時間分辨免疫熒光法檢測乙型肝炎病毒血清標志物的研究

呂榮敏（廣西壯族自治區賀州市鐘山縣人民醫院 542600）

乙型肝炎（乙肝）屬于感染類疾病，是由乙型肝炎病毒（HBV）感染所引起的，是目前臨床危害最嚴重、流行最廣泛的病毒性肝炎類疾病之一［1］。有關報道稱，就我國2005～2010年乙肝流行病學特征，發現乙肝的發病率呈整體上升趨勢，2010年后呈下降趨勢，報道中以慢性乙肝為主，占92%左右。HBV 感染后可造成多種臨床后果，其中包括非活動性HBV攜帶狀態、自限性感染、慢性乙肝及肝硬化等［2］，所以對于乙肝的早期診斷、治療很重要，診斷乙肝的傳統方法要參照血清免疫學的HBV 檢測，現代醫學診斷中運用聚合酶鏈反應（PCR）等一類高敏感性方法并結合免疫組織化學法進一步檢測血清中病毒DNA，雖然如此，利用血清標志物檢測仍是目前重要的臨床診斷、判斷病毒感染者傳染性及病程的方法［3］。傳統上臨床實驗室主要采用酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢測HBV 血清標志物，近年來，時間分辨免疫熒光法（TRFIA）也逐漸應用于臨床，本文通過收集180例乙肝或疑似乙肝的臨床血清標本，分別采用TRFIA 和ELISA 檢測乙型肝炎病毒表面抗體（HBsAb）、乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、和乙型肝炎病毒核心抗體（HBcAb）、乙型肝炎病毒e抗體（HBeAb）5項指標，比較兩種方法檢測結果差異。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2011年1月至2013年1月在本院就診的乙肝或疑似乙肝患者180例，其中男92例，女88例；年齡19～76歲，平均48.5歲。

1.2 方法所有患者采血前均6h禁食禁水，空腹抽取5mL靜脈血，3000r／min離心10min將血清分離，保存于－80℃的冰箱內待檢［4］。分別采用ELISA 和TRFIA 兩種方法檢測180例患者的臨床血清標本的HBsAb、HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBeAb 5個指標。按照本院及科室標準的操作程序規定利用AT2000時間分辨免疫熒光分析儀進行TRFIA 檢測；利用新波生物AT2000時間分辨免疫熒光分析儀及配套原廠試劑盒進行ELISA 檢測［5］。

1.3 檢測結果判定 ELISA 判斷標準為HBsAb、HBsAg、HBeAg的結果均為患者的血清標本A值／陰性對照，平均A值小于2.1可判斷為陰性，平均A值大于或等于2.1可判斷為陽性；HBeAb（COV）＝（陽性對照平均OD值＋陰性對照平均A值）／2，COV≤A值為陰性，COV＞A值為陽性。HBcAb判定按照1∶20的比例將血清稀釋，COV＝0.5×陰性對照平均A值，標本COV≤A值為陰性，標本COV＞A值為陽性。TRFIA 法判斷標準為HBsAb 參考值0～10mIU／nd，HBsAg的參考值為0～0.5ng／mL，HBeAg參考值0～0.03ncu／mL，HBcAb參考值0～0.1ncu／mL，HBeAb參考值0～1.5ncu／mL，超過以上參考值即可診斷為陽性。一致性的強弱程度按照Koch和Landis以κ系數的大小劃分區段來判斷，極差為κ＜0，微弱為0≤κ≤0.2；弱為0.2＜κ≤0.4；中度為0.4＜κ≤0.6；高度為0.6＜κ≤0.8；極強為0.8＜κ≤1.0。

1.4 統計學處理采用SPSS13.0統計軟件進行處理，計數資料以率表示，比較采用χ2檢驗，用μ檢驗排除抽樣誤差的影響。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

采用TRFIA 方法檢測HBV 血清標志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb 的陽性率為47.1%、41.1%、44.4%、58.9%、48.9%，采用ELISA 法檢測的陽性率分別為48.3%、42.2%、42.2%、57.8%、52.2%，兩組陽性率差異無統計學意義（P＞0.05）；κ值范圍為0.68～0.83，其中HBsAb最高而HBeAb最低，μ值范圍為8.97～17.98，其中HBsAb 最高而HBeAb最低。兩種方法檢測5個指標的效率表現出極強或高度一致性，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 ELISA 和TRFIA 兩種方法檢測HBV 血清標志物的結果比較情況

3 討論

有關資料表明，全球現在已有約3億人患有乙肝，我國大約有0.93億人攜帶HBV［6］。慢性肝炎患者主要臨床表現為疲乏、肝區不適、肝大、食欲減退、面色暗黃、蜘蛛痣等；重性肝炎的主要臨床表現為黃疸迅速加深、肝臟進行性縮小、患者計算能力下降、精神異常、嗜睡，出現少尿、無尿、血尿等現象。

臨床實驗室檢測HBV 血清標志物的方法很多，其中以ELISA 最為常見，TRFIA 也逐漸應用與臨床，本研究采用ELISA 和TRFIA 兩種方法檢測HBsAb、HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBeAb 5項指標，通過檢測結果可發現TRFIA 和ELISA 兩種方法檢測5種HBV 血清標志物的結果陽性率表現出極強或高度一致性，其中兩種方法檢測血清HBsAb指標表現為極強一致性，其他4項指標表現為高度一致。雖然兩種方法間未發現明顯差異，但ELISA 在檢測HBsAg指標上出現6例漏檢，說明此方法的敏感性稍低，所以臨床在診斷可能發生病毒變異或處于病毒復制期的患者應結合DNA、HBV 和YMDD 的基因檢測結果進行綜合分析，以利于明確診斷［7－8］。

總之，在應用TRFIA、EL1SA 對乙肝血清標志物進行檢測時，其結果會保持高度的一致性，這便于結果互認。

［1］崔凡，邵曉敏.時間分辨免疫熒光法檢測HBV 血清標志物的對比分析［J］.醫學檢驗與臨床，2012，23（3）：18－20.

［2］劉濤，王彥朝.不同方法學檢測乙型肝炎肝炎血清標志物結果評價［J］.中國醫藥指南，2013，11（8）：121－122.

［3］朱麗坤.不同方法學檢測乙型肝炎血清標志物結果的評價分析［J］.按摩與康復醫學：中旬刊，2011，2（10）：22.

［4］張登燦.時間分辨免疫熒光技術檢測3項血清指標的臨床應用［J］.檢驗醫學與臨床，2011，8（14）：1769－1771.

［5］吉飛躍，錢開成.確證TRFIA 檢測乙肝病毒表面抗體結果的研究［J］.標記免疫分析與臨床，2011，18（1）：33－35.

［6］李先莉.時間分辨免疫熒光技術在乙型肝炎病毒標志物測定中的應用［J］.檢驗醫學與臨床，2012，9（5）：602－603.

［7］Thompson AJ，Nguyen T，Iser D.Serum hepatitis B surface antigen and hepatitis B e antigen titers：disease phase influences correlation with viral load and intrahepatic hepatitis B virus markers.［J］.Hepatology，2010，51（6）：1933－1944.

［8］陳興文.前S2抗原、HBV 血清標志物與HBV－DNA 檢測結果的相關性探討［J］.檢驗醫學與臨床，2009，6（12）：959－960.