血府逐瘀湯及桔梗、牛膝對大鼠不同臟器中環核苷酸水平的影響*

吳承峰 劉 敏 陳菁菁 唐德才

（1.鐘山職業技術學院，江蘇 南京 210049；2.南京中醫藥大學，江蘇 南京 210023）

目前在血府逐瘀湯的研究中，對于引經藥桔梗、牛膝對全方效用的影響尚未見報道。筆者以慢性氣滯血瘀模型大鼠為載體，在前期研究基礎上［1-2］，采用ELISA法，觀察桔梗、牛膝不同配伍的血府逐瘀湯對血瘀證模型大鼠各臟器組織中 cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP比值的影響，以期探明桔梗、牛膝的配伍意義及引經作用。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 清潔級健康成年SD大鼠90只，全雄性，體質量（200±20） g，由浙江省實驗動物中心提供，許可證號：SCXK（浙）20080033。其隨機分為空白組、模型組、全方組、全方無桔梗組、全方無牛膝組、全方無桔梗牛膝組、桔梗牛膝配伍組、桔梗組、牛膝組共9組，每組各10只。

1.2 藥物與試劑 （1）藥物。血府逐瘀湯方中各藥均購自南京中醫藥大學國醫堂門診部并經南京中醫藥大學中藥鑒定學教研室鑒定。組成及劑量參照成人（體質量 60 kg）的用量比例：桃仁 12 g，紅花 9 g，當歸 9 g，生地黃 9 g，川芎 4.5 g，赤芍 6 g，牛膝 9 g，桔梗 4.5 g，柴胡3 g，枳殼6 g，甘草3 g。并由國醫堂門診部提供并進行制備煎液及水浴濃縮，每日1劑。鹽酸腎上腺素注射液（天津金耀氨基酸有限公司）；氯化鈉注射液（中國廣州百特醫療用品有限公司）。（2）試劑。大鼠環磷酸腺苷（cAMP）ELISA試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供；大鼠環磷酸鳥苷（cGMP）ELISA試劑盒由上海西唐生物科技有限公司提供。

1.3 動物模型制備 參考文獻方法［3］，采用連續多次小劑量皮下注射腎上腺素（0.1%Adr），模擬較長時間大怒及情感焦慮狀態，制備氣滯血瘀動物模型。具體操作方法：用0.9%氯化鈉注射液10 mL將0.1%鹽酸腎上腺素注射液稀釋為0.01%鹽酸腎上腺素注射液，注射劑量為0.08 mg/kg體質量，頸背部皮下注射，每日1次，連續7 d。空白組于相同部位、相同時間注射等量0.9%氯化鈉注射液。各組動物均在最后一次注射鹽酸腎上腺素注射液后24 h處死。

1.4 給藥方法 自造模之日起，各實驗組分別灌胃中藥水煎濃縮液（1 mL/100 g），其中全方組含生藥1.27 g/mL、全方無桔梗組1.18 g/mL、全方無牛膝組1.12 g/mL、全方無桔梗牛膝組1.03 g/mL、桔梗牛膝組0.23 g/mL、牛膝配伍組 0.15 g/mL、桔梗組 0.08 g/mL，每日 1次，連續7 d。模型組、空白組分別灌胃0.9%氯化鈉注射液1 mL/100 g。

1.5 檢測指標及方法 上述各組動物處死后，立即剖取其心、肺、肝、腎組織，各組織分別取約50 mg。所取組織用生理鹽水沖洗其上之血液或內容物，放入盛有2 mL冷醋酸緩沖液（pH值4.75、濃度50 mmol/L）的試管中，立即冰浴勻漿，懸浮液加入無水乙醇2 mL，混勻，靜置 5min，3500 r/min離心 15min，收集上清液。再用75%乙醇2 mL洗沉淀物，混勻，3500 r/min離心15min。合并上清液，60℃烘箱中烘干。ELISA法測定各臟器組織中cAMP、cGMP含量及cAMP/cGMP比值，測定方法嚴格按照試劑盒說明書操作。

1.6 統計學處理 應用SPSS11.5統計軟件。計量資料以 （）表示，多組主要定量指標采用One-Way ANOAY方差分析，兩組間比較采用LSD及S-N-K分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組大鼠各臟器組織中cAMP的比較 見表1。（1）心臟組織。與空白組比較，模型組cAMP水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，各給藥組對cAMP水平均有降低趨勢，其中以全方組、無牛膝組明顯（P＜0.05）；其他各組雖有減少，但無統計學意義（P＞0.05）。與全方組比較，桔梗牛膝配伍組降低cAMP水平較弱（P＜0.05）。與牛膝組比較，全方組、全方無牛組、全方無桔梗牛膝組均有顯著差異 （P＜0.01），全方無桔梗組、桔梗組亦有顯著差異（P＜0.05）。（2）肺臟組織。與空白組比較，模型組cAMP水平降低，但無統計學意義（P＞0.05）。各用藥組之間比較，雖有數據上的差異，但是影響無規律，且無統計學意義（P＞0.05）。（3）肝臟組織。與空白組比較，模型組cAMP水平明顯升高（P＜0.05）。與模型組比較，各給藥組對cAMP水平均有降低趨勢，其中以全方組、全方無桔組、全方無桔梗牛膝組作用較明顯（P＜0.01）；牛膝組作用明顯（P＜0.05）；與桔梗牛膝配伍組、桔梗組比較，全方組、全方無桔梗組有顯著差異（P＜0.01）；全方無桔梗牛膝組、牛膝組亦有顯著差異（P＜0.05）。與牛膝組比較，桔梗牛膝配伍組、桔梗組有顯著差異（P＜0.05）。（4）腎臟組織。與空白組比較，模型組cAMP水平降低，但無統計學意義（P＞0.05）。各用藥組之間比較，雖有數據上的差異，但是影響無規律，且無統計學意義（P＞0.05）。

表1 對大鼠各臟器組織中cAMP的影響結果（pmol/mL，）

表1 對大鼠各臟器組織中cAMP的影響結果（pmol/mL，）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與全方組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與無桔組比較，★P＜0.05，★★P＜0.01；與桔牛組比較，■P＜0.05，■■P＜0.01；與桔梗組比較，●P＜0.05，●●P＜0.01。與牛膝組比較，※P＜0.05，※※P＜0.01。

2.2 對大鼠各臟器組織中cGMP的影響 見表2。（1）心臟組織。與空白桔梗牛膝配伍組比較，模型組cGMP水平明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，各給藥組對cGMP水平均有明顯降低趨勢（P＜0.01）。與全方組比較，桔梗牛膝配值組、桔梗組、牛膝組降低cGMP水平較弱。（2）肺臟組織。與空白組比較，模型組cGMP水平明顯降低（P＜0.01）。與模型組比較，全方組對cGMP水平升高趨勢最為明顯（P＜0.01）。與全方組比較，全方無桔梗牛膝組升高cGMP水平較弱（P＜0.05），其他各組升高趨勢更弱，有顯著差異（P＜0.01）。（3）肝臟組織。與空白組比較，模型組cGMP水平明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，各給藥組對cGMP水平均有降低趨勢，其中桔梗組較明顯（P＜0.05）；其他各組作用均非常明顯（P＜0.01）。（4）腎臟組織。與空白組比較，模型組cGMP水平明顯降低（P＜0.01）。與無全方牛膝組比較，全方無桔梗牛膝組、牛膝組水平有明顯差異（P＜0.05）。

表2 對大鼠各臟器組織中cGMP的影響結果（pmol/mL，）

表2 對大鼠各臟器組織中cGMP的影響結果（pmol/mL，）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與全方組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與無牛組比較，■P＜0.05，■■P＜0.01。

2.3 對大鼠各臟器組織中cAMP/cGMP比值的影響見表3。（1）心臟組織。與模型組比較，牛膝組對cAMP/cGMP比值升高趨勢較明顯（P＜0.01）。與桔梗組比較，牛膝組對比值升高作用較弱（P＜0.05）。（2）肺臟組織。與空白組比較，模型組比值明顯升高（P＜0.05）。組間比較，全方無桔梗組與全方無桔梗牛膝組作用差異明顯（P＜0.05），其中全方無桔梗組對模型組比值影響較小，而全方無桔梗牛膝組則影響較大。（3）肝臟組織。與模型組比較，全方無牛膝組、桔梗牛膝配伍組對比值有明顯升高趨勢（P＜0.05）。（4）腎臟組織。與空白組比較，模型組比值水平明顯降低（P＜0.01）。與牛膝組比較，全方組作用有明顯差異（P＜0.05），全方無牛膝組作用有極明顯差異（P＜0.01）。

表3 對大鼠各臟器組織中cAMP/cGMP的影響結果（pmol/mL，）

與空白組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01； 與全方組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與無桔組比較，■P＜0.05，■■P＜0.01； 與牛膝組比較，●P＜0.05，●●P＜0.01。

3 結 論

cAMP、cGMP在體內各組織普遍存在，是細胞功能的重要調節物質；cAMP、cGMP對多種信息，尤其是藥物的刺激非常靈敏，且各組織臟器中的含量水平，基本上可反映其細胞功能的某一動態平衡狀態。研究發現，許多中藥均是通過調節體內環核苷酸含量而起作用；反之，從環核苷含量變化中亦可觀察到中藥對機體的影響以及對疾病的療效［4-5］。近年來，不少學者對cAMP、cGMP隨“陰陽盛衰”而變化的現象作了大量研究，表明它們之間存在著類似中醫陰陽學說的相互矛盾及對立統一的關系［6］。

本研究表明，血瘀模型組心、肝組織中cAMP、cGMP含量明顯升高，而肺腎組織中cAMP、cGMP含量卻呈現降低趨勢，對cAMP/cGMP比值的影響則正好相反。從各用藥組數據分析，含桔梗的用藥組心臟組織中cAMP、cGMP水平明顯降低，而含牛膝的用藥組則降低均不明顯。對肝臟中cAMP含量的影響卻恰恰相反，即含牛膝的用藥組肝臟組織中cAMP水平明顯降低，而含桔梗的用藥組則降低不明顯。肝臟組織中cGMP的變化，除桔梗組外，其他各組作用均非常明顯，表明桔梗、牛膝確實能影響心、肝組織中cAMP和cGMP的分布水平，這與桔梗“載藥上行”、牛膝“引藥下行”的引經理論正相符合。對肺、腎組織中cAMP的影響雖有數據上的差異，但無統計學意義，提示可能與血府逐瘀湯主要用于“血府”血瘀證有關，其部位雖在胸中，但血瘀證主要與心、肝關系密切。

對肺臟組織中cGMP的影響，以全方組對cGMP水平升高影響最為明顯。與全方組比較，無桔梗牛膝組cGMP水平升高較弱，其他各組升高趨勢更弱。提示全方組效果最好，而桔梗牛膝配伍則會影響藥物在肺臟中的分布，說明牛膝“引藥下行”之功可能影響桔梗“載藥上行”特性。對腎臟組織中cGMP的影響，則以牛膝組和無桔梗組最明顯，無牛膝組則作用最弱，提示牛膝確能增加cGMP在腎臟中的分布，通過觀察對各臟器組織中cAMP/cGMP比值的影響，也發現有此規律。

綜上，研究證實桔梗確有“載藥上行”之功，能增加藥物在心肺中的分布；而牛膝確有“引藥下行”之力，能增加藥物在肝腎中的分布；桔梗與牛膝單獨使用，或單獨配伍多起拮抗作用，但在全方中配伍卻起協同作用，這也正是中醫組方精妙之所在。

［1］陳菁菁，劉敏，唐德才.血府逐瘀湯及桔梗、牛膝配伍對血清NO、血漿ET-1的影響［J］.遼寧中醫藥大學學報，2011，13（11）：123-124.

［2］劉敏，唐德才，陳菁菁.血府逐瘀湯及方中桔梗、牛膝對血管內皮細胞黏附分子表達的影響［J］.遼寧中醫藥大學學報，2012，14（1）：76-78.

［3］和嵐，蔣文躍，毛騰敏.注射腎上腺素模擬“氣滯”復制急、慢性血瘀模型初探［J］.中國中西醫藥結合雜志，2004，24（3）：244-246.

［4］王樹榮，翟繼偉，蓋英臣，等.天麻、桔梗、元胡歸經的實驗研究［J］.上海中醫藥雜志，1995，41（1）：44-46.

［5］王樹榮，孫冰，丁國明.中藥歸經的實驗研究［J］.中國中藥雜志，1994，19（8）：500-502.

［6］王淑美，徐曉玉.滋陰清熱藥對環核苷酸的影響［J］.藥學專論，2003，12（7）：26-27.