MDR1、CYP3A基因多態性對維吾爾族、漢族心力衰竭患者地高辛血藥濃度的影響

范印文，燕建鋒，賀宙斌，吳敬敬，孫 帥，張 璇，帕提曼，楊立潔

(1伊犁哈薩克自治州新華醫院，新疆伊犁835000;2新疆醫科大學第一附屬醫院)

地高辛是治療充血性心力衰竭(簡稱心衰)的常用藥，雖效果良好，但其血藥濃度不規律，且易受多種因素的影響［1］。文獻報道，大約有15%的住院患者在服用地高辛之后出現中毒癥狀［2，3］。遺傳因素即編碼P-糖蛋白(P-gp)的基因突變可能使地高辛產生活性差異，其中以多藥耐藥基因1(MDR1)C3435T基因突變具有重要意義，最終會影響其代謝、吸收和分布。細胞色素P450(CYP)是一類藥物代謝酶，個體間CYP3A的活性差異被認為是藥物利用度和清除率不同的主要原因，而地高辛也已被證實受CYP3A催化代謝。研究顯示，在控制了各種非遺傳因素后，仍有20%～95%藥物代謝的個體差異可能由遺傳因素引起［4］。2011年10月～2013年10月，我們檢測了維吾爾族、漢族心衰患者的MDR1 C3435T和CYP3A4*18B基因多態性，分析其對地高辛血藥濃度的影響。現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇資料完整的心衰患者80例，均符合以下標準:①漢族及維吾爾族患者間無血緣關系;②口服地高辛0.125 mg/(次·d)至少1周;③年齡＞18歲;④接受地高辛治療期間聯合服用的藥物基本一致。排除竇房傳導阻滯、病態竇房結綜合征、Ⅱ度及以上房室傳導阻滯、心臟瓣膜病、限制型或肥厚型心肌病、明顯肝腎功能損害、低鉀血癥、心肌梗死急性期伴有進行性心肌缺血者。其中維吾爾族40例，男27例、女13例，年齡(64.5±10.1)歲，體質量(64.8 ±11.2)kg，NYHA Ⅱ級11 例、Ⅲ級20例、Ⅳ級9例;漢族40例，男22例、女18例，年齡(62.3 ±9.8)歲，體質量(63.6 ±10.5)kg，NYHA Ⅱ級10例、Ⅲ級23例、Ⅳ級7例。兩民族年齡、性別及一般資料比較均具有可比性(P均＞0.05)。

1.2 方法

1.2.1 MDR1 C3435T、CYP3A4*18B 基因型檢測采用PCR-RFLP法。清晨抽取患者空腹靜脈血3～5 mL，EDTA抗凝，置于-70℃冰箱保存，采用非離心柱式DNA抽提法提取外周血白細胞基因組DNA。MDR1、CYP3A4基因序列均來自Ensembl數據庫，其上下游引物設計采用Primier5和Oligo軟件，由上海生工生物技術公司合成，引物序列見表1。DNA 反應體系:10×Buffer 25 μL，上下游引物(10 mmol/L)各 1 μL，ddH2O 21 μL，DNA 2 μL，共50 μL。PCR擴增條件:95℃預變性5 min，95℃變性30 s，退火 30 s，75 ℃ 延伸1 min，循環 30 次;75℃延伸5 min。PCR產物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測，紫外線下觀察并攝片。將PCR產物、酶切產物與DNA片段長度標準物比較，鑒定基因型。

表1 MDR1 C3435T、CYP3A4*18B基因引物序列、擴增長度及退火溫度

1.2.2 地高辛血藥濃度檢測 清晨抽取患者空腹靜脈血3～5 mL，EDTA抗凝，置于-80℃冰箱保存。4 000 r/min離心4～5 min，取上清。采用日立741-0050全自動生化分析儀檢測地高辛血藥濃度，嚴格按照試劑盒說明書操作。參考值為0.9～2.0 ng/mL，＞2.0 ng/mL被認為中毒。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。對患者基因分布進行Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗，計量資料采用±s表示，組間比較采用t檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基因型分布 維吾爾族、漢族心衰患者MDR1 C3435T、CYP3A4*18B基因中3個等位基因的野生型純合子(CC)、突變型雜合子(CT)與突變型純合子(TT)分布均符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(P均＞0.05)。各等位基因的基因型分布，見表2。

表2 維吾爾族、漢族MDR1 C3435T、CYP3A4*18B基因型分布［例(%)］

2.2 基因型對地高辛血藥濃度的影響 維吾爾族患者地高辛血藥濃度為(0.81±0.22)ng/mL，漢族為(1.23 ±0.24)ng/mL，P ＜0.05。兩民族 MDR1 C3435T、CYP3A4*18B不同基因型患者地高辛血藥濃度比較，見表3。

表3 兩民族不同基因型患者地高辛血藥濃度比較(ng/mL，±s)

表3 兩民族不同基因型患者地高辛血藥濃度比較(ng/mL，±s)

注:與維吾爾族同基因型比較，*P＜0.05;與同民族CC基因型比較，#P＜0.05

血藥濃度民族 n MDR1 C3435T CYP3A4*18B CC CT TT維吾爾族 40 0.74 ±0.18 0.82 ±0.15 0.79 ±0.22 0.86 ±0.18 0 CC CT TT.78 ±0.19 0.95 ±0.15漢族 40 0.76 ±0.15 1.12 ±0.17*# 1.44 ±0.13*#0.91 ±0.21 0.75 ±0.18 0.87 ±0.20

3 討論

地高辛能有效增加心肌收縮力，但其劑量過大時可直接抑制竇房結、房室結而呈現竇性心動過緩和不同程度的房室傳導阻滯。MDR1基因位于7號染色體長臂上，編碼P-gp，其中位于第26號外顯子的C3435T具有重要的意義。P-gp的主要功能是將進入細胞內的作用底物主動泵出細胞外，而MDR1 C3435T基因突變能使P-gp水平降低，進而影響藥物的吸收與代謝［5］。研究顯示，MDR1 C3435T的基因多態性存在較大種族差異。本研究對維吾爾族、漢族心衰患者MDR1 C3435T基因多態性進行檢測顯示，維吾爾族 CC、CT、TT基因型頻率分別為72.5%、20.0%、7.5%，漢族分別為 65.0%、22.5%、7.5%，分布符合Hardy-Weinberg平衡檢驗。與岑宇翔等［6］報道的漢族MDR1 C3435T基因型頻率有差異，考慮可能是研究對象數量較少以及地域差異等因素造成的。本研究發現，漢族MDR1 C3435T基因CT、TT型患者地高辛血藥濃度均高于CC型和維吾爾族同基因型患者(P均＜0.05)，而維吾爾族MDR1 C3435T各基因型患者地高辛血藥濃度比較無明顯差異(P均＞0.05)。本研究中MDR1 C3435T基因型對漢族患者血藥濃度的影響結果與Hoffmeyer、Johne等［7，8］的研究報道一致，同時他們認為 MDRT等位基因的突變使P-gp表達降低，從而導致TT型患者地高辛血藥濃度高于CC型。

CYP3A4是人類肝臟中含量最為豐富的CYP酶，約占成人肝臟酶總量的25%;大約有150多種藥物是它的底物，約占全部藥物的50%。因此，CYP3A4是影響藥物療效和安全性的重要因素之一［9］。CYP3A4*18B是日本人群中發現的一個新位點，也是CYP3A4單核苷酸多態性(SNPs)突變頻率最高的一個位點［10］，該基因的突變可能提高CYP3A4蛋白活性。本研究顯示，維吾爾族CC、CT、TT 基因型頻率分別為65.0%、26.0%、10.0%，漢族分別為 65.0%、22.5%、7.5%，分布符合 Hardy-Weinberg平衡檢驗;但是維吾爾族和漢族CYP3A4*18B各基因型患者地高辛血藥濃度比較無顯著差異(P均 ＞0.05)。與郭濤等［11］的研究結果相似。

綜上所述，MDR1 C3435T基因多態性可能會提高漢族心衰患者的地高辛血藥濃度，對維吾爾族患者則無影響;而CYP3A4*18B基因多態性對兩民族心衰患者的地高辛血藥濃度均沒有明顯影響。出現這種結果的原因可能與基因的表達調控受多種因素的影響以及本研究樣本量不夠大有關，因此下一步實驗還需擴大樣本量，并考慮多個相關基因間的連鎖作用，嚴格控制可以影響血藥濃度的各種因素。

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