系測定結果

表3 重復性試驗結果

表4 穩定性試驗結果

RSD=0.57%,結果表明精密度良好。

(6)線性關系考察。精密稱取人參皂苷Rg1對照品11.12mg,置25ml容量瓶中,用甲醇定容至刻度,搖勻,精密吸取2.5ml,置25ml容量瓶中,用甲醇稀釋并定容至刻度,搖勻(C對=0.04346mg/ml),分別精密吸取4、8、12、16、20、10μl注入液相色譜儀,測得的峰面積值見表2。

以峰面積值(Y)對進樣量(X)進行回歸,得標準曲線方程Y=270 985X-723.9,r=0.9996。以峰面積值(Y)對進樣量(X)作圖(見下圖)。以上結果表明,在0.17～0.87μg范圍內,人參皂苷Rg1峰面積值與進樣量有良好的線性關系。

(7)重復性考察。按標準中的含量測定方法,取同一批樣品6份,分別按照供試品溶液的制法制備供試液,按擬定的色譜條件測定人參皂苷Rg1的含量,結果見表3。

人參皂苷Rg1含量RSD=0.65%,結果表明重復性良好。

(8)穩定性考察。按所選定的供試品溶液的制備方法,制備供試品溶液,分別在0,2,4,8,12,24小時進樣,測定供試品溶液中人參皂苷Rg1峰面積,結果見表4。

0-12h,RSD=0.54%。0-24h,RSD=2.47%。結果表明樣品在12小時內穩定性良好,而在24小時內不穩定。

(9)加樣回收率試驗。取一批成品按所選定的供試品溶液的制備方法,制備供試品溶液。分別對照品溶液(C對=0.3139mg/ml)和供試品溶液注入液相色譜儀。測定人參皂苷Rg1的含量為16.3mg/g。取此批樣品約0.05g,共6份,精密稱定,分別在其中精密加入濃度為0.3139mg/ml人參皂苷Rg1對照品溶液2.0ml,揮干溶劑,按照供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,照樣品測定法測定人參皂苷Rg1的含量,以下列公式計算回收率,結果見表5。

圖1

表6 中試樣品中人參皂苷Rg1含量測定結果

結果表明,平均回收率為100.7%,RSD=1.17%,加樣回收率良好。

(10)三批樣品測定。按已確定含量測定的方法對三批樣品人參皂苷Rg1的含量進行測定,結果見表6。

根據上述十批樣品測定結果,建議確定救心丸人參皂苷Rg1含量(本品每粒含人參皂苷Rg1,不得少于0.25mg)。

[1] 衛生部藥品標準中藥成方制劑第十九冊.33.

[2] 張成義,陳曦,李賀,等.消渴靈沖劑降糖作用的研究[J].北華大學學報:自熱科學版,2007,8(2):154—7.

[3] 中國藥典2010年版一部.2010:285-286.