改良J-G法檢測新生兒溶血病患者血清膽紅素的問題探討

葉章發(fā) 張超 桂遠(yuǎn)望

在臨床實驗中發(fā)現(xiàn), 使用改良J-G法檢測新生兒溶血病患者血清膽紅素, 當(dāng)其黃疸較為嚴(yán)重時, 實驗檢測結(jié)果存在一定問題, 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 本院排除其他嚴(yán)重疾病、且黃疸較為嚴(yán)重的新生兒溶血病患者血液標(biāo)本51例, 其中男28例, 女23例。

1.2 儀器 OLYMPUS AU-2700全自動生化分析儀。

1.3 試劑 ①國內(nèi)某品牌改良J-G法總膽紅素檢測試劑。試劑1：鹽酸0.7 mol/L , 對氨基苯磺酸20 mmol/L , 檸檬酸0.7 mol/L,咖啡因 0.18 mol/L。試劑2：亞硝酸鈉溶液20 mmol/L。②國內(nèi)某品牌改良J-G法直接膽紅素檢測試劑。試劑1：鹽酸0.3 mol/L , 對氨基苯磺酸30 mmol/L 。試劑2：亞硝酸鈉溶液10 mmol/L。③蘭森生物技術(shù)有限公司公司提供總膽紅素、直接膽紅素亞硝酸鹽法檢測試劑。RANDOX(Human-Sera分析用人血清基質(zhì))定值凍干質(zhì)量控制血清。

1.4 方法 由兒科護(hù)理人員使用真空采血管, 采集患兒股靜脈血液3.00～5.00 ml, 及時送檢驗科處理備用。首先, 準(zhǔn)確吸取離心處理后的血清0.25 ml, 使用生理鹽水倍比稀釋, 稀釋至根據(jù)肉眼觀察顏色, 判斷其大致在正常人血清總膽紅素參考值上限水平；然后, 分別吸取血清0.25 ml、各管稀釋血清0.25 ml, 放置各自檢測試管中, 上機(jī)進(jìn)行改良J-G法膽紅素項目實驗檢測；同時, 血清標(biāo)本進(jìn)行亞硝酸鹽法膽紅素項目檢測。稀釋血清結(jié)果換算：根據(jù)稀釋后血清實測值在正常人參考值上限水平左右時的檢測數(shù)據(jù), 依據(jù)稀釋倍數(shù), 換算出稀釋血清測定的實際報告值。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 檢測數(shù)據(jù)使用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。計量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

51例新生兒溶血病患者血清膽紅素測定結(jié)果：間接膽紅素為計算值, 數(shù)值等于總膽紅素測定值減去直接膽紅素測定值。改良J-G法測定總膽紅素、間接膽紅素, 血清與稀釋血清檢測結(jié)果之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)；改良J-G法稀釋血清標(biāo)本與亞硝酸鹽法血清標(biāo)本, 膽紅素項目檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 51例新生兒溶血病患者血清膽紅素測定結(jié)果( ±s, μmol/L)

表1 51例新生兒溶血病患者血清膽紅素測定結(jié)果( ±s, μmol/L)

注：與改良J-G法測定稀釋血清檢測結(jié)果比較, aP<0.01, bP>0.05

檢測項目 改良J-G(血清)改良J-G(稀釋血清)亞硝酸鹽法(血清)總膽紅素 76.5±6.0a 187.0±20.0 179.1±21.5b直接膽紅素 10.1±0.5 11.0±0.6 10.7±0.6b間接膽紅素 66.4±5.1a 176.0±19.5 168.4±20.4b

3 討論

第3版《全國臨床檢驗操作規(guī)程》中, 血清膽紅素測定首推改良J-G法。該方法試劑成本較為低廉, 試劑易于保存,檢測結(jié)果重復(fù)性尚好, 在臨床實驗室應(yīng)用較廣泛。在沒有加速劑存在時, 血清與重氮試劑反應(yīng)生成直接膽紅素, 有加速劑存在時, 所生成的則為總膽紅素；總膽紅素測定值減去直接膽紅素值測定為間接膽紅素報告值［1］。在使用國內(nèi)某較為知名的專業(yè)體外診斷試劑生產(chǎn)廠家提供的改良J-G法血清膽紅素試劑, 進(jìn)行新生兒溶血病患者血清膽紅素檢測時, 發(fā)現(xiàn)當(dāng)間接膽紅素含量大約在35.0 μmol/L以上時, 血清膽紅素檢測結(jié)果會出現(xiàn)嚴(yán)重的問題。溶血性黃疸患者, 其血清總膽紅素、間接膽紅素含量增高, 直接膽紅素濃度改變不大［2］。當(dāng)間接膽紅素水平過高, 透過血腦屏障, 可造成中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙, 如不經(jīng)治療干預(yù), 可造成永久性損害, 新生兒血清膽紅素測定是新生兒溶血病患者光照療法的重要指征［3］。廠家提供的資料, 總膽紅素的線性范圍是0～513.0 μmol/L, 直接膽紅素的線性范圍是0～256.6 μmol/L。而收集嚴(yán)重黃疸的阻塞性黃疸、肝細(xì)胞性黃疸患者的血液, 使用改良J-G法檢測血清、稀釋血清以及亞硝酸鹽法檢測血清進(jìn)行膽紅素項目比對實驗, 三者檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。據(jù)此,分析改良J-G法檢測新生兒溶血病患者血清總膽紅素時, 由于間接膽紅素含量較高, 可能因為加速劑的問題, 使其未能完全充分與重氮試劑反應(yīng), 以至總膽紅素檢測結(jié)果偏低, 相應(yīng)的換算出的間接膽紅素結(jié)果也偏低。只是令人困惑的是,嚴(yán)重黃疸的肝細(xì)胞性黃疸患者, 其血清間接膽紅素含量大大高于35.0 μmol/L, 而改良J-G法直接檢測血清, 檢測結(jié)果卻未出現(xiàn)所謂的線性問題。有報道, 測定總膽紅素, 釩酸氧化法與改良J-G法、膽紅素氧化酶法有良好的相關(guān)性［4］。該文中提及黃疸嚴(yán)重患者血清標(biāo)本的檢測, 然而卻未說明是何種性質(zhì)的黃疸。嚴(yán)重黃疸的溶血性黃疸患者, 兒童或者成人很少在臨床遇見, 故此類血清標(biāo)本很難收集, 尚未進(jìn)一步擴(kuò)大標(biāo)本, 進(jìn)行實驗對照觀察, 為了嚴(yán)謹(jǐn)起見, 擬定了此次實驗的以上題目, 問題的研究探索、尚需進(jìn)一步深入。究竟是試劑配方的問題, 還是某一試劑成分、質(zhì)量以及其他什么問題導(dǎo)致這一現(xiàn)象的產(chǎn)生, 值得認(rèn)真探討, 尤其是試劑生產(chǎn)廠家有責(zé)任研究清楚。一種試劑推向市場, 必須經(jīng)過嚴(yán)格的臨床實驗驗證, 切實保證配方成分及其質(zhì)量, 方可生產(chǎn)、銷售,以免給臨床實驗室檢測工作造成影響。在開展新項目或者更換試劑時, 實驗室工作人員應(yīng)加強(qiáng)實驗室的質(zhì)量管理, 密切聯(lián)系臨床, 嚴(yán)防檢測失誤, 影響臨床診斷、治療工作的正常進(jìn)行。在臨床工作中, 雖然可以通過稀釋血清標(biāo)本, 來解決問題, 但是其實驗過程繁瑣, 而且樣本的稀釋需肉眼判斷、人工處理, 嚴(yán)重影響工作進(jìn)程及實驗質(zhì)量, 而更換試劑似乎是簡潔實用的辦法。

［1］葉應(yīng)嫵, 王毓三, 申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程.第3版.南京:東南大學(xué)出版社, 2006:452-453.

［2］查錫良.生物化學(xué).第7版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2009:429-430.

［3］王衛(wèi)平.兒科學(xué).第8版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2013:123-126.

［4］賈麗霞, 張紅艷, 程書珍.3種血清總膽紅素測定方法的比較.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2007, 16(24):3462-3463.