慢性鼻竇炎患者上頜竇黏膜細胞因子的表達

李 強 李江民 文 婧 (遵義醫學院附屬醫院耳鼻咽喉科，貴州 遵義 563000)

本研究采用鏈霉親合素-生物素過氧化物酶復合物(SABC)法檢測了兩型慢性鼻竇炎患者上頜竇黏膜局部白細胞介素(IL)-1、IL-8、干擾素(INF)-γ和粒細胞巨噬細胞刺激集落因子(GM-CSF)等細胞因子以及細胞間黏附分子(ICAM)-1、血管細胞黏附分子(VCAM)-1的表達情況，為進一步了解慢性鼻竇炎不同類型發病機制的差異提供參考數據。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年2月至2013年2月在我院接受診斷與治療的慢性鼻竇炎患者54例，其中男39例，女15例;年齡19 ～59 歲，平均(46.25±10.22)歲;根據1997 年海口慢性鼻竇炎鼻息肉臨床分型分期及內鏡手術療效評定標準將54例慢性鼻竇炎患者的疾病類型分為Ⅰ型(n=30例)和Ⅱ型(n=24例)。其中Ⅰ型組30例，男21例，女9例;年齡20～59歲，平均(46.38±10.19)歲;Ⅱ型組24 例，男18例，女 6例;年齡19～58歲，平均(46.03±10.62)歲;另外選擇同期在我院接受診斷與治療的上頜竇囊腫患者30例(對照組)，均無鼻部癥狀，其中男20 例，女10 例;年齡21～62歲，平均(46.16±10.42)歲;各組的年齡、性別比較無明顯差異，具有可比性(P＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 標本制作 手術切除上頜竇黏膜標本，常規10%甲醛固定，先在鐵模具中加入一些液態石蠟，稍微冷卻，然后再將待包埋的組織置于石蠟之中，并排列整齊，再將塑料模具盒蓋上，最后加入少許液體石蠟，進行冷凍，使石蠟變成固態〔1〕。將包埋好的組織從模具上取下來，并置于石蠟切片機上，切片機通過調節上下左右來使組織和切割方向一致，然后調節切片的厚度，切片厚度5 μm〔2～4〕。當組織載玻片置于40℃溫水中之前，要先將水浴中的氣泡趕走，以免氣泡受熱上浮而貼到組織上，組織受熱展開，最好是組織不起皺紋，用載玻片撈組織時，一般取載玻片的下1/3或者下1/2，一般每種組織撈5～6張，其中2～3張是備用的，每張載玻片上通常撈兩份組織，做對照使用，誤差較小，而且撈載玻片的時候最好方向一致，以便觀察，再將撈出來的載玻片置于架子上，放入37℃溫箱中烘干〔5〕。

1.2.2 試劑 采用SABC法〔6〕測定，試劑盒均購自北京中山生物技術公司，IL-1、IL-8、INF-γ和 GM-CSF等細胞因子以及ICAM-1、VCAM-1的單克隆抗體均由ZYMED公司生產。

1.2.3 實驗步驟 (1)常規脫蠟;(2)抗原修復;(3)血清封閉;(4)加一抗，對照組加磷酸鹽緩沖液(PBS);(5)加生物素化二抗加 SABC;(6)顯色〔7，8〕。

1.2.4 陽性細胞計數 采用雙盲法在顯微鏡下觀察計數，細胞質或細胞膜呈棕黃色者為細胞因子染色陽性細胞，每張切片觀察10個高倍視野(×400)，計算每個高倍鏡視野下陽性細胞平均數〔9，10〕。

1.3 統計學方法 應用SPSS17.0軟件行t檢驗。

2 結果

所檢上頜竇黏膜為假覆層柱狀纖毛上皮，病變區黏膜上皮有許多脫落區，上頜竇黏膜中幾種細胞因子主要由黏膜下及血管周圍的炎性細胞(如淋巴細胞、單核巨噬細胞以及部分上皮細胞)表達。Ⅰ型組黏膜肥厚增生，黏膜下有大量炎性細胞浸潤及不同程度的促炎細胞因子表達，黏附分子在黏膜下小血管上皮細胞及部分腺體細胞呈陽性表達。Ⅱ型組黏膜大部分呈息肉樣變化，高度水腫，黏膜內有多種炎性細胞浸潤及細胞因子的表達，黏附分子在黏膜下小血管上皮細胞及部分腺體細胞呈陽性表達。Ⅰ型組患者的 IL-1、IL-8、INF-γ、GM-CSF、ICAM-1、VCAM-1等細胞因子水平與對照組比較有明顯差異(t=12.32、11.54、6.74、3.25、4.18、2.68，P＜0.05)。Ⅱ型組患者的IL-1、IL-8、INF-γ、GM-CSF、ICAM-1 等細胞因子水平與對照組比較有明顯差異(t=11.22、11.87、6.98、5.01、7.23，P＜0.05)。Ⅰ型組與Ⅱ型組相比較，在IL-1、GM-CSF、ICAM-1等三個細胞因子比較有明顯差異(t=6.12、3.88、3.41，P＜0.05)。見表 1。

表1 三組患者的IL-1、IL-8、INF-γ、GM-CSF、ICAM-1、VCAM-1等細胞因子水平對比(s)

表1 三組患者的IL-1、IL-8、INF-γ、GM-CSF、ICAM-1、VCAM-1等細胞因子水平對比(s)

與對照組比較:1)P＜0.05;與Ⅱ型組比較:2)P＜0.05

GM-CSF ICAM-1 VCAM-1Ⅰ型組 30 11.12±2.301)2) 10.80±2.861) 8.55±1.931) 2.26±0.631)2) 7.22±2.501)2) 1.62±0.651)組別 n IL-1 IL-8 INF-γ.14±1.88 1.26±0.56Ⅱ型組 24 6.93±1.601) 11.11±2.121) 9.70±1.891) 5.96±1.521) 9.77±3.431) 1.34±0.77對照組 30 5.54±1.11 4.20±0.92 3.82±1.32 1.74±0.32 4

3 討論

近年文獻報道〔11〕，鼻竇炎存在局部微環境控制下的炎癥反應，其中與炎癥反應相關的細胞因子參與了慢性鼻竇炎患者的炎癥調節、免疫防御、損傷愈合等病理生理過程。目前認為細胞因子和細胞黏附分子在鼻竇炎局部微環境的炎癥反應中起重要作用。但是，目前有關細胞因子在慢性鼻竇炎發病過程中作用機制的研究結果尚不一致〔12～14〕。本研究采用SABC法檢測了兩型慢性鼻竇炎患者上頜竇黏膜局部IL-1、IL-8、INF-γ和GM-CSF等細胞因子以及ICAM-1、VCAM-1的表達情況。本研究結果表明在鼻竇炎鼻息肉組織的病理變化與細胞因子有密切的關系，并與相關學者的研究結果一致〔15〕。Ⅰ型組與Ⅱ型組IL-1、GM-CSF、ICAM-1水平有明顯差異，這可能是由于Ⅰ、Ⅱ兩型鼻竇炎在發病機制方面存在差異。

綜上，促炎細胞因子及ICAM-1在慢性鼻竇炎發病中起一定的作用，但兩型鼻竇炎起作用的細胞因子并不相同，通過對不同細胞因子類型及黏附分子的研究可進一步了解慢性鼻竇炎不同類型發病機制的差異。

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