金銀花組織培養與快速繁殖研究

劉敏杰

摘 要：為了研究金銀花的離體快繁技術，采用不同培養基配方對金銀花的芽尖進行誘導、增殖并生根處理。結果表明：叢生芽誘導以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養基為宜；增殖培養以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培養基為宜，可獲得理想的效果，增殖倍數可達3.7倍；在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培養基上，可形成較發達的根系；試管苗移栽對基質要求不嚴，移栽到疏松透氣的蛭石+珍珠+園土（1∶1∶1）混合基質中，成活率高達92%。

關鍵詞：金銀花；組織培養；快速繁殖；培養基配方

中圖分類號 R282.2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）21-21-02

金銀花（Lonicera japonica Thunb.）是忍冬科忍冬屬的多年生半常綠藤本植物，是一種珍貴的觀賞植物，也是我國特有的名貴中藥材，具有清熱、解毒、抗菌、增強免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播種繁殖是金銀花的常用繁殖方式，然而這2種繁殖方式都易造成金銀花植株攜帶病毒、細菌等，使植株生長不良，生產性能下降，植株及產品品質下降。通過組織培養的方式繁育金銀花種苗，可使金銀花植株脫毒，且繁殖速度快、繁殖系數高，從而提高金銀花的產量和質量[2]。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 信陽當地野生金銀花，采自河南信陽前進鄉三橋村。

1.2 實驗方法

1.2.1 外植體滅菌 取頂芽作為外植體，沖洗2～3遍，在低濃度的洗衣粉溶液中浸泡30min，再用軟刷刷洗，流水沖洗干凈。將外植體置于超凈工作臺中，用75%酒精浸泡30s，無菌水沖洗2～3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，無菌水沖洗4～5次，然后用消毒濾紙吸干表面水分，備用[3]。

1.2.2 誘導培養 金銀花誘導培養選用MS作為基礎培養基，并加入不同種類和配比的植物生長物質。將經過消毒滅菌處理的外植體，分別接種于不同培養基中，每種處理接30瓶，每瓶接種1個外植體，重復3次，篩選出芽萌動率高的培養基。

1.2.3 增殖培養 增殖培養以MS培養基加不同種類的細胞分裂素，將叢生芽分別接種于繼代培養基中進行金銀花的增殖培養。每種處理接種30瓶，每瓶接種1個外植體，重復3次，觀察不定芽的分化情況，選出分化率較高的激素配比。

1.2.4 生根培養 待叢生芽長至2cm高時，轉接到1/2MS及1/2MS加不同濃度IBA的生根培養基上，并各加0.15%的活性炭。每種處理接種30個幼苗，重復3次，觀察不定根的形成過程，選出最佳生根培養基。

1.2.5 培養條件 MS培養基中蔗糖濃度為30g·L-1，1/2MS培養基中的蔗糖濃度為20g·L-1，瓊脂濃度均為7g·L-1，pH值為6.0。接種材料置于培養箱中，設定溫度為24～26℃，光照強度為1 500～2 000lx，光照時間為12～14h/d。

1.3 馴化移栽 把生根好的試管苗拿到室溫下，不打開瓶蓋煉苗1～2d后，再打開瓶蓋煉苗3～5d。然后取出試管苗，洗凈根部粘附的培養基，栽植于配比為蛭石∶珍珠巖∶園土為1∶1∶1的基質中，澆透水，蓋上塑料薄膜，并注意保溫、保濕。當金銀花試管苗長出新葉時，煉苗移栽就真正成功了，觀察并統計成活率。

2 結果與分析

2.3 不同培養基對試管苗生根的影響 從表3可以看出，芽苗在5種不同的生根培養基上均能生根，根的數量和長度隨IBA濃度的提高而增加；當IBA濃度為3.0mg·L-1時，植株生長健壯，葉色濃綠。因此，適宜金銀花生根的最佳培養基為1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

2.4 生根苗馴化移栽結果 試驗結果表明，金銀花試管苗在栽培基質上，移栽成活率高，幼苗生長健壯，葉色嫩綠，成活率高達92%。

3 結論與討論

植物生長物質的種類，以及細胞分裂素與生長素的比例，對植物組織分化出苗或快速增殖影響十分顯著。6-BA主要作用于芽的分化、促進側芽萌發生長[4]。NAA具有較低濃度下促進細胞生長，高濃度下促進細胞成熟衰老的作用。IBA是試管苗生根中最常用的生根劑之一[5]，其濃度過低，不能很好地促進組培苗生根，濃度過高，則會誘導出大量的愈傷組織，從而降低生根率[6]。本次實驗結果表明，6-BA濃度過高也會抑制腋芽的形成，一定濃度的NAA有利于促進腋芽生長，只有生長素和細胞分裂素同時存在時才能很好地誘導叢生芽。IBA為3.0mg·L-1時，植株生長健壯，葉色濃綠。

參考文獻

[1]石任兵，陸蘊如.我國藥用金銀花資源、化學成分及藥理研究進展[J].中國藥學雜志，1999，34（11）：724-727.

[2]梁小梅，龔福寶.金銀花快繁的研究現狀[J].河北林業科技，2009，4.

[3]趙賢慧，劉慶華，張德鋒.紅金銀花組織培養外植體滅菌的研究[J].江蘇林業科技，2007，34（1）.

[4]李明軍.懷山藥組織培養及應用[M].北京：科學出版社，2004，20.

[5]李明軍，陳明霞，洪森榮，等.NAA、IBA和PP333對懷山藥試管苗生長發育的影響 [J].廣西植物，2004，24（4）：376-379.

[6]陳明霞，張曉麗，龔玉佳，等.“金峰一號”金銀花組織培養技術研究[J].北方園藝，2010（23）：126-129. （責編：張宏民）endprint

摘 要：為了研究金銀花的離體快繁技術，采用不同培養基配方對金銀花的芽尖進行誘導、增殖并生根處理。結果表明：叢生芽誘導以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養基為宜；增殖培養以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培養基為宜，可獲得理想的效果，增殖倍數可達3.7倍；在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培養基上，可形成較發達的根系；試管苗移栽對基質要求不嚴，移栽到疏松透氣的蛭石+珍珠+園土（1∶1∶1）混合基質中，成活率高達92%。

關鍵詞：金銀花；組織培養；快速繁殖；培養基配方

中圖分類號 R282.2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）21-21-02

金銀花（Lonicera japonica Thunb.）是忍冬科忍冬屬的多年生半常綠藤本植物，是一種珍貴的觀賞植物，也是我國特有的名貴中藥材，具有清熱、解毒、抗菌、增強免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播種繁殖是金銀花的常用繁殖方式，然而這2種繁殖方式都易造成金銀花植株攜帶病毒、細菌等，使植株生長不良，生產性能下降，植株及產品品質下降。通過組織培養的方式繁育金銀花種苗，可使金銀花植株脫毒，且繁殖速度快、繁殖系數高，從而提高金銀花的產量和質量[2]。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 信陽當地野生金銀花，采自河南信陽前進鄉三橋村。

1.2 實驗方法

1.2.1 外植體滅菌 取頂芽作為外植體，沖洗2～3遍，在低濃度的洗衣粉溶液中浸泡30min，再用軟刷刷洗，流水沖洗干凈。將外植體置于超凈工作臺中，用75%酒精浸泡30s，無菌水沖洗2～3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，無菌水沖洗4～5次，然后用消毒濾紙吸干表面水分，備用[3]。

1.2.2 誘導培養 金銀花誘導培養選用MS作為基礎培養基，并加入不同種類和配比的植物生長物質。將經過消毒滅菌處理的外植體，分別接種于不同培養基中，每種處理接30瓶，每瓶接種1個外植體，重復3次，篩選出芽萌動率高的培養基。

1.2.3 增殖培養 增殖培養以MS培養基加不同種類的細胞分裂素，將叢生芽分別接種于繼代培養基中進行金銀花的增殖培養。每種處理接種30瓶，每瓶接種1個外植體，重復3次，觀察不定芽的分化情況，選出分化率較高的激素配比。

1.2.4 生根培養 待叢生芽長至2cm高時，轉接到1/2MS及1/2MS加不同濃度IBA的生根培養基上，并各加0.15%的活性炭。每種處理接種30個幼苗，重復3次，觀察不定根的形成過程，選出最佳生根培養基。

1.2.5 培養條件 MS培養基中蔗糖濃度為30g·L-1，1/2MS培養基中的蔗糖濃度為20g·L-1，瓊脂濃度均為7g·L-1，pH值為6.0。接種材料置于培養箱中，設定溫度為24～26℃，光照強度為1 500～2 000lx，光照時間為12～14h/d。

1.3 馴化移栽 把生根好的試管苗拿到室溫下，不打開瓶蓋煉苗1～2d后，再打開瓶蓋煉苗3～5d。然后取出試管苗，洗凈根部粘附的培養基，栽植于配比為蛭石∶珍珠巖∶園土為1∶1∶1的基質中，澆透水，蓋上塑料薄膜，并注意保溫、保濕。當金銀花試管苗長出新葉時，煉苗移栽就真正成功了，觀察并統計成活率。

2 結果與分析

2.3 不同培養基對試管苗生根的影響 從表3可以看出，芽苗在5種不同的生根培養基上均能生根，根的數量和長度隨IBA濃度的提高而增加；當IBA濃度為3.0mg·L-1時，植株生長健壯，葉色濃綠。因此，適宜金銀花生根的最佳培養基為1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

2.4 生根苗馴化移栽結果 試驗結果表明，金銀花試管苗在栽培基質上，移栽成活率高，幼苗生長健壯，葉色嫩綠，成活率高達92%。

3 結論與討論

植物生長物質的種類，以及細胞分裂素與生長素的比例，對植物組織分化出苗或快速增殖影響十分顯著。6-BA主要作用于芽的分化、促進側芽萌發生長[4]。NAA具有較低濃度下促進細胞生長，高濃度下促進細胞成熟衰老的作用。IBA是試管苗生根中最常用的生根劑之一[5]，其濃度過低，不能很好地促進組培苗生根，濃度過高，則會誘導出大量的愈傷組織，從而降低生根率[6]。本次實驗結果表明，6-BA濃度過高也會抑制腋芽的形成，一定濃度的NAA有利于促進腋芽生長，只有生長素和細胞分裂素同時存在時才能很好地誘導叢生芽。IBA為3.0mg·L-1時，植株生長健壯，葉色濃綠。

參考文獻

[1]石任兵，陸蘊如.我國藥用金銀花資源、化學成分及藥理研究進展[J].中國藥學雜志，1999，34（11）：724-727.

[2]梁小梅，龔福寶.金銀花快繁的研究現狀[J].河北林業科技，2009，4.

[3]趙賢慧，劉慶華，張德鋒.紅金銀花組織培養外植體滅菌的研究[J].江蘇林業科技，2007，34（1）.

[4]李明軍.懷山藥組織培養及應用[M].北京：科學出版社，2004，20.

[5]李明軍，陳明霞，洪森榮，等.NAA、IBA和PP333對懷山藥試管苗生長發育的影響 [J].廣西植物，2004，24（4）：376-379.

[6]陳明霞，張曉麗，龔玉佳，等.“金峰一號”金銀花組織培養技術研究[J].北方園藝，2010（23）：126-129. （責編：張宏民）endprint

摘 要：為了研究金銀花的離體快繁技術，采用不同培養基配方對金銀花的芽尖進行誘導、增殖并生根處理。結果表明：叢生芽誘導以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培養基為宜；增殖培養以MS+6-BA2.0mg·L-1+NAA0.2mg·L-1培養基為宜，可獲得理想的效果，增殖倍數可達3.7倍；在1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭培養基上，可形成較發達的根系；試管苗移栽對基質要求不嚴，移栽到疏松透氣的蛭石+珍珠+園土（1∶1∶1）混合基質中，成活率高達92%。

關鍵詞：金銀花；組織培養；快速繁殖；培養基配方

中圖分類號 R282.2 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）21-21-02

金銀花（Lonicera japonica Thunb.）是忍冬科忍冬屬的多年生半常綠藤本植物，是一種珍貴的觀賞植物，也是我國特有的名貴中藥材，具有清熱、解毒、抗菌、增強免疫力等功效[1]。扦插繁殖和播種繁殖是金銀花的常用繁殖方式，然而這2種繁殖方式都易造成金銀花植株攜帶病毒、細菌等，使植株生長不良，生產性能下降，植株及產品品質下降。通過組織培養的方式繁育金銀花種苗，可使金銀花植株脫毒，且繁殖速度快、繁殖系數高，從而提高金銀花的產量和質量[2]。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 信陽當地野生金銀花，采自河南信陽前進鄉三橋村。

1.2 實驗方法

1.2.1 外植體滅菌 取頂芽作為外植體，沖洗2～3遍，在低濃度的洗衣粉溶液中浸泡30min，再用軟刷刷洗，流水沖洗干凈。將外植體置于超凈工作臺中，用75%酒精浸泡30s，無菌水沖洗2～3次，再用0.1%升汞溶液消毒5min，無菌水沖洗4～5次，然后用消毒濾紙吸干表面水分，備用[3]。

1.2.2 誘導培養 金銀花誘導培養選用MS作為基礎培養基，并加入不同種類和配比的植物生長物質。將經過消毒滅菌處理的外植體，分別接種于不同培養基中，每種處理接30瓶，每瓶接種1個外植體，重復3次，篩選出芽萌動率高的培養基。

1.2.3 增殖培養 增殖培養以MS培養基加不同種類的細胞分裂素，將叢生芽分別接種于繼代培養基中進行金銀花的增殖培養。每種處理接種30瓶，每瓶接種1個外植體，重復3次，觀察不定芽的分化情況，選出分化率較高的激素配比。

1.2.4 生根培養 待叢生芽長至2cm高時，轉接到1/2MS及1/2MS加不同濃度IBA的生根培養基上，并各加0.15%的活性炭。每種處理接種30個幼苗，重復3次，觀察不定根的形成過程，選出最佳生根培養基。

1.2.5 培養條件 MS培養基中蔗糖濃度為30g·L-1，1/2MS培養基中的蔗糖濃度為20g·L-1，瓊脂濃度均為7g·L-1，pH值為6.0。接種材料置于培養箱中，設定溫度為24～26℃，光照強度為1 500～2 000lx，光照時間為12～14h/d。

1.3 馴化移栽 把生根好的試管苗拿到室溫下，不打開瓶蓋煉苗1～2d后，再打開瓶蓋煉苗3～5d。然后取出試管苗，洗凈根部粘附的培養基，栽植于配比為蛭石∶珍珠巖∶園土為1∶1∶1的基質中，澆透水，蓋上塑料薄膜，并注意保溫、保濕。當金銀花試管苗長出新葉時，煉苗移栽就真正成功了，觀察并統計成活率。

2 結果與分析

2.3 不同培養基對試管苗生根的影響 從表3可以看出，芽苗在5種不同的生根培養基上均能生根，根的數量和長度隨IBA濃度的提高而增加；當IBA濃度為3.0mg·L-1時，植株生長健壯，葉色濃綠。因此，適宜金銀花生根的最佳培養基為1/2MS+IBA3.0mg·L-1+0.15%活性炭。

2.4 生根苗馴化移栽結果 試驗結果表明，金銀花試管苗在栽培基質上，移栽成活率高，幼苗生長健壯，葉色嫩綠，成活率高達92%。

3 結論與討論

植物生長物質的種類，以及細胞分裂素與生長素的比例，對植物組織分化出苗或快速增殖影響十分顯著。6-BA主要作用于芽的分化、促進側芽萌發生長[4]。NAA具有較低濃度下促進細胞生長，高濃度下促進細胞成熟衰老的作用。IBA是試管苗生根中最常用的生根劑之一[5]，其濃度過低，不能很好地促進組培苗生根，濃度過高，則會誘導出大量的愈傷組織，從而降低生根率[6]。本次實驗結果表明，6-BA濃度過高也會抑制腋芽的形成，一定濃度的NAA有利于促進腋芽生長，只有生長素和細胞分裂素同時存在時才能很好地誘導叢生芽。IBA為3.0mg·L-1時，植株生長健壯，葉色濃綠。

參考文獻

[1]石任兵，陸蘊如.我國藥用金銀花資源、化學成分及藥理研究進展[J].中國藥學雜志，1999，34（11）：724-727.

[2]梁小梅，龔福寶.金銀花快繁的研究現狀[J].河北林業科技，2009，4.

[3]趙賢慧，劉慶華，張德鋒.紅金銀花組織培養外植體滅菌的研究[J].江蘇林業科技，2007，34（1）.

[4]李明軍.懷山藥組織培養及應用[M].北京：科學出版社，2004，20.

[5]李明軍，陳明霞，洪森榮，等.NAA、IBA和PP333對懷山藥試管苗生長發育的影響 [J].廣西植物，2004，24（4）：376-379.

[6]陳明霞，張曉麗，龔玉佳，等.“金峰一號”金銀花組織培養技術研究[J].北方園藝，2010（23）：126-129. （責編：張宏民）endprint