美沙拉嗪聯合益生菌對炎癥性腸病大鼠模型血清IL-6、TNF-α和IFN-γ含量的影響

晏廷亮 張帆 崔道林 方杰 龔蕾

炎癥性腸病（IBD）一詞特指病因尚不明了的炎癥性腸病，主要包括潰瘍性結腸炎和克羅恩病。IBD的病因尚未完全明確，目前認為其發病機制可以概括為免疫反應引發的炎性病理過程[1]。氨基水楊酸類藥物、免疫抑制劑和糖皮質激素等藥物是目前治療該疾病的主要方法，但這類藥物停藥后容易復發，并且長期應用會帶來較多不良反應[2]。近年來隨著對IBD的深入研究，生物制劑尤其是益生菌在IBD的治療領域受到醫學界的廣泛關注。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與主要試劑 雄性SD大鼠40只，隨機分為正常對照組、模型組、美沙拉嗪組和美沙拉嗪益生菌聯合組，每組10只。葡聚糖硫酸鈉（DSS），美沙拉嗪片，益生菌：雙歧三聯活菌（含雙歧桿菌、乳酸桿菌、腸球菌），小鼠ELISA試劑盒。

1.2 實驗方法

1.2.1 造模與灌胃 根據每日實際飲用量新鮮配制5%DSS溶液。隨機選取的30只大鼠給予含5%DSS的飲用水10 d建立炎癥性腸病動物模型。第11天開始模型組常規飼養觀察14 d；美沙拉嗪組給予150 mg/（kg·d）的劑量應用美沙拉嗪灌胃治療14 d，聯合組則除給予美沙拉嗪組同等治療外，同時還應用雙歧三聯活菌按照500 mg/（kg·d）的劑量灌胃治療14 d，在此治療期間正常對照組和模型組都給予等量生理鹽水灌胃；正常對照組不予DSS干預，僅同步常規飼養觀察。

1.2.2 觀察指標 所有大鼠于灌胃結束后處死并取血分離血清，應用ELISA試劑盒測定大鼠血清中IL-6、TNF-α和IFN-γ含量，具體步驟嚴格按照說明書進行。

1.3 統計學處理 應用SPSS 16.0統計軟件進行統計分析，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

模型組的各類炎癥因子含量均明顯高于正常對照組（P<0.05）；而美沙拉嗪組和聯合組的IL-6、TNF-α和IFN-γ含量的表達均明顯低于模型組，（P<0.05）；而聯合組相比美沙拉嗪組在IL-6的表達上也是明顯下降（P<0.05），雖然TNF-α和IFN-γ含量也是有所下降，但是差異無統計學意義（P>0.05）。具體見表1。

表1 各組大鼠腸黏膜IL-6、TNF-α和IFN-γ結果 pg/mL

3 討論

近年來我國的炎癥性腸病患病率逐年增加，而目前該病的發病因素及致病機制尚未明確，是多種因素導致的病變，一般主要考慮與外界環境、基因遺傳、免疫力以及感染等多方面綜合因素相關[3]。該病的主要臨床表現為腹痛、腹瀉、黏性血便等，如并發潰瘍必須及時治療，否則極易引發腸穿孔，威脅患者的生命安全[4]。傳統西醫臨床治療IBD的手段主要是通過抑制腸黏膜釋放前列腺素E和白三烯，進而抑制巨噬細胞向炎癥中心移動，從而達到有效抗炎的目的[5]。近年來有相關研究報道，IBD與腸道菌群失調有密切關系[6]，人體腸道有大量的微生物，不完全統計，數量高達400種以上，其中就以雙歧桿菌與嗜酸乳桿菌為主，大約占到微生物總量的98%以上，通常人體在正常情況下，腸道內的微生物處于相對平衡狀態，可一旦失衡，菌群失調可導致相關疾病的發生[7]。IBD的患者腸黏膜表面的有益菌如乳酸桿菌和雙歧桿菌是缺失的，而大腸桿菌、變形桿菌和擬桿菌等革蘭氏陰性菌在腸黏膜表面的濃度反而增加，可以認為腸道菌群失調可能是IBD誘發及復發的關鍵因素，因此應用益生菌治療IBD成為一種新的臨床治療思維方式。

美沙拉嗪是一種5-氨基水楊酸制劑，在腸道釋放后主要通過抑制白三烯等炎性物質的釋放，從而減少炎癥反應[8]，同時該藥物還能清除腸道的自由基，較少引發不良反應，患者能夠持續治療[9]。可見美沙拉嗪能很好地抑制患者腸黏膜的炎性反應，促進損傷腸壁愈合。在應用美沙拉嗪治療IBD的同時適當補充益生菌能夠平衡IBD患者的腸道菌群，不僅更加有效地抑制了IBD的炎癥反應，而且可以明顯改變腸道的微生物環境[10]，這是基于腸道天然免疫與正常菌群間的異常免疫反應，最終都表現在細胞因子的表達異常[11]。

從本實驗結果可以看出，單用美沙拉嗪能夠明顯抑制大鼠模型血清中的炎癥因子，這也說明這一藥物治療IBD的有效性，但是同時也可以看出，在于模型組存在明顯區別的同時，該組與正常對照組的炎癥因子的表達也是明顯存在統計學差異。當益生菌與美沙拉嗪聯合應用時，可以發現大鼠血清中三種炎癥的含量的表達繼續下降，不僅三項內容都與模型組存在明顯差異，同時與正常對照組在TNF-α和IFN-γ這兩項已無明顯差異，這可能是源于益生菌通過上調腸道局部的免疫功能，促進機體免疫恢復，從而有效糾正了抑炎和抗炎動態失衡，降低炎癥反應，并最終下調白細胞的計數，減少了炎性因子的釋放[12]。總之，從實驗結果的數據中充分體現出了兩種藥物聯用的優勢。

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