西砒氯銨與聚維碘酮對小鼠口腔白色念珠菌感染的抑制作用

周 芳 李子夏 梁 斌 左艷萍 郭 娜 王丹楊

(西安醫學院口腔醫學系口腔修復正畸學教研室，陜西 西安 710021)

近年來，口腔黏膜念珠菌感染的發病率逐漸增高〔1〕。口腔白色念珠菌病是由白色念珠菌感染引起的急性、亞急性或慢性口腔黏膜疾病，若不及時治療，可伴發多種口腔黏膜病，且有一定癌變的可能〔2〕。因此選擇安全有效的臨床藥物進行治療及其預防是醫務工作者面臨的重要課題。本文旨在探討西砒氯銨含漱液和聚維碘酮溶液對口腔白色念珠菌感染的抑制作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 選擇雌雄各半健康美國癌癥研究所(ICR)小鼠60只，購自北京維通利華實驗動物技術有限公司〔許可證書編號:SCXK(京)2002-0003〕，體重18 ～22 g。

1.2 菌株 白色念珠菌標準菌株(ATCC90028)，購自南京皮膚病研究所。冷凍保存，使用時經沙堡氏液體培養基，35℃培養48 h，配制成菌密度約為1.5×1010CFU/ml的菌懸液。

1.3 實驗用藥 西砒氯銨含漱液(依信)，杭州民生藥業集團有限公司生產，生產批號 H20010753);聚維碘酮溶液(艾利克)，成都永安制藥有限公司生產，生產批號:H51022885。

1.4 方法

1.4.1 實驗分組及小鼠口腔感染模型的復制 將45只小鼠隨機分成西砒氯銨組、聚維碘酮組和生理鹽水組，每組15只。參照文獻〔3〕，實驗開始時在小鼠的日常飲水中加入濃度為1%的阿莫西林溶液，2 w后改濃度為0.1%，直到實驗結束。通過乙醚將小鼠麻醉，用無菌小油畫筆蘸取濃度為1.5×1010CFU/ml的白色念珠菌菌液0.07 ml，涂抹至小鼠右頰側口腔黏膜，每3天用無菌探針輕劃小鼠右頰側口腔黏膜3下，以不劃破黏膜為原則，持續4 w。

1.4.2 模型的鑒定 隨機選擇三組中建模成功的小鼠各1只，處死后取涂菌處黏膜固定、脫水、包埋和切片。進一步在常規蘇木素-伊紅(HE)染色和過碘酸雪夫反應(PAS)染色光鏡下觀察以確定建模是否成功。

1.4.3 給藥 采用上述構建成功的小鼠模型，通過乙醚將小鼠麻醉，西砒氯銨組、聚維碘酮組和生理鹽水組小鼠分別給予0.1%西砒氯銨含漱液、1%聚維碘酮溶液和0.9%生理鹽水，涂抹至小鼠右頰測口腔黏膜2次，1次/d，持續2 w。

1.4.4 觀察指標 觀察小鼠口腔黏膜萎縮、紅斑變化，并進行評分:無損害，0分;單個、小灶性損害，1分;斑片狀損害，2分;彌漫性損害，3分。同時于0、3、7、12 d選擇小鼠口腔黏膜病變最為嚴重的部位取材，采用真菌培養法及鏡檢法檢測三組小鼠在給藥后菌落數及鏡檢陽性率的變化。

1.5 統計學方法 采用SPSS18.0軟件進行分析，定量資料采用s表示，行方差分析，分組資料采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 小鼠口腔感染模型的復制 經臨床觀察可見小鼠口腔涂菌側黏膜表面有白色絨狀斑片，用棉簽擦除后顯示紅色充血糜爛面。取黏膜患處分泌后涂片，經革蘭氏染色，鏡下可見酵母樣孢子。將患處分泌物標本接種于沙堡氏培養基上可見白色奶酪樣菌落。取其患處黏膜做病理學檢查，HE染色可見上皮棘層增生，上皮釘突呈圓形，基地膜部分被炎癥破壞，在黏膜上皮外1/3處有菌絲入侵。

2.2 3組小鼠黏膜萎縮及紅斑評分變化 西砒氯銨組小鼠口腔黏膜萎縮評分由 0 d 的(2.42±0.80)降低到(0.63±0.24)，差異有統計學意義(P＜0.05)，且在7 d和12 d時黏膜萎縮評分低于聚維碘酮組和對照組(P＜0.05)。西砒氯銨組小鼠口腔紅斑評分由0 d 的(2.78±0.94)降低到(0.95±0.48)，差異有統計學意義(P＜0.05)，且在7 d和12 d時西砒氯銨組和聚維碘酮組紅斑評分低于對照組(P＜0.05)，同時西砒氯銨的評分低于 聚維碘酮組，但差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 3組小鼠黏膜萎縮及紅斑評分變化(n=14，s)

表1 3組小鼠黏膜萎縮及紅斑評分變化(n=14，s)

與對照組比較:1)P＜0.05;與聚維碘組比較:2)P＜0.05;與0 d 時比較:3)P＜0.05;下表同

組別 黏膜萎縮紅斑0 d 3 d 7 d 12 d西砒氯銨組 2.42±0.80 1.70±0.64 1.26±0.551)0.63±0.241)2)3) 2.78±0.94 2.14±0.77 1.64±0.561) 0.95±0.48a3)0 d 3 d 7 d 12 d聚維碘酮組 2.40±0.75 1.93±0.69 1.61±0.621) 1.13±0.371)3) 2.73±0.98 2.39±0.82 2.02±0.721) 1.37±0.511)3)對照組 2.35±0.83 2.30±0.87 2.27±0.78 2.18±0.75 2.76±0.91 2.70±0.86 2.63±0.80 2.49±0.79

2.2 3組小鼠真菌培養及鏡檢情況 西砒氯銨組小鼠口腔真菌培養菌落數由 0 d時(6.53±1.58)cfu/ml降低到 12 d的(0.81±0.43)cfu/ml，差異有統計學意義(P＜0.05)，且在 7 d 和12 d時菌落數低于聚維碘酮組和對照組(P＜0.05)。西砒氯銨組小鼠口腔真菌鏡檢陽性率由100%降低到7.14%，差異有統計學意義(P＜0.05)，且在7 d和12 d時，西砒氯銨組和聚維碘酮組真菌鏡檢陽性率均低于對照組(P＜0.05)。見表2。

表2 3組小鼠真菌培養基鏡檢情況(n=14，s)

表2 3組小鼠真菌培養基鏡檢情況(n=14，s)

組別 菌落數(cfu/ml)鏡檢陽性率〔n(%)〕0 d 3 d 7 d 12 d西砒氯銨組 6.53±1.58 4.27±1.12 1.83±0.941)2)0.81±0.431)2)3) 14(100.00)11(78.57)6(42.86)1) 1(7.14)1)2)3)0 d 3 d 7 d 12 d聚維碘酮組 6.37±1.50 5.01±1.251) 3.01±1.071) 1.95±0.983) 14(100.00)12(85.71)10(71.43)1) 7(50.00)1)3)對照組 6.60±1.62 6.37±1.511) 6.21±1.46 6.17±1.35 14(100.00)14(100.00)13(92.86)12(85.71)

3 討論

白色念珠菌是一種常見的條件致病性真菌，病原體入侵體內后是否引起疾病主要取決于白色念珠菌的侵入途徑、數量、毒力以及機體的抵抗力、口腔局部環境的變化、機體的適應性等多方面的因素〔4，5〕。抗生素的廣泛應用、免疫抑制劑和皮質類固醇激素的使用、機體內細胞免疫功能低下、血清Zn+缺乏，血清Fe2+含量增多、血清抑制因子降低、維生素A缺乏及血糖升高等，都是口腔白色念珠菌感染的有利因素〔6，7〕。根據病變部位和病損特征，口腔念珠菌感染可分為增殖型、萎縮型和假膜型。臨床上與念珠菌感染有關的口腔疾病可導致患者出現口腔黏膜燒灼感、刺激性疼痛、味覺減退、口干口苦等。

研究〔8〕證實，白色念珠菌對口腔黏膜上皮組織有較高的黏附性，這種黏附性主要依靠菌體的甘露糖蛋白部分結合上皮細胞表面受體，從而發揮黏附作用，這也是白色念珠菌致病的“立足點”，因此破壞菌體甘露糖苷蛋白的結構可有效抑制這種黏附作用。西砒氯銨含漱液主要成分為氯化十六烷基吡啶，是一種陽離子型表面活性劑，可減低細菌表面張力，從而吸附于真菌細胞壁表面，并同時與細胞壁上的陰離子相互作用，增加細胞壁的通透性，使膜內蛋白質發生變性，發揮抑制和消滅真菌的作用。體外實驗已報道〔9〕，西砒氯銨對口腔內常見的真菌、需氧菌及厭氧菌均有良好的抑制及殺滅作用。聚維碘酮是已在臨床上廣泛應用的藥劑溶液，能夠有效殺滅革蘭陰性及陽性、真菌、芽孢等多種致病微生物，對口腔念珠菌的輔助治療也有一定的效果，但該藥對口腔黏膜具有明顯的刺激作用，可導致局部紅腫、痛癢、燒灼感等，并引起齒唇著色等嚴重副作用〔10〕。本研究結果表明，西砒氯銨含漱液與聚維碘酮溶液均可有效改善白色念珠菌感染小鼠口腔黏膜萎縮及紅斑，但西砒氯銨對緩解由白色念珠菌感染引起的口腔癥狀的作用更強。而且西砒氯銨在清除真菌作用上優勢更為明顯。

1 陳謙明.口腔黏膜病學〔M〕.第3版.北京:人民衛生出版社，2008:31.

2 Riachi M.Treatment of oral candidiasis〔J〕.Northwest Dent，2013;92(2):4.

3 沈佳娜，張 鈺，黃 韌，等.小鼠念珠菌感染模型和抗感染免疫〔J〕.中國實驗動物學報，2008;16(3):233-7.

4 楊 文.口腔念珠菌感染臨床分析〔J〕.遵義醫學院學報，2011;24(3):291-2.

5 高仕瑛，楊 赟.口腔念珠菌感染與腫瘤患者〔J〕.中國微生態學雜志，2003;15(5):269-9.

6 王愛媛，房 輝，王 余，等.老年2型糖尿病、糖調節受損及正常人群的口腔念珠菌感染情況對比〔J〕.中國老年學雜志，2013;33(11):2495-6.

7 Sroussi HY，Burke-Miller J，French AL，et al.Association among vitamin D，oral candidiasis，and calprotectinemia in HIV〔J〕.J Dent Res，2012;91(7):666-70.

8 黃玉淑，白 麗.白色念珠菌感染免疫應答的研究進展〔J〕.基礎醫學與臨床，2012;32(9):1103-6.

9 Watanabe E，Tanomaru JM，Nascimento AP，et al.Determination of the maximum inhibitory dilution of cetylpyridinium chloride-based mouthwashes against Staphylococcus aureus:an in vitro study〔J〕.J Appl Oral Sci，2008;16(4):275-9.

10 Guzel A，Ozekinci T，Ozkan U，et al.Evaluation of the skin flora after chlorhexidine and povidone-iodine preparation in neurosurgical practice〔J〕.Surg Neurol，2009;71(2):207-10.