老年子宮內膜樣腺癌術后組織中EZH2、NSD2和轉移抑制基因23的表達及意義

尤正芳 張 紅 (復旦大學附屬中山醫院青浦分院產科，上海 201700)

子宮內膜樣腺癌病變發展過程中基因和蛋白表達失調是重要的促進因素〔1〕。EZH2是PCG家族中的一種在進化上高度保守的基因，是唯一的H3K27甲基化催化酶〔2〕，與組蛋白甲基化修飾有關，在細胞的生長發育中起重要作用〔3〕，NSD2是一種含有SET結構域的組蛋白賴氨酸甲基轉移酶，屬于NS(D nuclear receptor binding SET domain containing)蛋白家族成員〔4〕，研究表明其蛋白的SET結構域與經典的H3K36甲基化酶SET2同源，NSD2可能是通過催化H3K36甲基化起作用的〔5〕。它們在腫瘤發生中的作用受到學者的重視〔6，7〕。轉移抑制基因(nm)23是腫瘤轉移抑制基因，其表達下調或丟失時可以促進腫瘤的發生和進展〔8〕。本文關注老年子宮內膜樣腺癌術后組織中EZH2、NSD2和nm23的表達及臨床意義。

1 材料和方法

1.1 臨床資料 收集近3年在我院行子宮內膜樣腺癌根治手術的老年患者114例作為觀察組，常規留取腫瘤組織的蠟塊，年齡60～85歲，平均69.2歲。納入均經病理醫師再次確診，并符合世界衛生組織(WHO)的診斷標準。同時收集因子宮脫垂或子宮肌瘤行全子宮切除術后的老年子宮內膜組織70例作為對照組，年齡60～83歲，平均69.0歲。兩組一般臨床資料無明顯差別(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 免疫組化檢測EZH2、NSD2和nm23蛋白的表達 EZH2、NSD2和nm23蛋白均購自武漢博士德生物工程公司，檢測均應用免疫組化SABC法。操作均由同一主管技師進行，嚴格按實驗步驟，嚴格質量控制。

1.3 EZH2、NSD2和nm23蛋白檢測結果的判定方法 EZH2和NSD2以細胞核出現棕黃色顆粒為陽性反應細胞，nm23以細胞質出現棕黃色顆粒為陽性細胞。每張切片觀察10個細胞密集的區域(400倍)，取其平均值，以陽性細胞≥25%定為陽性，以陽性細胞＜25%定為陰性。

1.4 統計學方法 采用SAS6.12軟件進行分析，組間比較采用χ2檢驗、相關分析。

2 結果

2.1 兩組EZH2、NSD2和nm23陽性表達的比較 觀察組EZH2和NSD2表達陽性率明顯高于對照組，nm23表達陽性率明顯低于對照組(P均＜0.000 1)。見表1。

2.2 EZH2、NSD2和nm23在觀察組不同臨床特征中的表達比較 觀察組EZH2、NSD2和nm23陽性表達與腫瘤的肌層浸潤深度、淋巴結轉移和Ki67表達的增殖指數密切相關。見表2。

2.3 觀察組EZH2、NSD2和nm23表達的相關性分析 觀察組中EZH2和NSD2(r=0.46，P=0.041 2)的表達具有正相關性，而 EZH2 和 nm23(r=-0.45，P=0.035 2)、NSD2 和 nm23(r=-0.43，P=0.013 2)的表達具有負相關性。

表1 兩組EZH2、NSD2和nm23陽性表達率的比較〔n(%)〕

表2 EZH2、NSD2和nm23在觀察組不同臨床特征中的表達比較〔n(%)〕

3 討論

老年人子宮內膜常伴有萎縮，而萎縮后的異常增生過程提示腫瘤性改變，此時伴有基因和蛋白的異常表達。研究認為組蛋白修飾的機制較為復雜，其氨基末端通過組蛋白乙酰化、甲基化或磷酸化進行翻譯后修飾〔9〕。EZH2作為一種組蛋白甲基轉移酶，長約40 kb，包含 20 個外顯子〔10，11〕，目前認為 EZH2 的作用有:①通過調控組蛋白乙酰化酶的活性介導轉錄抑制〔12，13〕;②通過調節組蛋白去乙酶化酶的活性，介導組蛋白去乙酰化酶依賴性基因沉默;③促進細胞增殖〔14〕。NSD2是一種含有SET結構域的組蛋白賴氨酸甲基轉移酶，屬于NSD蛋白家族成員〔15〕。NSD2存在的 SET結構域，與 H3K36甲基化酶SET2同源，因此NSD2可能對H3K36的甲基化有催化功能〔16〕。NSD2的功能有:①激活轉錄〔17〕;②調控相關基因的表達進而促進腫瘤的增殖過程〔18〕;③調節腫瘤細胞的黏附作用;④對轉移過程的調節〔19〕。nm23是一種轉移抑制基因，其編碼蛋白存在于幾乎所有正常細胞中，在高分化腫瘤中也常表達，而在低分化或具有高度轉移潛能的惡性腫瘤中不表達或低表達〔20〕，因此也有學者認為nm23是判斷腫瘤有無轉移的重要指標〔21，22〕。

本研究結果提示EZH2和NSD2高表達、nm23低表達可以有效促進腫瘤的發生過程。3種蛋白異常表達可以促進腫瘤的浸潤性生長過程和淋巴結轉移過程。3種蛋白參與腫瘤的異常增殖過程。EZH2、NSD2可以促進細胞的增殖過程，縮短細胞G1期，增加細胞S期。也有觀點認為EZH2、NSD2可以共同引導組蛋白去乙酰化，從而使RUNX3蛋白表達丟失，進而抑制腫瘤細胞的增殖〔23〕。EZH2、NSD2還可以使E-cadherin的表達下降，使細胞間的連接松散，腫瘤細胞易于脫離原發灶，進而發生轉移〔24〕。還有研究認為EZH2、NSD2可以誘導HDAC活性，介導 HDAC 依賴性基因的沉默〔14，25〕。EZH2、NSD2 和 nm23 可能具有協同作用，EZH2、NSD2之間的協同性與其自身的結構有關系，但是EZH2、NSD2與轉移抑制基因nm23的協同作用機制尚不清楚。EZH2、NSD2與細胞的增殖過程相關，而nm23也對細胞增殖有影響，因此三者作用機制是否通過腫瘤細胞的增殖過程聯系在一起呢?但是其具體調節過程及通路研究有待更多基礎實驗來證實。由于浸潤深度、淋巴結轉移和Ki67表達的增殖指數均為臨床判斷生物學行為和預后的重要指標，因此三種蛋白的異常表達可能對判斷腫瘤的生物學行為有一定價值。

1 杜善平，齊宗利，王亞琴，等.EZH2在子宮內膜癌中的表達〔J〕.山東醫藥，2012;52(25):19-21.

2 Zhao H，Xu Y，Mao Y，et al.Effects of EZH2 gene on the growth and migration of hepatocellular carcinoma HepG2 cells〔J〕.Hepatobiliary Surg Nutr，2013;2(2):78-83.

3 Wang Y，Xiang W，Wang M，et al.Methyl jasmonate sensitizes human bladder cancer cells to gambogic acid-induced apoptosis through downregulation of EZH2 expression by miR-101〔J〕.Br J Pharmacol，2014;171(3):618-35.

4 He C，Li F，Zhang J，et al.The methyltransferase NSD3 has chromatinbinding motifs，PHD5-C5HCH，that are distinct from other NSD(nuclear receptor SET domain)family members in their histone H3 recognition〔J〕.J Biol Chem，2013;288(7):4692-703.

5 Min DJ，Ezponda T，Kim MK，et al.MMSET stimulates myeloma cell growth through microRNA-mediated modulation of c-MYC〔J〕.Leukemia，2013;27(3):686-94.

6 Sasaki M，Matsubara T，Kakuda Y，et al.Immunostaining for polycomb group protein EZH2 and senescent marker p16INK4a may be useful to differentiate cholangiolocellular carcinoma from ductular reaction and bile duct adenoma〔J〕.Am J Surg Pathol，2014;38(3):364-9.

7 Yang P，Guo L，Duan ZJ，et al.Histone methyltransferase NSD2/MMSET mediates constitutive NF-κB signaling for cancer cell proliferation，survival，and tumor growth via a feed-forward loop〔J〕.Mol Cell Biol，2012;32(15):3121-31.

8 Lionello M，Blandamura S，Agostini M，et al.A prognostic role for Nm23-H1 in laryngeal carcinoma treated with postoperative radiotherapy:an introductory investigation〔J〕.Eur Arch Otorhinolaryngol，2013;270(1):197-203.

9 李海波，王 禾，武國軍.EZH2和PTEN蛋白聯合檢測與腎透明細胞癌的相關性研究〔J〕.山西醫科大學學報，2009;40(3):199-201.

10 Zhao L，Yu Y，Wu J，et al.Role of EZH2 in oral squamous cell carcinoma carcinogenesis〔J〕.Gene，2014;537(2):197-202.

11 Xu B，Abourbih S，Sircar K，et al.Enhancer of zeste homolog 2 expression is associated with metastasis and adverse clinical outcome in clear cell renal cell carcinoma:a comparative study and review of the literature〔J〕.Arch Pathol Lab Med，2013;137(10):1326-36.

12 曹相玫，郭東更，谷 雨，等.EZH2在原發性肝癌發展中的作用及臨床病理意義〔J〕.現代醫藥衛生，2012;28(23):3521-2.

13 Cai K，Wan Y，Sun G，et al.Let-7a inhibits proliferation and induces apoptosis by targeting EZH2 in nasopharyngeal carcinoma cells〔J〕.Oncol Rep，2012;28(6):2101-6.

14 唐移忠，田金華，曾定元.組蛋白甲基化轉移酶EZH2在卵巢癌組織中的表達及意義〔J〕.現代預防醫學，2009;36(10):1980-2.

15 Jaffe JD，Wang Y，Chan HM，et al.Global chromatin profiling reveals NSD2 mutations in pediatric acute lymphoblastic leukemia〔J〕.Nat Genet，2013;45(11):1386-91.

16 Huang Z，Wu H，Chuai S，et al.NSD2 is recruited through its PHD domain to oncogenic gene loci to drive multiple myeloma〔J〕.Cancer Res，2013;73(20):6277-88.

17 Oyer JA，Huang X，Zheng Y，et al.Point mutation E1099K in MMSET/NSD2 enhances its methyltranferase activity and leads to altered global chromatin methylation in lymphoid malignancies〔J〕.Leukemia，2014;28(1):198-201.

18 Kuo AJ，Cheung P，Chen K，et al.NSD2 links dimethylation of histone H3 at lysine 36 to oncogenic programming〔J〕.Mol Cell，2011;44(4):609-20.

19 Morishita M，di Luccio E.Cancers and the NSD family of histone lysine methyltransferases〔J〕.Biochim Biophys Acta，2011;1816(2):158-63.

20 Shahebrahimi K，Madani SH，Fazaeli AR，et al.Diagnostic value of CD56 and nm23 markers in papillary thyroid carcinoma〔J〕.Indian J Pathol Microbiol，2013;56(1):2-5.

21 Cubukcu E，Kanat O，Fatih Olmez O，et al.Prognostic significance of estrogen receptor，progesterone receptor，HER2/neu，Ki-67，and nm23 expression in patients with invasive breast cancer〔J〕.J Buon，2013;18(2):359-65.

22 Lionello M，Blandamura S，Lovato A，et al.A high nuclear nm23-H1 expression is associated with a better prognosis in elderly patients with laryngeal carcinoma〔J〕.Acta Otolaryngol，2013;133(8):874-80.

23 Pei H，Zhang L，Luo K，et al.MMSET regulates histone H4K20 methylation and 53BP1 accumulation at DNA damage sites〔J〕.Nature，2011;470(7332):124-8.

24 Yamada-Okabe T，Imamura K，Kawaguchi N，et al.Functional characterization of the zebrafish WHSC1-related gene，a homolog of human NSD2〔J〕.Biochem Biophys Res Commun，2010;402(2):335-9.

25 Li Y，Trojer P，Xu CF，et al.The target of the NSD family of histone lysine methyltransferases depends on the nature of the substrate〔J〕.J Biol Chem，2009;284(49):34283-95.