阿利吉侖對阿霉素腎病小鼠腎臟的保護作用

伍巧源，廖蘊華，楊楨華，郭 誼，周穎川

(1廣西醫科大學第一附屬醫院，南寧530021;2廣西醫科大學研究生院)

腎素—血管緊張素系統(RAS)過度激活是腎臟疾病發生、發展的重要機制之一，故抑制RAS是治療腎臟病的有效途徑。但20%～40%腎臟病患者應用血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)或血管緊張素受體阻斷劑(ARB)抑制RAS后蛋白尿仍持續存在，并可能導致血管緊張素(AngⅡ)水平增高，出現醛固酮逃逸。阿利吉侖是新型腎素抑制劑，可阻斷RAS的初始步驟，使AngⅠ、AngⅡ水平明顯降低，能更徹底地阻斷RAS。有研究表明，阿利吉侖有延緩糖尿病腎病腎損害進展的作用。但在原發腎臟疾病中，阿利吉侖能否發揮良好的防治作用，相關報道較少。為此，本研究觀察了阿利吉侖對阿霉素腎病小鼠腎臟的保護作用，以探尋其對原發慢性腎臟病的治療價值。

1 材料與方法

1.1 材料 8周齡、雄性BALB/c小鼠30只，由廣西醫科大學實驗動物中心提供。采用抽簽法隨機均分為5組:正常對照組、阿霉素腎病組、阿利吉侖組、纈沙坦組及阿利吉侖+纈沙坦組。注射用鹽酸阿霉素:浙江海正藥業股份有限公司;阿利吉侖及纈沙坦:瑞士諾華制藥有限公司。

1.2 方法

1.2.1 阿霉素腎病小鼠模型的建立、分組及處理除正常對照組外，各組均一次性尾靜脈注射阿霉素(10 mg/kg)建立阿霉素腎病模型。其中，阿利吉侖組給予阿利吉侖3 mg/(kg·d);纈沙坦組給予纈沙坦5 mg/(kg·d)，阿利吉侖+纈沙坦組分別給予單用劑量。正常對照組給予一次性尾靜脈注射等量生理鹽水。成模標準為注射阿霉素6周后，小鼠出現明顯蛋白尿、低蛋白血癥等特征性改變及出現進展性腎小球硬化和腎小管間質損害。

1.2.2 血生化指標檢測 各組研究開始后第2、6周行24 h尿蛋白定量、尿蛋白/肌酐測定。在阿霉素注射后第6周處死小鼠。處死前心臟穿刺取血標本，用鄰苯三酚紅比色法檢測24 h尿蛋白定量，全自動生化分析儀檢測血清肌酐、白蛋白和膽固醇。

1.2.3 腎臟組織病理學觀察 處死小鼠后，取部分腎組織以10%甲醛固定，石蠟包埋。腎組織石蠟切片行PAS、HE和Masson染色，觀察腎組織腎小球硬化程度和腎小管損害程度。腎小球硬化程度按0～4分的半定量計分法評價:無硬化改變，為0分;硬化占整個腎小球面積的25%以下，為1分;占整個腎小球面積的26%～50%，為2分;占整個腎小球面積的51%～75%，為3分;占整個腎小球面積的76%～100%，為4分。每只小鼠至少評價30個腎小球，腎小球硬化的最終評分由所評價小鼠所有腎小球計分的平均值得出。評分采用盲法。腎小管間質的損傷定義為近端小管刷狀緣消失、腎小管擴張、萎縮以及間質纖維化形成，按程度以0～4分的半定量計分方法評價:正常，為0分;小管間質損害＜25%，為1分;小管間質損害25%～50%，為2分;小管間質損害51%～75%，為3分;小管間質損害＞75%，為4分。每只小鼠至少評價30個連續非重疊的皮質區高倍鏡下視野(×400)，最終評分由所有高倍鏡下視野計分的平均值得出，評分采用盲法。

1.2.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件，計量資料以±s表示，結果比較采用方差分析。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血生化指標比較 見表1。

表1 各組血生化指標結果比較(±s)

表1 各組血生化指標結果比較(±s)

注:與正常對照組比較，☆P＜0.05;與阿霉素腎病組比較，*P＜0.05

組別 n 24小時尿蛋白(mg)2周 6周肌酐2周 6周尿蛋白/白蛋白(g/L)膽固醇(mmol/L)肌酐(μmol/L)正常對照組 6 0.58 ±0.13 0.58 ±0.13 0.17 ±0.03 0.15 ±0.05 50.90 ±4.58 2.91 ±0.32 37.58 ±1.18阿霉素腎病組 6 2.97 ±0.88☆ 2.38 ±0.25☆ 1.09 ±0.21☆ 0.73 ±0.03☆ 32.48 ±5.43☆ 5.10 ±0.29☆ 61.61 ±3.45☆阿利吉侖組 6 2.36 ±0.39 1.25 ±0.29* 0.68 ±0.17 0.31 ±0.12* 42.12 ±5.02* 4.63 ±0.25* 50.27 ±2.76*纈沙坦組 6 2.45 ±0.55 1.46 ±0.37* 0.75 ±0.18 0.35 ±0.14* 40.75 ±6.32* 4.51 ±0.32* 51.27 ±3.26*阿利吉侖 + 纈沙坦組 6 2.25 ±0.41 1.16 ±0.27* 0.65 ±0.13 0.26 ±0.11* 43.25 ±5.89* 4.73 ±0.72 46.27 ±4.06*

2.2 各組腎臟組織病理損害情況比較 注射阿霉素6周后，與正常對照組比較，阿霉素腎病組腎臟出現局灶性節段性腎小球硬化，甚至個別球性硬化、腎間質廣泛纖維化和小管萎縮。相比于阿霉素腎病組，阿利吉侖組、纈沙坦組或阿利吉侖+纈沙坦組腎小球硬化和小管間質損害等病變均得到有效改善，其中阿利吉侖組腎小球硬化和小管間質損害程度均較纈沙坦組改善明顯，但無統計學差異;而阿利吉侖+纈沙坦組較二者單用小管間質的損害顯著改善(P＜0.05)。各組腎小球硬化半定量評分、腎小管兼職損傷半定量評分比較見表2。

表2 各組腎臟組織病理損害情況比較(分，±s)

表2 各組腎臟組織病理損害情況比較(分，±s)

注:與正常對照組比較，★P＜0.05;與阿霉素腎病組比較，*P＜0.05;與纈沙坦組比較，※P ＜0.05;與阿利吉侖組比較，▲P ＜0.05

組別 n 腎小球硬化半定量評分腎小管間質損傷半定量評分正常對照組6 0.01 ±0.00 0.01 ±0.00阿霉素腎病組 6 0.73 ±0.21★ 1.55 ±0.13★阿利吉侖組 6 0.38 ±0.17* 0.56 ±0.05*纈沙坦組 6 0.42 ±0.18* 0.65 ±0.07*阿利吉侖 ± 纈沙坦組 6 0.31 ±0.22* 0.32 ±0.04＊※▲

3 討論

慢性腎臟疾病(CKD)的主要組織學特點包括腎小球硬化、小管間質纖維化、腎小管萎縮等［1］，這些病理改變都與RAS各組分之間有著重要關系。AngⅡ是RAS的主要活性肽，AngⅡ可通過壓力依賴性途徑及非壓力依賴性途徑使腎臟出現蛋白尿、細胞外間質增多、膠原沉積等變化，最終出現腎小球硬化、腎間質纖維化［2］。抑制RAS各個環節均為腎臟病治療的有效途徑，故ACEI或ARB類藥物能延緩慢性腎臟病的進展［3，4］。盡管ACEI或ARB類藥物能很大程度上延緩慢性腎臟病的進展，但該類藥物仍有其不足之處:①ACEI或ARB可導致醛固酮逃逸。已有研究證實，醛固酮參與腎臟損傷，醛固酮逃逸者GFR下降率快于無逃逸者［5］。②長期應用ACEI，可導致AngⅠ堆積，使旁路激活，循環及組織中AngⅡ濃度逐漸回升到治療前水平，出現所謂的“AngⅡ逃逸”現象。③ARB高度特異性地拮抗血管緊張素1型受體(AT1)，阻斷了AngⅡ絕大多數的生物學功能，但長期應用可導致AngⅠ、AngⅡ升高，血管緊張素2型受體(AT2)等過度激活，導致心臟肥大或血管纖維化等不良后果。

相比于ACEI或ARB類藥物，腎素抑制劑阻斷RAS的初始步驟是使AngⅠ、AngⅡ水平明顯減低，更徹底地抑制RAS系統，減少醛固酮逃逸現象。阿利吉侖是一種非肽類腎素抑制劑，具有吸收快、水溶性好、生物利用度高和半衰期長等特點［16］。目前關于該藥的研究主要集中于糖尿病繼發腎損害。研究發現，阿利吉侖可減少糖尿病腎病小鼠蛋白尿，延緩腎小球硬化進展，而且其抑制間質纖維化的作用要強于 ACEI［7］。Parving 等［8］研究發現，阿利吉侖聯合絡沙坦可使糖尿病腎病患者尿白蛋白/肌酐下降20%，其中24.7%患者該指標下降50%。另一研究也證實，阿利吉侖與ARB聯合應用對糖尿病腎損害有協同保護作用［9］。

小鼠阿霉素腎病模型類似于人類的局灶性節段性腎小球硬化，其病理特征為進展性的腎小球硬化、小管間質損害等［10］，是研究人類腎小球疾病的重要模型之一。本研究中，所有注射阿霉素的小鼠均出現以蛋白尿、低蛋白血癥、高脂血癥和腎功能損害為特征的阿霉素腎病，與人類局灶性節段性腎小球硬化患者腎病綜合征的發展一致。給予阿霉素腎病小鼠阿利吉侖、纈沙坦及二者聯合應用后，24 h尿蛋白均有顯著改善，血清白蛋白顯著上升，明顯延緩了腎功能惡化。組織學評價顯示，阿利吉侖、纈沙坦及二者聯合應用均可明顯減輕腎小球硬化和腎小管間質損害。但二藥單用小鼠尿蛋白減少及腎間質纖維化改善程度差異無統計學意義。由于阿利吉侖可消除ARB致AngⅡ堆積的效應，二者具有聯合應用的理論基礎。已有臨床試驗證實，二者聯合應用對RAS 的抑制有協同作用［11，12］;新近有報道，慢性腎臟病患者給予ARB聯合阿利吉侖較ARB聯合苯那普利有更好的降尿白蛋白效果［13］。本研究發現，相比于二藥單用，聯合用藥后阿霉素腎病小鼠尿蛋白有下降趨勢，但是差異無統計學意義;而小管間質的損害較二者單用顯著改善，提示二者聯合應用對腎臟病理損害有協同保護效應。

綜上所述，阿利吉侖對阿霉素腎病小鼠有良好的腎臟保護作用，與ARB類藥物聯合應用具有協同保護作用。

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