B7-H1啟動子熒光素酶報告基因載體的構(gòu)建及活性檢測

吳勝昔，陳永文，朱廣倍，費 蕾，吳玉章*

(1.重慶理工大學 藥學與生物工程學院， 重慶 400054； 2.第三軍醫(yī)大學 基礎(chǔ)部 免疫學教研室，重慶 400017)

B7-H1啟動子熒光素酶報告基因載體的構(gòu)建及活性檢測

吳勝昔1，陳永文2，朱廣倍1，費 蕾2，吳玉章2*

(1.重慶理工大學 藥學與生物工程學院， 重慶 400054； 2.第三軍醫(yī)大學 基礎(chǔ)部 免疫學教研室，重慶 400017)

目的構(gòu)建含B7-H1啟動子的熒光素酶報告基因載體，轉(zhuǎn)染肝癌HepG2細胞進行活性檢測。方法PCR擴增B7-H1啟動子上游區(qū)域基因片段，并插入到含有熒光素酶報告基因的載體PGL3-Basic中構(gòu)建重組子，經(jīng)雙酶切和測序鑒定后，將重組子轉(zhuǎn)染HepG2細胞，用雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)檢測熒光素酶表達活性。結(jié)果成功地構(gòu)建了6種不同長度的PGL3-B7-H1-Luc熒光素酶表達質(zhì)粒，分別命名為P88、P175、P203、P398、P723和P960。瞬時轉(zhuǎn)染HepG2后經(jīng)報告基因檢測，P175、 P203、 P398、 P723和P960所含5段啟動子均具有轉(zhuǎn)錄活性，IFN-γ作用后啟動子活性明顯增強，而P88轉(zhuǎn)染組IFN-γ作用后，熒光素酶活性無顯著變化。結(jié)論成功構(gòu)建了B7-H1啟動子的熒光素酶報告基因載體。

B7-H1；啟動子；雙熒光素酶報告基因檢測；活性測定

共刺激分子是一類細胞膜表面分子，其可為T、B細胞的活化提供輔助信號，從而調(diào)節(jié)細胞增殖、活化及分化。而缺乏共刺激信號的抗原刺激易引起T細胞的耐受、無反應(yīng)性和細胞調(diào)亡[1]。近年研究表明共刺激信號通路參與了腫瘤的免疫逃逸，而通過共刺激信號途徑來誘導T細胞的免疫效應(yīng)功能進而治療腫瘤是個非常有前景的研究[2]。最近，在共刺激分子與腫瘤相互關(guān)系的研究中，人們的注意力集中在了新型的B7家族共刺激分子尤其是B7-H1(B7 homolog 1)分子上。……