丹酚酸B熱穩定性研究

晉迎申

摘 要 目的：考查不同因素對丹酚酸B溶液穩定性的影響，為工業化生產應用提供實驗依據。方法：通過HPLC檢測溶液中丹酚酸B的含量變化。結果：溫度和加熱時間對丹酚酸B的穩定性有較大的影響，乙醇溶液比水溶液更有利于丹酚酸B的穩定。結論：生產過程中應將濃縮溫度控制在60 ℃以下，時間在4 h以內，且溶液中丹酚酸B濃度高有利于穩定。

關鍵詞 丹參 丹酚酸B 穩定性

中圖分類號：R284.2； TQ461 文獻標識碼：B 文章編號：1006-1533（2014）21-0078-03

Study on the thermal stability of salvianolic acid B

JIN Yingshen

（Shanghai Green-Valley Pharmaceutical Co.， Ltd.， Shanghai 201203， China）

ABSTRACT Objective： To examine the influence of different factors on the stability of salvianolic acid B and to provide an experimental basis for their application in industrial production. Methods： Changes in the content of salvianolic acid B were determined by HPLC. Results： There was a significant effect of temperature and heating time on the stability of salvianolic acid B and salvianolic acid B was more stable in alcohol solution than in water. Conclusion： The temperature for the concentration of salvianolic acid B should be controlled below 60 ℃ and time within 4 hours，and higher concentrations of salvianolic acid B in the alcohol solution are of benefit to its stablity in the production process.

KEY WORDS salvia； salvianolic acid； stability

丹參來源于唇形科多年生草本植物丹參的干燥根及根莖，是我國傳統中藥之一。丹酚酸（salvianolic acids）是丹參藥效成分中水溶性的酚酸類成分，具有較強的抗脂質過氧化和清除自由基作用，丹酚酸A和丹酚酸B是其中含量最高、活性最強的2個成分，抗心肌缺血與缺氧的活性比丹參素和原兒茶醛都強，近年來的研究表明，丹酚酸具有保護心肌細胞、抗動脈粥樣硬化、防心腦缺血損傷、抗血小板凝聚、抗肝纖維化、改善記憶、抗腫瘤等作用[1-3]。丹酚酸不穩定，在水溶液中易降解，對溫度很敏感，在高溫、高壓下很容易降解為丹參素等物質[4-6]。

丹參多酚酸鹽是我公司的主要產品之一，是從丹參中提取的1組酚酸鹽類成分，其中丹酚酸B的含量高達80%以上，丹酚酸類成分達100%，為了穩定產品質量和得率，我們對產品生產的工藝進行了研究，掌握了影響丹酚酸B穩定性的因素及關鍵工藝參數和操作方法，報道如下。

儀器、試劑與材料

Agilent 1100高效液相色譜儀，Agilent紫外檢測器，色譜柱Zorbax C18（4.6 mm×25 cm，5 μm）；METTLE AG135電子天平；HH-S11-2-S電熱恒溫水浴鍋。

丹參藥材來自山東庫山；丹參提取液來自公司生產車間。

乙腈為色譜純；甲醇、甲酸為分析純。

丹參素鈉（中國藥品生物制品檢定所110855-200508，純度>98%）；咖啡酸（中國藥品生物制品檢定所111562-200605，純度>98%）、丹酚酸B（中國藥品生物制品檢定所110885-200102，純度>98%）。

丹酚酸B的分析方法

高效液相色譜條件與系統適用性試驗用色譜柱：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-甲酸-水（30：10：1：59）為流動相；流速1 ml/min，檢測波長286 nm；進樣體積10 μl；理論塔板數按丹酚酸B峰計算應不低于2 000。

丹酚酸B對照品溶液的配制：取丹酚酸B對照品適量，精密稱定，加入體積分數75%的甲醇溶液，制成質量濃度為0.14 mg/ml的丹酚酸B對照品溶液。

實驗方法

丹酚酸B不穩定，易受溫度、加熱時間、光照、溶液pH、溶液性質、添加劑等因素影響而產生降解。在工業化生產過程中，溫度和受熱時間是必須考慮的可控因素；選用全封閉的管道化生產可以不考慮光照對其的影響；調節溶液的pH及添加劑，不利于藥品品質的控制和GMP管理。因此，在生產過程中主要對溫度、時間、濃度等因素進行考察。

溫度和時間對乙醇溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份濃度為10%的丹酚酸B乙醇溶液100 ml置于錐形瓶中，分別放入40 ℃、60 ℃、80 ℃水浴搖床中（150 rpm）5 h、4 h、3 h，每隔15 min取樣，測定丹酚酸B的含量。以含量為縱坐標，時間為橫坐標，繪制在不同溫度下丹酚酸B的變化曲線圖。判斷短時間恒定溫度加熱對丹酚酸B含量的影響情況，分析溫度對丹酚酸B乙醇溶液穩定性的影響。

溫度和時間對水溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份濃度為10 mg/ml的丹酚酸B水溶液100 ml置于錐形瓶中，分別放入40 ℃、60 ℃、80 ℃水浴搖床中（150 rpm）5 h、4 h、3 h，每隔15 min取樣，測定丹酚酸B的含量。以含量為縱坐標，時間為橫坐標，繪制在不同溫度下丹酚酸B的變化曲線圖。判斷短時間恒定溫度加熱對丹酚酸B含量的影響情況，分析溫度對丹酚酸B水溶液穩定性的影響。

溶液中丹酚酸B濃度對丹酚酸B含量的影響

將3份濃度分別為2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B濃度的水溶液100 ml置于錐形瓶中，分別放入60 ℃的水浴搖床中（150 rpm）4 h，每隔15 min取樣，測定丹酚酸B的含量。以含量為縱坐標，時間為橫坐標，繪制在相同溫度下不同丹酚酸B濃度的變化曲線圖。分析濃度對丹酚酸B穩定性的影響。

結果

溫度和時間對乙醇溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份丹酚酸B乙醇溶液分別放入不同溫度水浴中，測定不同時間下丹酚酸B的含量，結果如圖1所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降較快，加熱3 h后，丹酚酸B的含量為初始含量的91.52%，高溫對丹酚酸B的降解影響較大；在60 ℃下加熱4 h，丹酚酸B含量略有下降，溫度在60 ℃下對丹酚酸B的降解影響很小；而在40℃下加熱5 h，丹酚酸B含量幾乎沒有下降，說明低溫對丹酚酸B的降解影響甚微。考慮到溫度升高有利于溶劑的蒸發，加快濃縮進程，所以選擇60 ℃為蒸發溫度較為適宜。

溫度和時間對水溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份丹酚酸B水溶液分別放入不同溫度水浴中，測定不同間隔時間下丹酚酸B的含量，結果如圖2所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降較快，加熱3 h后，丹酚酸B的含量為初始含量的94.35%，高溫對丹酚酸B的降解影響較大；在60 ℃下加熱4 h，丹酚酸B含量略有下降，溫度在60 ℃下對丹酚酸B的降解影響很小；而在40 ℃下加熱5 h，丹酚酸B含量下降很小，說明低溫對丹酚酸B的降解影響甚微。考慮到較高溫度有利于溶劑的蒸發，加快濃縮進程，對于丹酚酸水溶液的濃縮，選擇60 ℃為蒸發溫度較為適宜。

同時，對比圖1和圖2可以看出，在較高的溫度下（80 ℃）醇溶液中丹酚酸B的降解速度高于水溶液，如在80 ℃下加熱3 h，醇溶液中丹酚酸B的含量為初始含量的91.52%，低于水溶液中的94.35%；但在低的溫度下（60 ℃和40 ℃），丹酚酸B水溶液中丹酚酸B的降解速度高于醇溶液，提示在較低溫度下，丹酚酸B在醇溶液中的穩定性較好。

不同濃度和時間對水溶液中丹酚酸B穩定性的影響

將3份濃度分別為2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B濃度的水溶液別放入不同溫度水浴中，測定不同間隔時間下丹酚酸B含量的變化（圖3）。。

低、中、高濃度丹酚酸B水溶液中的丹酚酸B的降解速度為低濃度>中濃度>高濃度，提示水溶液中高濃度的丹酚酸B穩定性較好。考慮到工業生產中損耗和設備等因素，濃度升高損耗也會相應增加，因此在設備條件允許的情況下，保持丹酚酸B高濃度比較適宜。

討論

不論是水溶液體系或醇溶液體系，溫度和加熱時間對丹酚酸B的穩定性都有顯著性影響，丹酚酸B在高溫下降解迅速，低溫下降解緩慢，工藝選擇在60 ℃真空狀態下加熱，在降低丹酚酸B降解速度的同時，也加快了溶劑的揮發，縮短濃縮時間。

醇溶液體系與水溶液體系相比，醇溶液更有利于丹酚酸B的穩定，故對于醇溶液可適當提高乙醇的含量。

溶液中丹酚酸B的濃度對丹酚酸B的穩定性也有較大影響，高濃度有利于丹酚酸B的穩定。

根據穩定性實驗結果，高溫和長時間加熱不利于丹酚酸B的穩定，在濃縮工藝中應控制溫度在60 ℃以下，加熱時間控制在4 h以內。醇溶液體系和高濃度有利于丹酚酸B的穩定。

在丹酚酸B生產過程中，工藝參數較為復雜，特別是生產過程中人為控制因素較多。在工業化生產過程中應積累數據，將關鍵指標量化，變人為控制為自動化控制，變主觀判斷為客觀指標，使生產過程智能化，從而降低人為差錯，提高控制的精確度，減少環境因素的影響。丹酚酸產品中丹酚酸B的含量達80%以上，丹酚酸類成分的含量達100%，但是，質量標準中并沒有明確產品中的其他丹酚酸類成分及其含量，對雜質成分也沒有明確，為了保證產品質量，有必要對其進行進一步考察，從而進行控制，保證產品有效成分的穩定、均一。

參考文獻

杜冠華， 張均田. 丹參水溶性有效成分丹酚酸研究進展[J]. 基礎醫學與臨床， 2000， 20（5）： 394-398.

李朝霞， 王地. 丹參水溶性成分的研究進展[J]. 北京中醫， 2004， 23（3）： 176-178.

黃詒森， 張均田. 丹參中三種水溶性成分的體外抗氧化作用[J]. 藥學學報， 1992， 27（2）： 96-100.

倪力軍， 鄔科芳， 張立國. 加熱方式對丹酚酸提取物質量的影響[J]. 中藥新藥與臨床藥理， 2006， 17（1）： 55-57.

張軍， 王鳳云， 詹麗玲， 等. 丹參藥材提取液中丹酚酸B穩定性影響因素的考察[J]. 中國中藥雜志， 2005， 30（10）： 789-790.

岳喜典， 曲桂武， 李桂生， 等. 丹參酚酸B在水溶液中的穩定性研究[J]. 中草藥， 2005， 36（2）： 205-207.

（收稿日期：2014-06-13）

溫度和時間對水溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份濃度為10 mg/ml的丹酚酸B水溶液100 ml置于錐形瓶中，分別放入40 ℃、60 ℃、80 ℃水浴搖床中（150 rpm）5 h、4 h、3 h，每隔15 min取樣，測定丹酚酸B的含量。以含量為縱坐標，時間為橫坐標，繪制在不同溫度下丹酚酸B的變化曲線圖。判斷短時間恒定溫度加熱對丹酚酸B含量的影響情況，分析溫度對丹酚酸B水溶液穩定性的影響。

溶液中丹酚酸B濃度對丹酚酸B含量的影響

將3份濃度分別為2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B濃度的水溶液100 ml置于錐形瓶中，分別放入60 ℃的水浴搖床中（150 rpm）4 h，每隔15 min取樣，測定丹酚酸B的含量。以含量為縱坐標，時間為橫坐標，繪制在相同溫度下不同丹酚酸B濃度的變化曲線圖。分析濃度對丹酚酸B穩定性的影響。

結果

溫度和時間對乙醇溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份丹酚酸B乙醇溶液分別放入不同溫度水浴中，測定不同時間下丹酚酸B的含量，結果如圖1所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降較快，加熱3 h后，丹酚酸B的含量為初始含量的91.52%，高溫對丹酚酸B的降解影響較大；在60 ℃下加熱4 h，丹酚酸B含量略有下降，溫度在60 ℃下對丹酚酸B的降解影響很小；而在40℃下加熱5 h，丹酚酸B含量幾乎沒有下降，說明低溫對丹酚酸B的降解影響甚微。考慮到溫度升高有利于溶劑的蒸發，加快濃縮進程，所以選擇60 ℃為蒸發溫度較為適宜。

溫度和時間對水溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份丹酚酸B水溶液分別放入不同溫度水浴中，測定不同間隔時間下丹酚酸B的含量，結果如圖2所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降較快，加熱3 h后，丹酚酸B的含量為初始含量的94.35%，高溫對丹酚酸B的降解影響較大；在60 ℃下加熱4 h，丹酚酸B含量略有下降，溫度在60 ℃下對丹酚酸B的降解影響很小；而在40 ℃下加熱5 h，丹酚酸B含量下降很小，說明低溫對丹酚酸B的降解影響甚微。考慮到較高溫度有利于溶劑的蒸發，加快濃縮進程，對于丹酚酸水溶液的濃縮，選擇60 ℃為蒸發溫度較為適宜。

同時，對比圖1和圖2可以看出，在較高的溫度下（80 ℃）醇溶液中丹酚酸B的降解速度高于水溶液，如在80 ℃下加熱3 h，醇溶液中丹酚酸B的含量為初始含量的91.52%，低于水溶液中的94.35%；但在低的溫度下（60 ℃和40 ℃），丹酚酸B水溶液中丹酚酸B的降解速度高于醇溶液，提示在較低溫度下，丹酚酸B在醇溶液中的穩定性較好。

不同濃度和時間對水溶液中丹酚酸B穩定性的影響

將3份濃度分別為2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B濃度的水溶液別放入不同溫度水浴中，測定不同間隔時間下丹酚酸B含量的變化（圖3）。。

低、中、高濃度丹酚酸B水溶液中的丹酚酸B的降解速度為低濃度>中濃度>高濃度，提示水溶液中高濃度的丹酚酸B穩定性較好。考慮到工業生產中損耗和設備等因素，濃度升高損耗也會相應增加，因此在設備條件允許的情況下，保持丹酚酸B高濃度比較適宜。

討論

不論是水溶液體系或醇溶液體系，溫度和加熱時間對丹酚酸B的穩定性都有顯著性影響，丹酚酸B在高溫下降解迅速，低溫下降解緩慢，工藝選擇在60 ℃真空狀態下加熱，在降低丹酚酸B降解速度的同時，也加快了溶劑的揮發，縮短濃縮時間。

醇溶液體系與水溶液體系相比，醇溶液更有利于丹酚酸B的穩定，故對于醇溶液可適當提高乙醇的含量。

溶液中丹酚酸B的濃度對丹酚酸B的穩定性也有較大影響，高濃度有利于丹酚酸B的穩定。

根據穩定性實驗結果，高溫和長時間加熱不利于丹酚酸B的穩定，在濃縮工藝中應控制溫度在60 ℃以下，加熱時間控制在4 h以內。醇溶液體系和高濃度有利于丹酚酸B的穩定。

在丹酚酸B生產過程中，工藝參數較為復雜，特別是生產過程中人為控制因素較多。在工業化生產過程中應積累數據，將關鍵指標量化，變人為控制為自動化控制，變主觀判斷為客觀指標，使生產過程智能化，從而降低人為差錯，提高控制的精確度，減少環境因素的影響。丹酚酸產品中丹酚酸B的含量達80%以上，丹酚酸類成分的含量達100%，但是，質量標準中并沒有明確產品中的其他丹酚酸類成分及其含量，對雜質成分也沒有明確，為了保證產品質量，有必要對其進行進一步考察，從而進行控制，保證產品有效成分的穩定、均一。

參考文獻

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岳喜典， 曲桂武， 李桂生， 等. 丹參酚酸B在水溶液中的穩定性研究[J]. 中草藥， 2005， 36（2）： 205-207.

（收稿日期：2014-06-13）

溫度和時間對水溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份濃度為10 mg/ml的丹酚酸B水溶液100 ml置于錐形瓶中，分別放入40 ℃、60 ℃、80 ℃水浴搖床中（150 rpm）5 h、4 h、3 h，每隔15 min取樣，測定丹酚酸B的含量。以含量為縱坐標，時間為橫坐標，繪制在不同溫度下丹酚酸B的變化曲線圖。判斷短時間恒定溫度加熱對丹酚酸B含量的影響情況，分析溫度對丹酚酸B水溶液穩定性的影響。

溶液中丹酚酸B濃度對丹酚酸B含量的影響

將3份濃度分別為2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B濃度的水溶液100 ml置于錐形瓶中，分別放入60 ℃的水浴搖床中（150 rpm）4 h，每隔15 min取樣，測定丹酚酸B的含量。以含量為縱坐標，時間為橫坐標，繪制在相同溫度下不同丹酚酸B濃度的變化曲線圖。分析濃度對丹酚酸B穩定性的影響。

結果

溫度和時間對乙醇溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份丹酚酸B乙醇溶液分別放入不同溫度水浴中，測定不同時間下丹酚酸B的含量，結果如圖1所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降較快，加熱3 h后，丹酚酸B的含量為初始含量的91.52%，高溫對丹酚酸B的降解影響較大；在60 ℃下加熱4 h，丹酚酸B含量略有下降，溫度在60 ℃下對丹酚酸B的降解影響很小；而在40℃下加熱5 h，丹酚酸B含量幾乎沒有下降，說明低溫對丹酚酸B的降解影響甚微。考慮到溫度升高有利于溶劑的蒸發，加快濃縮進程，所以選擇60 ℃為蒸發溫度較為適宜。

溫度和時間對水溶液中丹酚酸B含量的影響

將3份丹酚酸B水溶液分別放入不同溫度水浴中，測定不同間隔時間下丹酚酸B的含量，結果如圖2所示。

在80 ℃下，丹酚酸B含量下降較快，加熱3 h后，丹酚酸B的含量為初始含量的94.35%，高溫對丹酚酸B的降解影響較大；在60 ℃下加熱4 h，丹酚酸B含量略有下降，溫度在60 ℃下對丹酚酸B的降解影響很小；而在40 ℃下加熱5 h，丹酚酸B含量下降很小，說明低溫對丹酚酸B的降解影響甚微。考慮到較高溫度有利于溶劑的蒸發，加快濃縮進程，對于丹酚酸水溶液的濃縮，選擇60 ℃為蒸發溫度較為適宜。

同時，對比圖1和圖2可以看出，在較高的溫度下（80 ℃）醇溶液中丹酚酸B的降解速度高于水溶液，如在80 ℃下加熱3 h，醇溶液中丹酚酸B的含量為初始含量的91.52%，低于水溶液中的94.35%；但在低的溫度下（60 ℃和40 ℃），丹酚酸B水溶液中丹酚酸B的降解速度高于醇溶液，提示在較低溫度下，丹酚酸B在醇溶液中的穩定性較好。

不同濃度和時間對水溶液中丹酚酸B穩定性的影響

將3份濃度分別為2 mg/ml、4 mg/ml、8 mg/ml的丹酚酸B濃度的水溶液別放入不同溫度水浴中，測定不同間隔時間下丹酚酸B含量的變化（圖3）。。

低、中、高濃度丹酚酸B水溶液中的丹酚酸B的降解速度為低濃度>中濃度>高濃度，提示水溶液中高濃度的丹酚酸B穩定性較好。考慮到工業生產中損耗和設備等因素，濃度升高損耗也會相應增加，因此在設備條件允許的情況下，保持丹酚酸B高濃度比較適宜。

討論

不論是水溶液體系或醇溶液體系，溫度和加熱時間對丹酚酸B的穩定性都有顯著性影響，丹酚酸B在高溫下降解迅速，低溫下降解緩慢，工藝選擇在60 ℃真空狀態下加熱，在降低丹酚酸B降解速度的同時，也加快了溶劑的揮發，縮短濃縮時間。

醇溶液體系與水溶液體系相比，醇溶液更有利于丹酚酸B的穩定，故對于醇溶液可適當提高乙醇的含量。

溶液中丹酚酸B的濃度對丹酚酸B的穩定性也有較大影響，高濃度有利于丹酚酸B的穩定。

根據穩定性實驗結果，高溫和長時間加熱不利于丹酚酸B的穩定，在濃縮工藝中應控制溫度在60 ℃以下，加熱時間控制在4 h以內。醇溶液體系和高濃度有利于丹酚酸B的穩定。

在丹酚酸B生產過程中，工藝參數較為復雜，特別是生產過程中人為控制因素較多。在工業化生產過程中應積累數據，將關鍵指標量化，變人為控制為自動化控制，變主觀判斷為客觀指標，使生產過程智能化，從而降低人為差錯，提高控制的精確度，減少環境因素的影響。丹酚酸產品中丹酚酸B的含量達80%以上，丹酚酸類成分的含量達100%，但是，質量標準中并沒有明確產品中的其他丹酚酸類成分及其含量，對雜質成分也沒有明確，為了保證產品質量，有必要對其進行進一步考察，從而進行控制，保證產品有效成分的穩定、均一。

參考文獻

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倪力軍， 鄔科芳， 張立國. 加熱方式對丹酚酸提取物質量的影響[J]. 中藥新藥與臨床藥理， 2006， 17（1）： 55-57.

張軍， 王鳳云， 詹麗玲， 等. 丹參藥材提取液中丹酚酸B穩定性影響因素的考察[J]. 中國中藥雜志， 2005， 30（10）： 789-790.

岳喜典， 曲桂武， 李桂生， 等. 丹參酚酸B在水溶液中的穩定性研究[J]. 中草藥， 2005， 36（2）： 205-207.

（收稿日期：2014-06-13）