胃腺癌中細胞周期檢測點激酶1、2和DNA雙鏈斷裂修復蛋白51的表達及意義

周文燕 (揚州友好醫(yī)院內(nèi)三科，江蘇 揚州 225009)

胃腺癌發(fā)生發(fā)展過程不清楚。研究認為機體的基因和蛋白表達失常是促進腫瘤進展的重要因素。細胞周期檢測點激酶(CHK1)1、2是細胞周期檢測點(G1/S，S和G2/S)發(fā)揮作用的主要激酶，對維持機體基因組的穩(wěn)定及基因的平衡有重要作用〔1，2〕。DNA雙鏈斷裂修復蛋白(RAD)51是一種高度保守和主要在同源重組中發(fā)揮作用的DNA修復蛋白〔3〕，3種蛋白異常表達對腫瘤發(fā)展及放療反應均有一定影響。本文探討胃腺癌CHK1、CHK2和RAD51的表達特征及其臨床意義。

1 材料和方法

1.1 臨床資料 近3年我院行胃腺癌根治手術的患者97例作為觀察組，年齡50～83歲，平均65.6歲，其中男51例，女46例。納入均經(jīng)病理醫(yī)師再次確診，并符合WHO中的診斷標準。其中高分化20例，中分化15例，低分化62例。收集切端經(jīng)病理證實為正常胃黏膜組織80例作為對照組，年齡51～82歲，平均65.3歲，其中男42例，女38例。兩組一般臨床資料無明顯差別(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 免疫組化檢測CHK1、CHK2和RAD51蛋白的表達CHK1、CHK2和RAD51蛋白均購自武漢博士德生物工程公司，均為濃縮液。對抗體進行不同比例的稀釋，選擇最理想的配比濃度用于正式實驗。3種蛋白的檢測均應用免疫組化SABC法，DAB染色。操作均由同一病理科主管技師進行，嚴格按實驗步驟進行操作，嚴格質量控制。

1.3 CHK1、CHK2和 RAD51蛋白檢測結果的判定方法CHK1和CHK2以細胞質和(或)細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應細胞，RAD51以細胞質出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細胞。每張切片觀察5個腫瘤細胞(觀察組)、上皮細胞(對照組)染色密集的區(qū)域(400倍)，取其平均值，以陽性細胞≥25%定為陽性，以陽性細胞＜25%定為陰性。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SAS6.12軟件進行χ2或相關分析。

2 結果

2.1 兩組CHK1、CHK2和RAD51表達陽性率的比較 觀察組中CHK1、CHK2和RAD51表達的陽性率明顯高于對照組(P＜0.000 1)。見表 1。

2.2 CHK1、CHK2和RAD51在觀察組不同臨床特征中的表達比較 觀察組CHK1、CHK2和RAD51的表達與腫瘤的分化程度、浸潤深度和臨床分期相關(P＜0.001)，而與淋巴結轉移無明顯相關性。見表2。

2.3 觀察組CHK1、CHK2和RAD51表達的相關性 觀察組CHK1 和 RAD51(r=0.42，P=0.042 3)、CHK2 和 RAD51(r=0.47，P=0.034 2)的表達具有正相關性。

表1 兩組CHK1、CHK2和RAD51表達陽性率的比較〔n(%)〕

表2 CHK1、CHK2和RAD51在觀察組不同臨床特征中的陽性表達比較〔n(%)〕

3 討論

促進胃腫瘤進展的主要是癌基因的激活和抑癌基因的失活，當基因和蛋白異常表達誘導腫瘤進展過程中，腫瘤細胞增殖活性升高，生長速度加快，侵襲能力更強〔4，5〕。CHK1 和CHK2是細胞周期檢測中最關鍵的效應蛋白激酶〔6，7〕。其異常表達可以促進腫瘤的增殖過程，也對腫瘤治療過程中治療反應有一定的判斷作用。RAD51是細胞DNA修復系統(tǒng)中的重要一員，因此其正常表達對維持其穩(wěn)定性有重要意義。由于多種因素均能引起DNA損傷，其中最嚴重的是DNA雙鏈斷裂〔8〕，因此RAD51的正常表達對其修復有重要作用，而當其異常表達可以引起損傷或修復障礙。目前已知有重組修復和非同源末端連接兩種機制參與DNA雙鏈斷裂的修復。雖然研究CHK1、CHK2和RAD51在腫瘤中的表達較多，但是學者發(fā)現(xiàn)其在不同腫瘤中的表達不一致。高麗麗等〔9〕認為CHK2在乳腺癌中高表達是促進腫瘤發(fā)生和發(fā)展的重要因素。申帥等〔10〕認為CHK1和RAD51在結腸癌中低表達進可以加速腫瘤的增殖過程。吳春等〔11〕認為CHK2在高級別漿液腺癌中高表達。鄧年豐等〔12〕認為CHK1和RAD51在舌鱗癌中高表達。因此CHK1、CHK2和RAD51在不同腫瘤中的表達并不一致，且 CHK1、CHK2和RAD51可能在同一腫瘤中的不同臨床特征或不同分化程度中的表達也不盡相同。

本研究結果提示3種蛋白高表達是促進腫瘤發(fā)生的重要因素。CHK1和CHK2作為ATM和ATE的下游效應基因，如果細胞的DNA受到損傷或破壞時，被ATM和ATR活化的CHK2通過其下游的底物磷酸酶CDC25和14-3-3蛋白來激活細胞檢測點關卡，使細胞周期阻滯在G1/S轉折處、S期和G2/M轉折處，此時發(fā)揮DNA修復的作用，如果其表達過高或明顯異常，則細胞增殖活性出現(xiàn)異常，此時可以引起細胞的異常增生，也使腫瘤細胞明顯活化，癌化過程明顯。也有學者認為CHK1和CHK2的功能還有激活轉錄、調節(jié)腫瘤細胞黏附的作用〔13，14〕。同源配對是重組修復的關鍵步驟，RAD51作為催化源配對的關鍵酶，通過對鏈配對和鏈交換的影響發(fā)揮作用。也有研究〔15〕認為RAD51可以刺激源重組和姐妹染色體的交換，引起基因的不穩(wěn)定。本文結果提示3種蛋白參與了腫瘤的進展。CHK1、CHK2和RAD51高表達時，腫瘤的侵襲增強，此時腫瘤細胞的生長活躍，細胞繁殖快，使腫瘤的體積增大。由于腫瘤的浸潤深度、分化程度和臨床分期均為腫瘤預后的重要指標，因此三者高表達時可能提示預后不良。CHK1、CHK2和RAD51可能在同一通路上起調節(jié)作用，其作用的間接途徑可能有對增殖和血管生成的調節(jié)，但是具體機制及作用途徑有待證實。

1 姚宏亮，楊竹林，李永國.胃良惡性病變組織中CHK1和PLK1的表達及意義〔J〕.中南大學學報(醫(yī)學版)，2010;35(10):1080-2.

2 Wang WJ，Wu SP，Liu JB，et al.MYC regulation of CHK1 and CHK2 promotes radioresistance in a stem cell-like population of nasopharyngeal carcinoma cells〔J〕.Cancer Res，2013;73(3):1219-31.

3 Pal J，F(xiàn)ulciniti M，Nanjappa P，et al.Targeting PI3K and RAD51 in Barrett's adenocarcinoma:impact on DNA damage checkpoints，expression profile and tumor growth〔J〕.Cancer Genomics Proteomics，2012;9(2):55-66.

4 劉愛東，龐久玲，劉士生.胃癌中基質金屬蛋白酶-9和CD105表達關系的研究〔J〕.中國老年學雜志，2009;29(4):886-7.

5 劉愛東，李 青，要瑞莉，等.MMP-14 mRNA在胃腺癌中的表達及意義〔J〕.重慶醫(yī)學，2012;41(5):439-41.

6 Huang M，Miao ZH，Zhu H，et al.Chk1 and Chk2 are differentially involved in homologous recombination repair and cell cycle arrest in response to DNA double-strand breaks induced by camptothecins〔J〕.Mol Cancer Ther，2008;7(6):1440-9.

7 Bahassi EM，Ovesen JL，Riesenberg AL，et al.The checkpoint kinases Chk1 and Chk2 regulate the functional associations between hBRCA2 andRad51 in response to DNA damage〔J〕.Oncogene，2008;27(28):3977-85.

8 Wilk A，Waligorska A，Waligorski P，et al.Inhibition of ERβ induces resistance to cisplatin by enhancing Rad51-mediated DNA repair in human medulloblastoma cell lines〔J〕.PLoS One，2012;7(3):e33867.

9 高麗麗，朱長樂.乳腺癌中CHK2、P53和RAD51的表達及意義〔J〕.臨床與實驗病理學雜志，2014;30(3):308-10.

10 申 帥，李樹根.CHK1、RAD51在結腸癌中的表達及意義〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2009;11(4):1-3.

11 吳 春，郭 慶，韋 瑋，等.卵巢漿液性腺癌組織CHK2和RSF1蛋白表達臨床意義研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2013;20(19):1517-9.

12 鄧年豐，馮云枝.舌鱗癌組織中CHK1和RAD51的表達及臨床病理意義〔J〕.口腔頜面外科雜志，2012;22(6):393-4.

13 馬全富，黃曉園，高慶蕾，等.CHK1/2和PLK1蛋白在子宮內(nèi)膜癌中的表達〔J〕.腫瘤防治研究，2008;35(6):424-6.

14 王玉祥，祝淑釵，王 鑫，等.CHK1和CHK2在食管癌組織中的表達〔J〕.腫瘤防治研究，2006;33(3):171-3.

15 Liu Q，Jiang H，Liu Z，et al.Berberine radiosensitizes human esophageal cancercells by downregulating homologous recombination repair protein RAD51〔J〕.PLoS One，2011;6(8):e23427.