Oct4和Wnt1在食管鱗癌中的表達(dá)及其相關(guān)性

李秀娟 金春亭 范 婕 李玉珍 李海軍 劉軍超 (河北北方學(xué)院病理教研室，河北 張家口 075000)

Wnt通路由一系列癌基因和抑癌基因編碼的蛋白質(zhì)組成，其在調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育與腫瘤發(fā)生、發(fā)展等關(guān)鍵的生理、病理過程中起重要作用〔1〕。Wnt1為Wnt通路中關(guān)鍵的信號(hào)分子。Oct4為干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，是調(diào)節(jié)胚胎及組織發(fā)育，參與胚胎干細(xì)胞和原始生殖細(xì)胞自我更新，維持細(xì)胞全能性所必需的轉(zhuǎn)錄因子〔2〕。近來研究表明 Oct4在多種腫瘤組織〔2～5〕中均有表達(dá)，提示其可能在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本實(shí)驗(yàn)研究Oct4和Wnt1蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)及相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 河北北方學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科2010年6月至2011年12月期間切除的食管癌存檔標(biāo)本蠟塊65例為食管癌組。全部病例術(shù)前未經(jīng)任何治療，經(jīng)手術(shù)后病理切片證實(shí)均為食管鱗狀細(xì)胞癌。其中高分化鱗癌16例，中分化鱗癌13例，低分化鱗癌36例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例;外膜浸潤(rùn)28例，無外膜浸潤(rùn)37例。另取24例正常食管黏膜組織作為對(duì)照組。

1.2 試劑 鼠抗人Oct4單克隆抗體，兔抗人Wnt1單克隆抗體，免疫組化二抗工作液和DAB酶底物顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物制品有限公司。

1.3 方法 采用免疫組化SP二步法進(jìn)行染色，染色過程嚴(yán)格按試劑盒規(guī)定程序進(jìn)行。切片常規(guī)脫蠟至水，經(jīng)3%過氧化氫37℃5min，于檸檬酸緩沖液加熱抗原修復(fù)15 min，滴加一抗，37℃60 min，磷酸鹽緩沖液(PBS)清洗后滴加二抗，37℃30 min，DAB顯色，中性樹膠封片。同時(shí)用PBS代替一抗作染色的陰性對(duì)照，用已知Oct4、染色陽(yáng)性的胃癌組織片分別做二者的陽(yáng)性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定 Oct4主要定位于細(xì)胞核，Wnt1主要定位于細(xì)胞質(zhì)，隨機(jī)選擇5個(gè)高倍鏡視野(200倍)按染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比綜合判定。染色強(qiáng)度:無色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分;陽(yáng)性細(xì)胞數(shù):＜5%0分，5% ～25%1分，26% ～50%2分，＞50%3分。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)得分之積，0分為陰性(-)，1～3分為弱陽(yáng)性(+)，4～5分為中度陽(yáng)性(?)，≥6 分為強(qiáng)陽(yáng)性(?)〔6〕。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn);Oct4和Wnt1表達(dá)的相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 Oct4和Wnt1在兩組中的表達(dá) Oct4和Wnt1在食管鱗癌組中的表達(dá)(63.08%，69.23%)明顯高于對(duì)照組(25%，37.5%，χ2=10.197，P=0.001;χ2=7.396，P=0.007)。

2.2 Oct4和Wnt1在食管鱗癌中的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 食管鱗癌組織中，Oct4和Wnt1蛋白的表達(dá)均與組織分化程度有關(guān)，低分化組中Oct4和Wnt1的表達(dá)率明顯高于高中分化組(P＜0.05)，且Wnt1的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率顯著高于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組(P＜0.05)。見表1。

2.3 食管鱗癌中Oct4和Wnt1表達(dá)的相關(guān)性 Spearman秩相關(guān)分析顯示:Oct4和Wnt1在食管鱗癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.383，P=0.002)。

表1 食管鱗癌Oct4和Wnt1陽(yáng)性表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(n)

3 討論

食管癌的早期癥狀不甚明顯，多數(shù)患者在確診時(shí)已達(dá)癌癥的中晚期，這是食管癌患者死亡率較高的主要原因。探討食管癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，對(duì)了解腫瘤的生物學(xué)行為，尋找新的腫瘤治療切入點(diǎn)等方面有重要的臨床意義。

Oct4是調(diào)節(jié)胚胎干細(xì)胞多聚潛能性的一種重要調(diào)節(jié)因子，其在參與胚胎干細(xì)胞和原始生殖細(xì)胞的自我更新，維持細(xì)胞全能性等方面具有重要作用。Oct4主要表達(dá)于早期生殖細(xì)胞，隨著生殖細(xì)胞的成熟其表達(dá)逐漸下調(diào)。Nichols等〔7〕將小鼠的oct4基因敲除后，由于胚胎發(fā)育早期不能形成多能性的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)最終導(dǎo)致小鼠胚胎死亡。新近研究又發(fā)現(xiàn)Oct4在生殖細(xì)胞腫瘤如睪丸生殖細(xì)胞瘤〔8〕、卵巢無性細(xì)胞瘤〔9〕和非生殖細(xì)胞腫瘤如神經(jīng)膠質(zhì)瘤〔10〕、肝癌〔2〕、胰腺癌〔3〕、乳腺癌〔4〕及肺癌〔5〕等也有表達(dá)，但在正常組織中低表達(dá)或不表達(dá)，說明Oct4與腫瘤的發(fā)生有密切關(guān)系。

本實(shí)驗(yàn)免疫組化結(jié)果提示Oct4在細(xì)胞核中的表達(dá)程度與腫瘤組織的分化程度有著密切關(guān)系，這與國(guó)外報(bào)道結(jié)論相符〔11，12〕。

Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑是調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育的重要途徑，是一條對(duì)控制胚胎發(fā)育起關(guān)鍵作用、進(jìn)化上高度保守的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑〔13〕。近來發(fā)現(xiàn)很多腫瘤的發(fā)生與Wnt信號(hào)異常有關(guān)，在食管癌的發(fā)生發(fā)展中也有Wnt信號(hào)通路異常的報(bào)道〔14〕。

Oct4和Wnt1在食管鱗癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)，提示Oct4可能與Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有某種聯(lián)系，信號(hào)通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)可能受到Oct4的調(diào)控。有研究發(fā)現(xiàn)Wnt通路直接參與小鼠胚胎干細(xì)胞的調(diào)節(jié)，影響胚胎干細(xì)胞的自我更新，Wnt通路中相關(guān)蛋白的上調(diào)可以引起 Oct4表達(dá)的增加〔15〕。Davidson等〔16〕研究表明Oct4參與了對(duì)Wnt信號(hào)通路的調(diào)節(jié)，也正是Oct4的過表達(dá)使得Wnt通路的調(diào)節(jié)異常導(dǎo)致胚胎干細(xì)胞自我更新異常，最終形成腫瘤。因此對(duì)Oct4和Wnt1進(jìn)行深入研究可以為食管癌的生物治療尋找新的靶點(diǎn)。

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